Bacterieel uitstrijkje wat is, kenmerken en voorbereiding

Hij Bacterieel uitstrijkje Het is een uitbreiding in de vorm van een dunne film van een suspensie van bacteriële micro -organismen die wordt gemaakt op een transparante glazen plaat of dia, voor observatie onder een optische microscoop.

De uitbreiding in de vorm van een film wordt uitgevoerd om de micro -organismen zoveel mogelijk te scheiden, omdat als de observatie is gegroepeerd niet duidelijk is.

In de studie van bacteriële gewassen worden uitstrijkjes, bevestiging en kleurbereidingstechnieken gebruikt om ze beter te analyseren. Vanwege de kleine omvang van micro -organismen is het gebruik van een optische microscoop voor observatie noodzakelijkerwijs vereist.

Optische microscopen zijn onmisbare instrumenten voor de waarneming van het uitstrijkje. Deze gebruiken optische lenzen en licht waardoor de visualisatie van monsters met een grote toename in grootte mogelijk is.

Over het algemeen hebben levende cellen geen grotendeels gekleurde structuren, uitzicht op optische microscoop zijn kleurloos, transparante monsters en vertonen zeer weinig intern contrast en met hun omgeving.

De observatie met de eenvoudige optische microscoop van een helder veld, zonder het gebruik van hulpkleuringstechnieken, is zeer beperkt en wordt alleen gebruikt in sommige gevallen, zoals bij de observatie van de micro -organisme -beweging.

Voor de observatie van micro -organismen optimaal is het noodzakelijk om een ​​evenwicht te bereiken tussen het contrast en de resolutie. De details van de cellen kunnen niet worden waargenomen bij de microscoop, zelfs met hoge resolutie; Het gebruik van kleurstoffen door kleurtechnieken is vereist, die het contrast voor observatie bijdragen.

Kenmerken van een bacteriële uitstrijk van goede kwaliteit

Uitstekend contrast

Om een ​​uitstekend contrast te bereiken, zijn er geavanceerde microscopen genoemd Fase -contrastmicroscoop, differentiële interferentie en donkere veldmicroscoop. Dit type microscoop wordt gebruikt om onder andere bacteriestructuren zoals pods en filamenten te observeren.

Kleuring is een eenvoudige techniek om het contrast te vergroten dat wordt bereikt met een duidelijke veldmicroscoop. In deze techniek kunnen verschillende kleurstoffen worden gebruikt die de microscoopobservatie aanzienlijk verbeteren.

De kleuring wordt rechtstreeks op de uitstrijkjes of uitbreidingen van de micro -organisme -suspensies op de dia's gemaakt, eerder gedroogd en gefixeerd.

Goed opgelost

Fixing is een techniek die wordt gebruikt om cellulaire structuren te behouden; veroorzaakt inactivering van micro -organismen en hechting aan het glas van de dia. Er zijn verschillende bevestigingsbehandelingen: warmtefixatie en chemische fixatie.

Kan u van dienst zijn: palmitolzuur: structuur, functies, waar is het

Warmtefixatie

Dit is de meest gebruikte methode bij de observatie van bacteriële uitstrijkjes. De techniek bestaat uit het passeren van de uitstrijkbacteriële suspensie door de vlam van een lichter. Deze techniek is in staat om de externe morfologie van bacteriën te behouden, maar vernietigt zijn interne structuren.

Chemische fixatie

Chemische fixatie maakt gebruik van chemische stoffen in het behoud, zoals formaldehyde of formaline, ethanol en azijnzuur, onder andere. Het voordeel van het gebruik van het fixeren van chemische middelen is dat het behoud van de interne cellulaire structuren van micro -organismen wordt bereikt.

Bloedvlek. Bron: bobjgalindo [gfdl (http: // www.GNU.Org/copyleft/fdl.html) of cc by-sa 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licenties/by-sa/4.0)], van Wikimedia Commons

Goede vlekken

De meest voorkomende procedures om de kleuring van een eerder drogende en vaste uitstrijkjes uit te voeren zijn de positieve of eenvoudige kleuring, de differentiële kleuring en negatieve kleuring. Er zijn ook speciale technieken voor het kleuren van bepaalde celstructuren (capsule, sporen, flagella).

Positieve kleuring of eenvoudige vlekken

De positieve of eenvoudige kleuring is de meest gebruikte smeerslagtechniek. Gebruik kleurstoffen die de mogelijkheid hebben om bepaalde microbiële structuren aan te sluiten, waardoor ze ze kunnen observeren bij de microscoop.

Deze kleurstoffen hebben chromoforeuze groepen (gekleurd gedeelte) in hun chemische structuur, met alternatieve dubbele bindingen en eenvoudige bindingen (conjugatie). Deze links kunnen op hun beurt ionische of covalente bindingen vaststellen met sommige cellulaire structuren.

De kleurstoffen die worden gebruikt in de positieve of eenvoudige kleuring zijn meestal chemische derivaten van de aniline (gekleurde organische zouten).

Aan de andere kant, onder de kleurstoffen kunnen we een paar vinden met basis pH en anderen met zure pH.

Basiskleurstoffen

In basiskleurstoffen heeft de chromofoorgroep een positieve elektrische lading. De overgrote meerderheid van de prokaryotische micro -organismen heeft een interne neutrale pH en hun celoppervlak heeft een negatieve belasting. Door deze elektrostatische interactie is chromofoor bindend aan de cel en kleurstof.

Voorbeelden van basiskleurstoffen zijn onder andere methyleenblauw, violet glas, malachietgroen, basiszekering, safranine.

Zure kleurstoffen

In zure kleurstoffen heeft de chromofoorgroep een negatieve elektrische lading. Deze worden gebruikt voor eiwitkleuring met positieve ladingsgroepen. Voorbeelden van zure kleurstoffen zijn zure zekering, Bengaalse roos, Congo Red en Eosin.

Het kan u van dienst zijn: propage: wat is, types en hun kenmerken

Differentiële kleuring

De differentiële kleurtechniek is om twee kleurstoffen van verschillende kleuren of intensiteit toe te passen, om microscoopmicroscoop te onderscheiden. Gramkleuring en zuur-alcoholweerstand kleuring zijn de meest gebruikte differentiële kleuring in bacteriologie.

Gram's kleuring wordt gebruikt als een voorlopige test om de vorm, grootte, celgroep te kennen, naast het type celwand. Door gram kleurtest, worden celwandbacteriën geclassificeerd als gram positieve bacteriën en gram negatieve bacteriën.

Negatieve kleuring

In deze techniek worden chemische kleurstoffen gebruikt die geen cellulair interieur binnendringen, maar het medium maken waarin de micro -organismen zijn als een zwarte achtergrond.

In de negatieve kleurtechniek wordt het uitstrijkje bereid met een druppel Chinese of nigrosine -inktophanging, die na het toestaan ​​van drogen bij kamertemperatuur een ondoorzichtige film vormt naar de doorgang van het licht. Op deze manier worden micro -organismen waargenomen als heldere vormen op een donkere achtergrond.

Voorbereiding

NAAR. Smeren

1.- Was heel goed de glijbanen, droog met absorberend papier en label ze. Het label moet de inhoud van de voorbereiding, datum en naam van degenen die het hebben verwerkt aangeven.

2.- Steek de lichter aan en steriliseer de inoculatiehandgreep in de vlam naar rood levend.

3.- Laat het handvat.

4.- Neem de bacteriële gewasbuis, verwijder de dop en passeer snel de monding van de buis nabij de lichtere vlam (vlam).

5.- Voer de inoculatiehandgreep in in de buis die de bacteriekweek bevat en neem het monster.

6.- Als het gewas in vloeistof is, plaats dan het monster genomen met het handvat in het midden van de schuif en verleng het zorgvuldig in een cirkel met een diameter van ongeveer 2 cm.

7.- Steriliseer de inoculatiehandgreep.

8.- Laat het droog van het uitstrijkje in de lucht toe.

9.- Herhaal de stappen van 3 naar 8 drie keer.

10.- Als het gewas vast is, moet een druppel gedestilleerd water eerder op de dia worden geplaatst. Dit wordt gedaan om een ​​klein monster van het gewas te mengen dat is genomen met de inoculatiehendel, volgens de indicaties van stappen 2 tot 5 (Asepsis -omstandigheden).

Het kan u dienen: Ontwikkelingsbiologie: geschiedenis, welke studies, toepassingen

elf.- Verleng het monster verdund met de druppel water op de dia en herhaal drie keer.

B. Fixatie

1.- Voeg toe aan de droge smeer -crop -leraren in vloeibare medium -twee druppels methanol of absolute ethanol.

2.- Laat lucht drogen weg van de aansteker.

3.- Als het uitstrijkje uit een vaste cultuur komt, wordt de vaste van de droge geur gemaakt met warmte, waardoor het 2 tot 3 keer snel wordt doorgegeven.

4.- Raak de bodem van het uitstrijkje aan met het dorsale deel van de linkerhand (voor rechtshandige; anders, gebruik de rechterhand) en controleer of het koud is.

C. Eenvoudige vlekken

1.- Voeg toe aan de uitstrijkjes 2 druppels van de geselecteerde kleurstof en laat handelen voor de tijd die nodig is in de specifieke protocollen van elke kleurstof (meestal tussen 1 en 5 minuten).

2.- Sommige kleurstoffen vereisen warmtegebruik voor activering, in welk geval u heel voorzichtig moet zijn bij het verwarmen van de bagage in de vlam van de aansteker (manipuleren deze met pincet en het vermijden van koken). Een oververhitting van het uitstrijkje kan de gewenste cellen vernietigen.

3.- Verwijder de overtollige kleurstof wassen met gedestilleerd water uit een foto. Waswater elimineren, voorzichtig de dia raken voor zijn lied, hellend op de werktafel.

4.- Laat luchtdrogen toe.

5.- Afhankelijk van het type observatie wordt in dit stadium een ​​dekking gebruikt of niet. De bedekking en bewaart het uitstrijkje. Als in dit stadium een ​​olieduikobservatie wordt uitgevoerd, wordt het uitstrijkje niet gebruikt, maar het uitstrijkje kan niet worden bewaard.

D. Definitief behoud van uitstrijkje

1.- Dompel het uitstrijkje achtereenvolgens onder in elk van de hieronder aangegeven oplossingen, gedurende minimaal 5 minuten. Het doel van deze "badkamers" is om het uitstrijkje volledig uitgedroogd te laten. Elk reagens moet goed worden afgevoerd, voordat u het uitstrijkje in de volgende badkamer betreft.

De volgorde van dehydraterende baden is als volgt:

1. 70 % ethanol
2. 95 % ethanol
3. Pure aceton
4. Acetonmengsel -xilol 1: 1
5. Xilol

Laat dan luchtdrogen toe.

2.- Monteer de dekens, bij voorkeur 22 × 22 mm, met behulp van Canada Balm of andere middelen voor montage.

Referenties

1. Cappucino, J.G. en Welch, c.T. (2017). Microbiologie: een handmatig laboratorium. Pearson.
2. Holt, J.G. Editor. (1977). The Shorter Bergey's Manual of Degeling Bacteriology. 8^e Baltimore: The Williams and Wilkins Co.