Hematoxyline-eosinekleuringskenmerken, gebruik, technieken

De Hematoxyline -kleuring - eosine Het is een kleuringstechniek die de combinatie van hematoxyline- en eosinekleuringen gebruikt. Dit paar kleurstoffen is een perfect duo, omdat hematoxyline fungeert als een basiskleurstof en eosine een zure kleurstof is.

De aanwijzing van basis- of zure kleurstoffen verwijst niet naar de pH die ze verkrijgen in oplossing, maar spreekt eerder over het aandeel dat heerst in termen van anionische of kationische belastingen die ze bezitten of door de locatie van de chromofoor.

Cilindrische epitheel gekleurd met hematoxyline - eosine (HE) Bron: Todd Straus en Vladimir Osipov [CC door 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licenties/door/3.0)]

In deze zin wordt hematoxyline beschouwd als een basale (kationische) kleurstof en heeft daarom een ​​affiniteit voor zure structuren, zoals de kern van cellen. Hoewel eosine een zure (anionische) kleurstof is.

Om deze reden wordt deze combinatie van kleurstoffen veel gebruikt om te vlekken. De kernen zijn donkerblauw of paars geverfd en het roze cytoplasma.

Hematoxyline-eosinekleuring is een van de meest gebruikte kleurtechnieken op het gebied van histologie en cytologie, vanwege de gemakkelijke behandeling en lage kosten. Het wordt gebruikt voor de visualisatie van cellen, dikke zenuwvezels en de aanwezigheid van bepaalde weefselmicro -organismen, zoals: parasieten, schimmels en bacteriën, onder anderen.

[TOC]

Kenmerken

Hematoxyline

Hematoxyline is een neutrale kleurstof. De component die kleur (chromofoor) levert, bevindt zich echter in het kationische of basische centrum van de molecuul. Vandaar zijn affiniteit voor zure structuren. De chemische formule is c₁₆H₁₄OF₆ en zijn wetenschappelijke naam 7.11b-dihydroindeno [2,1-C] Chromene-3, 4.6a, 9,10 (6H) -Pentol.

Houd de centra van de cellen voornamelijk, omdat deze zeer rijk zijn aan nucleïnezuren. U kunt ook cytoplasmatische insluitsels van virale oorsprong verven.

Zodat hematoxyline kan verven, moet zich in een geoxideerde toestand bevinden en aan een metaal zijn bevestigd. De laatste zal dienen om naar de stof te kijken, dat wil zeggen, het zal als een mordant fungeren.

Wanneer hematoxyline wordt geoxideerd, wordt hemateïne genoemd. Oxidatie wordt bereikt door blootstelling aan zuurstof (veroudering) van het reagens of door stoffen die de oxidatie ervan helpen (chemische oxidatie).

Het kan u van dienst zijn: methoden voor scheiding van heterogene mengsels

Eosina

Eosina is een kleurstof rood of roze. Het is onoplosbaar in water, hoewel er een hydrosoluble versie is. Over het algemeen bereidt Eosina op het oplossen van alcohol (ethanol op 95).

Stain cytoplasmata, spiervezels, cytoplasmatische organellen en collageen, maar verven geen celcentra. Dit komt omdat het negatief is geladen, daarom heeft het een affiniteit voor positief geladen structuren.

Er zijn twee soorten Eosina de "Y" en de "B". Eosina "y" staat bekend als gele eosina. De wetenschappelijke naam is tetrabrome fl uoresceïne en de chemische formule is c_twintigH₈BR₄OF₅.

Aan de andere kant wordt eosin "B" soms blauwachtig erythrosine B genoemd. De wetenschappelijke naam is dibromodinitro fl uoresceïne en de formule is c_twintigH₈BR₂N₂OF₉. Beide lijken erg op elkaar en het verschil in het gebruik van het een of het andere is niet echt merkbaar. De meest populaire is echter Eosina "Y".

Eosine heeft de eigenschap om onderscheid te maken tussen een levende en dode cel, omdat het alleen in staat is om het membraan over te steken om zijn cytoplasma te verven wanneer de cellen dood zijn, waardoor het cytoplasma van de kleurloze cel blijft als het leeft.

Toepassingen

Nerveuze vezelvlekken

Met hematoxyline-eosine kunnen dikke zenuwvezels worden geverfd en geïdentificeerd. Het is echter niet nuttig om de dunne zenuwvezels te kleuren, omdat om de laatste te visualiseren een zilverkleuring nodig is.

Tinions van histologische huidsneden

In de randen van de hoornvlieslaag van de huid is de kleurstof die werkzaam is, omdat de cellen op dit niveau geen kern hebben.

In de granuloselaag van de huid vlekken hematoxyline -vlekken sterk op de keratohialinekorrels die in de korrelige cellen worden gevonden. Integendeel, de doornige laag van de huid is zwak geverfd met hematoxyline, terwijl de basale of kiemlaag als deze behoorlijk is gekleurd.

Eosine vlekt het cytoplasma van alle cellen en kleurintensiteit kan variëren tussen de ene laag en de andere.

Kleuring kleuring met hematoxyline-eosine

Gómez en medewerkers, in 2005 hebben ze aangetoond dat kleuring met hematoxyline -eosine effectiever was in het identificeren van gevallen van amibiasis door Entamoeba histolytica En Entamoeba ongelijksoort dat de verse visualisatiemethode (zoutoplossing en lugol -oplossing) bij patiënten met acute diarree -ziekte.

Kan u van dienst zijn: secundaire alcohol: wat is, structuur, eigenschappen, gebruik

Er werd ook aangetoond dat het een grote gevoeligheid heeft om erythrofagocytose te detecteren (amoeba's die fagocyten erytrocyten hebben).

Kleuring van histologische sneden voor de diagnose van infectie

Walwyn en medewerkers stelden ze in 2004 het gebruik van histologische kleuring voor om micro -organismen te detecteren die infecties veroorzaken.

Het gebruik van de kleuring van hematoxyline-eosine slaagde erin om infecties te visualiseren veroorzaakt door Clostridium, Actinomyces, Spiriel of Candida. Ze slaagden er ook in om de aanwezigheid van de parasiet te observeren Sarcoptes escabiei In lederen sneden en virale insluitsels door cytomegalovirus en herpes in sneden van verschillende weefsels.

Technieken

Voor histologische monsters

De kleuring van histologische sneden gaat door een reeks stappen. De eerste is om het histologische snijden te verkrijgen. Dit moet parafined zijn en vervolgens de sneden (ultra-fin) verkrijgen met een microtoom. De techniek bestaat uit de volgende stappen:

1-malmatie van overtollige paraffine: Xilol of Hemo -D kan worden gebruikt, gedurende 3-5 minuten onderdompelen.

2-reliëf van de steekproef: Dit wordt bereikt door het monster onder te dompelen in verschillende concentraties alcoholen (ethanol) in afnemende volgorde (100 °, 90 °, 70 °). In alle gevallen gedurende 7 minuten.

3-eliminatie van overtollige alcohol: Om dit te doen, wordt het 7 minuten ondergedompeld in water.

4-verzameling met hematoxyline: Het monster wordt 6-10 minuten ondergedompeld op een dienblad dat hematoxyline bevat. De belichtingstijd hangt af van de grootte en dikte van het monster.

5-eliminatie van overtollig hematoxyline: Water werd 5 minuten gewassen en vervolgens wordt een snelle doorgang (10-20 seconden) gemaakt door zure alcohol. Vervolgens vervolgens 5 minuten weer met water gewassen. Vervolgens ondergedompeld in ethanol bij 96 ° per 1 minuut.

6-color met Eosina: Om dit te doen, wordt het monster gedurende 5 minuten in de Eosina -lade ondergedompeld.

7-afbraken van het monster: Om dit te doen, worden de alcoholbakken (ethanol) opnieuw doorgegeven, maar deze keer in oplopende volgorde. (70 °, 90 °, 100 °). (Gedurende 5 seconden, 5 seconden, respectievelijk 1 minuut).

Opheldering van 8 monsters: Dit wordt gedurende 5-10 minuten blootgesteld aan de xylol en droogt droogt om permanent af te dichten met Canada Balm of ander soortgelijk materiaal.

Voor ontlasting monsters op zoek naar EN. histolytica

In een lamel een uitgebreid met de uitwerpselen van de patiënt en is het vastgelegd met 80% alcohol gedurende 5 minuten. Het vel is 5 minuten ondergedompeld in hematoxyline en wordt onmiddellijk gewassen met water.

Kan u van dienst zijn: bijdragen van chemie aan geneeskunde

Vervolgens wordt het snel ondergedompeld in zure alcohol en vervolgens in ammoniakaal water. Was met water. Het wordt 5 minuten gekleurd in Eosina. Het monster wordt uitgedroogd zoals uitgelegd in de vorige techniek en uiteindelijk opgehelderd met Xileno.

Reagensvoorbereiding

- Hematoxyline

Los 50 gram kalium of ammoniumaluminiumsulfaat op in een liter gedestilleerd water in een liter van gedestilleerd water. Als u volledig opgelost bent, voegt u 1 gram gekristalliseerd hematoxyline toe. Wanneer het in zijn geheel oplost, wordt 1 gr gram citroenzuur bij elkaar toegevoegd met 50 gr van chloorhydraat en 0,2 gr gram natriumjodinus.

Het mengsel wordt 5 minuten gekookt, dan is het toegestaan ​​om te koelen en gefilterd om de vaste deeltjes te elimineren die zijn gebleven. Het aldus bereid reagens kan onmiddellijk worden gebruikt.

- Eosina

Het kan worden voorbereid met alcoholische of waterige basis.

Alcoholische eosine

In 100 ml ethanol bij 95 ° lost 0,5 gram Eosina "y" op. Voeg vervolgens een paar druppels ijsazijn toe.

2% waterige eosine

Los in 1250 ml gedestilleerd water 25 gram eosine "y" hydrosolubly op. Voeg vervolgens een paar druppels ijsazijn toe.

Zure alcohol

Meet 0,5 ml geconcentreerd zoutzuur en volledige 100 ml met absolute alcohol.

Ammoniakaal water

Meet 0.5 ml geconcentreerde ammoniak en volledig 100 ml met gedestilleerd water.

Referenties

1. Navarrete, g. Huidhistologie. Rev fac med unam 2003; 46 (4): 130-133. Beschikbaar op: Medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela of.
3. Identificatie van de Entamoeba histolytica/e. ongelijksoortig Voor de verse Amiba-techniek versus zijn kleuring met hematoxyine-eosine in acute diarree. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Beschikbaar op: Medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Nut van histologische technieken voor de diagnose van infectie in anatomische stukken. Rev Cub med mil, 2004; 33 (2). Beschikbaar bij: Scielo.Sled
5. Panreac Applichem Itw realsjs. Hematoxyline-eosine kleuring. 2017, Spanje. Beschikbaar op: Itwreagts.com
6. 'Eosina." Wikipedia, gratis encyclopedie. 7 november 2018, 08:18 UTC. 4e 2019, 22:13 is.Wikipedia.borg
7. "Hematoxyline." Wikipedia, gratis encyclopedie. Mei 2019, 11:23 UTC. 4e 2019, 22:48 Wikipedia.borg