Voges-proskauer test wat is, fundering, voorbereiding, gebruik

Hij Voges-ProSkauer-test Het is een biochemische test die wordt gebruikt om de identificatie te helpen van bacteriën die tot de familie Enterobacteriaceae behoren. Vooral is nuttig om spanningen te onderscheiden van Escherichia coli van Klebsiella en Enterobacter, onder andere.

De test wordt uitgevoerd in het vloeibare kweekmedium genaamd Red Methyl-Voges Proskauer, beter bekend met het acroniem RM/VP. Dit medium bestaat uit gebufferd polypeptone, glucose, dipotassiumfosfaat en gedestilleerd water.

Rode metil van metilo-voges proskauer (RM/ VP)/ positieve en negatieve VP-test respectievelijk. Bron: Foto gemaakt door de MSC -auteur. Marielsa Gil/ Sudipta.Nov15 [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licenties/by-sa/3.0)], van Wikimedia Commons

Het huidige RM/VP -medium is een modificatie van het Clark en Subs -medium, dat oorspronkelijk minder concentratie peptones en glucose bevatte. Daarom was er minder hoeveelheid waterstofionen, vereist voor de positieve reactie van Voges-Proskauer.

De test is gebaseerd op de capaciteit van het micro-organisme van het gebruik van glucose door de butylén-glycolische route en vormt een neutraal eindproduct genaamd acetoine, in aanwezigheid van zuurstof en een alkalische pH.

In het RM/VP-medium kunt u, naast het kunnen onthullen van de Voges-ProSkauer-test, ook de Metiliaanse rode test onthullen.

Basis

Foundation of the Voges-Proskauer Test

Pluripeptonen aanwezig in het midden bieden de onmisbare voedingsvereisten voor bacteriegroei. Glucose van zijn kant is de belangrijkste verbinding. Veel bacteriën hebben het vermogen om glucose te metaboliseren en pyruvinezuur te vormen.

Pyruvinezuur is een middelpunt in glucosemetabolisme en vanaf daar kan elk micro -organisme verschillende paden nemen. Sommigen zullen gemengde zuren vormen, zoals melkzuur, azijnzuur, mierenzuur en figininezuur, en anderen zullen neutrale producten vormen zoals 2,3.

Het kan je van dienst zijn: Flora en Fauna vanuit Mexico City

De Voges-Proskauer-test onthult de capaciteit van het micro-organisme van het vormen van acetylmethylcarbinol (acetoine), een intermediair product van 2,3-butdiol in aerobiose-omstandigheden.

Acetoine is verminderd en 2,3-butnediol-vorm, maar deze reactie is omkeerbaar, daarom als 2,3-butdiol wordt geoxideerd. Daarom is zuurstof onmisbaar.

Dipotassiumfosfaat is de buffer die het mengsel tot een pH 6,9 ± 0,2 dempt.

Basis voor de ontwikkeling van het bewijs en de interpretatie

Om de reactie te tonen, moet een openbaring worden uitgevoerd met behulp van twee reagentia (barrit -reagentia), bekend als Voges A en Voges B.

Voges A is een 5% a-naftol-oplossing en Voges B is een 40% kaliumhydroxidebereiding. Als kaliumhydroxide niet beschikbaar is, kan dit worden vervangen door 40% natriumhydroxide.

Α-naftol is een katalysator die de intensiteit van de kleur van de reactie zal vergroten, wat de meest gevoelige test maakt. De a-naftol moet altijd eerst worden toegevoegd, waarbij de buis wordt geroerd zodat het medium in contact komt met zuurstof. Op deze manier wordt de huidige acetoine geoxideerd tot diacetyl, en het 2,3-butnediol wordt geoxideerd om acetoine te vormen, door het door te geven aan diacetyl.

Dit is hoe α-nttol zich zal aansluiten bij de diacetyl, die op zijn beurt zich heeft aangesloten.

Van zijn kant is kalium of natriumhydroxide verantwoordelijk voor het absorberen van CO₂ En om met de peptones te reageren. Deze reactie ontstaat de vorming van een roze-zeemonkleur, duidelijk zichtbaar na het zeer goed roeren van de buis.

Kan u van dienst zijn: weefselniveau van organisatie: kenmerken en voorbeelden

Om de kleur onmiddellijk te laten plaatsvinden, moeten correcte hoeveelheden diacetyl, pepton en a-naftol worden gemengd. Als dit niet gebeurt, mag de buis 15 minuten rusten voordat u interpreteert.

De test is over het algemeen positief na 2 tot 5 minuten, wanneer u een zwakke roze kleur ziet. Als het gedurende 1 uur in rust wordt achtergelaten, is de intensiteit van de kleur maximaal (intens rood).

Een negatieve test zal worden bewezen wanneer de bouillon geel is. Na 1 uur, als de test negatief is, kan een koperachtig kleurproduct van de reactie van kaliumhydroxide op a-naftol worden gevormd.

Voorbereiding

Middle RM/VP

Weeg 17 gr van gedehydrateerde cultuur en lost op in een liter gedestilleerd water. Laat 5 minuten staan. Verwarm op tot koken om volledig op te lossen. Serveer 3 tot 4 ml in buizen en steriliseer 15 minuten in autoclaaf bij 121 ° C.

Het gedehydrateerde kweekmedium is beige en het voorbereide medium is licht amber.

De uiteindelijke pH van het medium is 6,9 ± 0,2.

Voges reagens a

Weeg 5 gr van α-naftol en lost op in 50 ml ethylalcohol (absoluut). Vervolgens voegt het toevoegen van ethylalcohol zelfs Enrasar op 100 ml.

Voges reagens B

Weeg 40 gr van kaliumhydroxide en lost op in 50 ml gedestilleerd water in een beker. Het glas moet in een koud waterbad worden geplaatst om de temperatuur te regelen, omdat het op het moment van het oplossen van de voorbereiding sterk stijgt.

Nadat de oplossing koud is, wordt deze overgebracht naar een gehakte bal en spoelt deze op 100 ml met gedestilleerd water.

Het kan u van dienst zijn: bloedagar

Voges-ProSkauer-testprocedure

Om de Voges-Proskauer-test uit te voeren, wordt een RM/VP-bouillon geïnoculeerd met het onderzochte micro-organisme, van een zuiver gewas van 18 tot 24 uur.

Het inoculum moet niet erg dicht zijn. 35-37 ° C zijn 24 tot 48 uur incuba, hoewel incubatie gedurende meerdere dagen soms nodig is. Cowan en Steel geloven dat 5 dagen de minimale incubatietijd is die nodig is om alle positieve soorten van de Voges-ProSkauer (VP) van de Enterobacteriae-familie te detecteren.

Test onthuld

Scheid een hoeveelheid van 1 ml in een buis en maak de ontwikkeling als volgt: plaats 12 druppels (0,6 ml) van de Voges A en 4 druppels (0,2 ml) Voges B. Meng naar de lucht en laat 5 - 10 minuten staan ​​voordat u interpreteert. Als de test echter nog steeds negatief is, laat dan staan ​​en de buis na 30 minuten tot 1 uur observeren.

Het uiterlijk van een roze rode kleur geeft aan dat de reactie van de Voges-proskauer positief is. Als het medium geel blijft, is de reactie negatief.

De toevoeging van de onthullen in de orde en de aangegeven hoeveelheid is essentieel om valse negatieven te voorkomen.

Gebruik

Voges-proskauer-test is handig voor het differentiëren tussen stammen van EN. coli die negatieve VP zijn, van de Klebsiella -genres, Enterobacter, Serratia, onder andere, die positief zijn VP.

Bron: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e ed. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR. Argentinië.

QA

Om de kwaliteit van het voorbereide medium te testen, kunt u bedieningselementen gebruiken, inclusief Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus Mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium en Enterobacter riool ATCC 13047.

De verwachte resultaten zijn alleen positieve voges-proskauer-reacties K. longontsteking En EN. Cloacae. De rest geeft negatieve reacties.

Referenties

1. Britania Laboratories. MR-VP-gemiddelde. Beschikbaar op: www.Britanialab.com