Tincion of Capsula Foundation and Techniques

De capsule kleuring Het is een differentiële kleuringstechniek die eigenaar is van de eigenschap van het benadrukken van de polysacharidestructuur die bepaalde bacteriën en gisten omringt, capsule genaamd. Het wordt gebruikt in klinische laboratoria om de diagnose van bepaalde pathologieën te helpen veroorzaakt door kapselsuleerde micro -organismen.

Het wordt ook gebruikt in onderwijse laboratoria voor de demonstratie van deze morfologische structuur aan studenten van de gezondheidswetenschappen, zoals: geneeskunde, bioanalyse, verpleegkunde of cytotechnologie, onder andere.

Klebsiella pneumoniae smeer geverfd met capsulekleuring. Indiase inktmethode met safranine. Bron: а.Af.В [Public Domain]

Er zijn verschillende eenvoudige technieken om de aanwezigheid van de capsule in de micro -organismen die het bezitten aan te tonen, deze zijn: de negatieve kleuring, de kleuring van Anthony en een variant die de vorige twee combineert.

Negatieve kleuring wordt voornamelijk gebruikt in CSF -monsters wanneer de aanwezigheid van gist wordt vermoed Cryptococcus neoformans. Deze gist is een veel voorkomende oorzaak van meningitis.

Deze techniek maakt gebruik van nigrosine of Chinese inkt en is gebaseerd op het creëren van een contrast tussen de voorbereidingsbodem en de ondoordringbare capsule van de micro -organisme. De achtergrond is donker geverfd en de capsule is kleurloos. Op deze manier wordt deze structuur gemarkeerd.

Wat betreft de Anthony -techniek, kan worden gezegd dat deze meestal wordt gebruikt in onderwijslaboratoria om de polysaccharidestructuur in bacteriën te demonstreren zoals zoals Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae En Neisseria meningitidis.

Het gebruik van deze techniek voor diagnostische doeleinden is zeer zeldzaam, omdat er andere routinematige tests zijn waarmee deze micro -organismen kunnen worden geïdentificeerd.

[TOC]

Basis

De capsule is een sterke structuur van een polysacharide -aard. Dit beschermt fagocytose micro -organismen en is daarom een ​​moeilijke structuur om door te dringen.

Dat is de reden waarom capsules -instellies gebaseerd zijn op contrast. De kleurstoffen vlekken op de bodem van de voorbereiding terwijl de capsule kleurloos is.

Daarom is de capsule met deze technieken gemakkelijk herkenbaar. Als het micro -organisme geen capsule heeft, zal het niet te onderscheiden zijn met dit type kleuring, omdat alles uit dezelfde kleur zal worden geverfd.

Het kan u van dienst zijn: homologe en analoge structuren (met voorbeelden)

Alle technieken die worden gebruikt om de capsule te kleuren, hebben dezelfde basis, hoewel ze verschillende kleuren en procedures gebruiken.

Technieken parnaar de kleuring van de capsule

-Anthony -vlekken

Anthony's kleuring gebruikt het violette glas als een kleurstof. Dit zal het bacteriële lichaam en de violette kleur achtergrond verven.

Aan de andere kant wordt 20% kopersulfaat gebruikt. Dit dient als een wasoplossing, dat wil zeggen, het verwijdert het overtollige violette glas van het bereiding, waardoor de capsules worden verduidelijkt, maar zonder het bacteriegebied of de achtergrond die de kleur verliest.

Materialen

- Shortasolate Milk.

- Draagbare lamina.

- 1% violet glas.

- 20% kopersulfaat.

- Optische microscoop.

- Onderdompelingolie.

Procedure

Deze techniek bestaat uit:

1. Cultiveer het micro -organisme 36 uur in linespolitiekmelk.
2. Plaats een druppel van het gewas aan het einde van een objecthouder en plaats een druppel violette glas, meng en breidt zich uit met het uiteinde van een andere dia.
3. Buiten en niet de warmte repareren.
4. Was met 20%kopersulfaatoplossing, laat buiten.
5. Observeer de microscoop met onderdompelingsdoelstelling. Zoek naar de uitersten van de uitgebreide.

Het is belangrijk om geen warmte of fix te gebruiken, of om te drogen, omdat dit de capsule beschadigt. Noch wassen met water.

Interpretatie

Korte melk is een uitstekend kweekmedium, omdat het de nodige voedingsstoffen biedt voor het micro -organisme om een ​​prominente capsule te ontwikkelen.

Aan de andere kant zal litmolent melk een dikke en compacte achtergrond vormen die samen met het bacteriële lichaam geverfd wordt geverfd, maar de capsule die het micro -organisme omringt, is kleurloos. Daarom wordt een heldere halo waargenomen rond het bacteriële lichaam.

Kan u van dienst zijn: factoren die de enzymatische activiteit beïnvloeden Grafische weergave van de microscopische observatie van een uitstrijkje van Klebsiella pneumoniae geverfd met de kleuring van Anthony. Bron: gemaakt door auteur MSC. Marielsa Gil.

Voordelen

Het is een eenvoudige techniek om uit te voeren. Het vereist geen fixatie.

Evenzo moet worden opgemerkt dat andere cultuurmedia kunnen worden gebruikt, maar het medium met melk heeft de voorkeur omdat het het voordeel heeft dat het meer prominente capsules biedt.

Nadelen

Het is een beetje meer moeizaam techniek dan negatieve kleuring, en voor visualisatie vereist het wachten op de voorbereiding om te drogen.

-Negatieve kleuring

Materialen

- Schuifbladen.

- Kweekmedium met micro -organisme.

- Chinese of nigrosine -inkt.

- Optische microscoop.

- Fysiologische zoutoplossing.

Procedure

Plaats een druppel fysiologische zoutoplossing op de deksels en los een klein deel van het microbiële gewas op. Het is belangrijk dat de voorbereiding niet erg dik is. Plaats vervolgens een druppel Chinese of nigrosine -inkt en meng.

Vervolgens wordt een deksel op de voorbereiding geplaatst zonder de vloeistof te overschrijden. Het wordt waargenomen bij de microscoop die zich eerst richt op 10x doelwit en gaat vervolgens over naar 40x.

Deze techniek kan ook rechtstreeks op CSF -monsters worden gebruikt. Dat wil zeggen, in plaats van een druppel microbiële cultuur te plaatsen, wordt een druppel geplaatst.

Voordelen

Het is een eenvoudige methode om te presteren en tegelijkertijd economisch. Het vereist geen fixatie of het drogen van de voorbereiding.

Nadelen

Het heeft een nadeel dat het aan de microscoop moet worden waargenomen voordat de voorbereiding droogt, want als dit gebeurt, zullen de micro -organismen contracteren, wat visualisatie moeilijk zal maken.

Aan de andere kant kunnen valse positieven optreden als de analist onervaren is, omdat leukocyten meestal gisten verwarren.

De observatie van gisten met capsule met de Chinese of nigrosinetechniek moet worden beschouwd als een vermoedelijke diagnose van Cryptococcus neoformans Totdat het wordt aangetoond met de teelt.

Dit komt omdat er andere gisten zijn die de oorzaak kunnen zijn van meningitis en niet alleen de Cryptococcus neoformans, zoals die van het geslacht Candida en Rhodotorula, evenals andere soorten Cryptococcus.

Kan u van dienst zijn: acetyl co -enzym aan

Interpretatie

Als er kapsulatiemicro -organismen zijn, zal een donkere achtergrond worden waargenomen, met transparante lichamen die in de vloeistof drijven, die de aanwezigheid van de capsule benadrukken.

Cryptococcus capsule neoformans geverfd met Chinese inkt. Bron: Fotocredit: Content Providers (s): CDC/DR. Leanor Haley [Public Domain]

-Indiase inkttechniek

Deze techniek kan ook worden gedaan met nigrosine. Het is een combinatie van de eerder uitgelegde technieken. Deze techniek maakt gebruik van Violet Crystal en India of Nigrosine Ink.

Het bacteriële lichaam neemt de paarse kleur van het violette glas omdat het negatief wordt geladen, terwijl de nigrosine de bodem van het uitstrijkje kleurt. Als de bacterie een capsule heeft, wordt deze gezien als een transparante halo rond de micro -organisme.

Violet crystal kan worden vervangen door een van deze kleuringen: safranine, basis fuchsine of methyleenblauw.

Materialen

- Violetglas.

- Nigrosine of Indiase inkt.

- Schuifbladen.

- Microscoop.

Procedure

- Cultiveren het micro -organisme in een kweekmedium.

- Plaats een druppel van het gewas aan het einde van een schuifplaat en plaats een druppel Indiase of nigrosine -inkt, meng en breidt zich uit met het einde van een andere dia.

- Lucht droog en repareer het vuur niet.

- Bedek met een violette glasoplossing per 1 minuut, wassen met gedestilleerd water maar zeer subtiel (zachte straal), buiten laat.

- Observeer de microscoop met onderdompelingsdoelstelling. Zoek naar de uitersten van de uitgebreide.

Interpretatie

Een violette bacteriële lichaam en een donkere achtergrond zullen worden waargenomen. De capsule zal, indien aanwezig, kleurloos zijn rond de bacteriën.

Referenties

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Basismicrobiologietechnieken. Bacterieobservatie. Verminderen (biologie). Microbiologiereeks. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Basiskleuring in het microbiologielaboratorium. Mediagraphic.borg. 2014; 3 (1): 10-18. Beschikbaar op: Medigraphic.com
3. Gil M. Negatieve kleuring: fundering, techniek, voor- en nadelen. Redder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. 2009. Bailey & Scott microbiologische diagnose. 12 ed. Argentinië. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR
5. Tankeshwar a. Capsule -vlek: principe, procedure en resultaten. 20199999999999999999999999999999999999999111 2019 2019 20199999 E moetene9999191999998311133113331322111152222222111231311111111111122111111111121111111111111111111111111111 -11111111111a's11111a's1a's1a's1a's1a's1a's D1a's Dam dat ’TO. Medische microbiologie -gids. Beschikbaar in: Microbeonline.com