Tetrationate bouillon wat is, fundering, voorbereiding, gebruik

Hij Tetrationate bouillon o tt bouillon is een selectief vloeibare kweekmedium voor de verrijking en herstel van stammen van het geslacht Salmonella. Het is gemaakt door Müeller en later aangepast door Kauffmann, dus er zijn mensen die hem Müeller-Kauffmann Broth noemen.

Het oorspronkelijke medium bevatte Peptonas -eiwit, calciumcarbonaat en natriumthiosulfaat. Kauffmann voegde galzouten toe en creëerde een andere modaliteit met Bright Green. Deze stoffen remmen de groei van coliformen, waardoor het vrije medium voor de ontwikkeling van pathogene bacteriën achterblijft, in dit geval Salmonella.

Aggregaat van de jodure jodure -oplossing voor de tetrationato -bouillon. Bron: Manuel Almagro Rivas [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licenties/by-sa/4.0)]

De aanpassing was zeer succesvol omdat de gevoeligheid van het medium aanzienlijk toenam. Daarom is het momenteel handig voor het zoeken naar Salmonellas in elk type monster, maar vooral voor vaste of vloeibare uitwerpselen en voedsel.

De voorbereiding ervan bestaat uit twee fasen; Het commerciële medium is een basis voor het bereiden van de tetrationato -bouillon, en later zodat de tetrationato kan worden gevormd een jodure -oplossing die het medium voltooit.

De American Public Health Association (APHA) beveelt het gebruik van de Tetrationate -bouillon aan, aangevuld met heldergroen voor de verrijking van monsters op zoek naar Salmonella, omdat het selectiever is dan de Tetrationate -bouillon en de Selenito -bouillon.

In het algemeen is de tetrationato -bouillon ideaal wanneer de aanwezigheid van bacteriën van het Salmonella -geslacht in kleine hoeveelheden wordt vermoed of die worden mishandeld door blootstelling aan remmende stoffen of door industriële processen die hun levensvatbaarheid minimaliseren.

Basis

De aanwezige peptones komen overeen met digreatcaseïne en gedrigrreteerd digreal maagweefsel maag. Deze bieden de bron van koolstof, stikstof en voedingsstoffen in het algemeen voor bacteriegroei.

Kan u dienen: mastozoologie: oorsprong, welke studies, voorbeeld van onderzoek

Van zijn kant reageert natriumthiosulfaat met de jodide -oplossing om tetrationato te vormen. Dit remt de groei van coliformen en bevordert de ontwikkeling van bacteriën die het enzym Tetrationato -reductase bevatten, waaronder de geslacht Salmonella, maar ook proteus.

Galzouten fungeren ook als een remmende substantie van de meest positieve grambacteriën en sommige gram -negatief (coliformen).

Calciumcarbonaat absorbeert de toxische stoffen die worden gegenereerd door de ontleding van tetrationato, die zwavelzuur vormt. In die zin neutraliseert calciumcarbonaat de zuurgraad die de pH van het stabiele medium behoudt.

In het geval van de modaliteit met briljant groen, verhoogt deze stof de selectieve kracht van de tetrationaatbouillon door andere andere micro -organismen te remmen dan het geslacht Salmonella.

Voorbereiding

-Tetrationate bouillon

Iodurada jodiumoplossing

Wegen:

• 6 gr van jodium.
• 5 gr van kaliumjodide.

Kaliumjodide lost op in ongeveer 5 ml steriel gedestilleerd water, waarna het jodium beetje bij klein wordt toegevoegd terwijl het mengsel wordt verwarmd. Nadat het volledig is opgelost, is het gelijk met steriel gedestilleerd water totdat het een laatste volume van 20 ml bereikt.

Halfbasis voor Tetrationato -bouillon

Weeg 46 gram van het gedehydrateerde medium en hangen in 1 liter steriel gedestilleerd water. Meng en verwarm tot zijn totale oplossing, kan slechts enkele minuten leiden. Steriliseer niet in autoclaaf. De basis van het medium mag tot 45 ° C ongeveer afkoelen en op dat moment wordt 20 ml van de jodure -oplossing toegevoegd.

Na het toevoegen van de georodeerde oplossing aan het medium, moet deze onmiddellijk worden gebruikt. Als u niet het hele mengsel wilt gebruiken, ga dan als volgt verder:

Kan u van dienst zijn: intra -specifieke concurrentie: kenmerken, typen en voorbeelden

10 ml van het basismedium is verdeeld in buizen, en alleen aan degenen die met monsters worden geïnoculeerd, worden 0,2 ml van de georodureerde oplossing toegevoegd.

Degenen die niet zullen worden gebruikt, kunnen nog steeds worden opgeslagen in de koelkast, maar omdat het medium niet wordt gesteriliseerd, is het ideaal om de exacte hoeveelheid te bereiden die nodig is.

De kleur van het medium voordat de jodide -jodide -oplossing wordt toegevoegd, is melkachtig wit met wit neerslag en is na aggregaat bruin met een dicht neerslag. Het waargenomen neerslag is normaal en komt overeen met het calciumcarbonaat dat niet is opgelost. De uiteindelijke pH van het medium is 8,4 ± 0,2.

-Tetrationate bouillon variant met felgroen

Om de Tetrationato -bouillon met felgroen te bereiden, worden alle hierboven beschreven stappen uitgevoerd, maar bovendien wordt deze toegevoegd aan het mengsel van de 0,1% heldere groene oplossing voorbereid.

Glanzend groen

Deze oplossing wordt als volgt bereid:

Weeg 0,1 gr van felgroen en hangen in 100 ml gedestilleerd water. Verwarm op tot koken om zijn totale oplossing te bereiken. Bespaar in barnsteenfles.

Gebruik

Voor feces -monsters (coproulture) is het protocol als volgt:

Inoculeer 1 gr van stevige ontlasting of 1 ml vloeibare ontlasting in een buis met 10 ml tetrationate bouillon klaar voor gebruik. Strek sterk uit en incubeer aerobiose bij 43 ° C gedurende 6-24 uur.

Neem vervolgens een hoeveelheid van 10 tot 20 µl van de bouillon en stijg in een selectief medium voor Salmonella, zoals SS Agar, XLD Agar, Bright Green Agar, Hektoen Enteric Agar, onder andere.

Tegelijkertijd moeten selectieve middelen voor Salmonella worden geïnoculeerd met het directe monster (feces) zonder verrijking. Download voor rectale wattenstaafjes het materiaal dat in de buis is verzameld en ga verder op de hierboven beschreven manier.

Kan u dienen: lipogenese: kenmerken, functies en reacties

Voor voedselmonsters weegt 10 grief vast voedsel of 10 ml vloeibaar voedsel en inoculeer een fles met 100 ml tetrationate bouillon klaar voor gebruik. Ga op dezelfde manier verder als hierboven beschreven maar incubeer 37 ° C.

Zoals te zien is, zal de relatie tussen de steekproef en de bouillon altijd 1:10 zijn.

QA

Om het kweekmedium te testen, kunt u bekende stammen gebruiken. De meest gebruikte zijn ATCC -gecertificeerde stammen.

De te gebruiken stammen zijn Salmonella Typhimurium ATCC 14028, Salmonella Abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 en Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Voor Salmonella -stammen wordt een uitstekende ontwikkeling verwacht, terwijl Escherichia coli Het kan zwakke of regelmatige ontwikkeling hebben, en gram positieve stammen (Enterococcus en Staphylococcus) zijn gedeeltelijk of volledig geremd.

aanbevelingen

-Aangezien dit medium de groei van proteus niet remt, plaatsen sommige laboratoria meestal 40 mg/L novobiocine om de ontwikkeling van deze microbiële stam te voorkomen. Het antibioticum moet worden toegevoegd vóór de jodo -oplossing van de joduur.

-Na het voorbereiden van het medium inclusief de joduur jodiumoplossing, zou het niet meer dan 2 uur moeten besteden om te worden geïnoculeerd.

-Op het moment van het verdelen van het medium in de buizen moet het mengsel continu worden gehomogeniseerd om het gevormde neerslag te resuspenden.

-In minder vervuilde monsters worden de 35-37 ° C-monsters geïncubeerd en in zeer vervuilde monsters wordt de incubatie bij 43 ° C aanbevolen.

Referenties

1. BBL Media. 2005. Bereid in buis voor de teelt van de salmonella -soorten.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Bailey & Scott microbiologische diagnose. 12 ed. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR. Argentinië.