Thayer Martin Agar wat is, fundering, voorbereiding, gebruik

Hij Thayer Martin Agar Het is een zeer voedzaam en selectief vast medium voor het isolement van Neisseria Meningitidis en Neisseria Gonorrhoeae; beide bekend als pathogeen of klinisch belang.

Een van de belangrijkste speciale functies gepresenteerd door de Thayer Martin Agar is het hoge gehalte aan voedzame supplementen. Deze eigenschap is onmisbaar, omdat neisserieën zeer veeleisende micro -organismen zijn vanuit voedingsoogpunt en daarom niet groeien in gewone media.

Aan de andere kant, omdat deze micro -organismen normaal worden aangetroffen in niet -steriele gebieden, is de toevoeging van remmers die de groei van de bijbehorende flora voorkomen, zonder de ontwikkeling van het geslacht Neisseria te beïnvloeden.

Deze agar bestaat uit GC -basisagar, hemoglobine, extra voedingssupplementen en een complex van remmende stoffen (antibiotica en antischimmelmiddelen). Commerciële huizen verkopen elk van de supplementen afzonderlijk.

De steekproef om in dit medium te zaaien, hangt af van het gezochte micro -organisme. Voor Neisseria gonorrhoeae Ideale monsters zijn vaginale en urethrale secreties. Terwijl Neisseria meningitidis De meest gebruikte monsters zijn CSF, Exsudates Pharyngeal en Nasopharyngeal.

Basis

Neisserieën zijn micro -organismen gecatalogiseerd als vervelend en daarom is hun isolatie moeilijk.  Daarom is Thayer Martín een complex medium en elk van zijn componenten vervult een functie die hieronder wordt uitgelegd:

GC Base Agar

De GC -agar bevat peptoneiwit, maïszetmeel, natriumchloride, dipotassiumfosfat. De componenten bieden basisvoedingsstoffen voor microbiële ontwikkeling, neutraliseren toxische vetzuren, dragen bij aan het handhaven van de osmotische balans, definiëren de pH en zorgen voor een vaste consistentie voor het milieu.

Hemoglobine

Hemoglobine biedt factoren V en X (respectievelijk nicotinamide adenine dinucleotide NAD en Hemina). Daarom groeit in dit medium ook soorten uit Haemophilus. Hemoglobine kan commercieel uitgedroogd worden of kan vers gedefibrineerde runder toevoegen aan de omgeving.

Kan u van dienst zijn: biogenetische elementen

Verrijkingssupplement

Aan de andere kant moet het Thayer-Martin-medium ook een verrijkingssupplement worden toegevoegd, omdat de voedingsstoffen die de basisagar bevat niet voldoende zijn voor de vereisten van het geslacht Neisseria.

Het meest gebruikte verrijkingssupplement wordt Isavalex genoemd. Dit bevat glutamine, adenine, NAD, cocarboxylase, guanine, ferrisch nitraat, benzoisch p-aminozuur, vitamine B12, thiamine en glucose. Al deze verbindingen zijn nodig voor de goede ontwikkeling van pathogene neisserieën.

Remmers

Omdat het een zeer voedzaam medium -remmers is die de groei van micro -organismen uit de gebruikelijke flora van het gebied voorkomen en dus de voorkeur geven aan de isolatie van het geslacht Neisseria.

Het remmercomplex bestaat uit vancomycine, colistine en nistatine. Vancomycin inhibits the growth of gram positive bacteria, colistin prevents the development of gram negative bacteria such as pseudomonas and some saprophytic neisseries, and nistatin acts on yeasts as yeasts such as Candida albicans.

Toen werd de Thayer Martin Agar echter gewijzigd; De veranderingen bestonden uit de toevoeging van trimetoprim, de toename van de hoeveelheid agar en het aggregaat van extra glucose. Deze veranderingen verbeterden het herstel van de soort van de soort van Neisseria gonorrhoeae.

Opgemerkt moet worden dat de trimetoprim de groei van het eiwitgenre en de daaruit voortvloeiende zwermingsvorming ervan remt. In die zin zijn antibiotica die die het selectieve karakter bieden aan de medium thayer Martin.

Voorbereiding

Thayer Martin Original Agar

-GC Agar

Weeg 8,2 gr van het gedehydrateerde GC -medium en schorsen op 100 ml. Meng en kook gedurende 1 minuut met frequente agitatie om in zijn geheel op te lossen. Steriliseer het mengsel in autoclaaf bij 121 ° C gedurende 15 minuten.

Kan u van dienst zijn: aspectenproces: kenmerken en fasen

-2% hemoglobine

Suspend 2 gr van gedehydrateerd hemoglobine in 2 of 3 ml heet gedestilleerd water om een ​​uniform mengsel te vormen. Voeg geleidelijk water toe om een ​​volume van 100 ml te voltooien. De schorsing moet homogeen zijn voordat hij steriliseert.

Steriliseer 15 minuten in autoclaaf.

-Verrijkingssupplement

Reconstitueer de commerciële flacon met het verdunningsmiddel van hetzelfde commerciële huis. Goed mengen. De hoeveelheid verdunde om te gebruiken wordt gespecificeerd in de kitinstructie.

-Remmingssupplement v.C.N (vancomycine, colistine, nistatine)

Reconstitueer de flacon met het verdunningsmiddel van het commerciële huis. Goed mengen. De hoeveelheid verdunde om te gebruiken wordt gespecificeerd in de kitinstructie.

-Voorbereid

Voor elke 100 ml GC Agar gaat als volgt verder:

Wanneer de GC -agar de autoclaaf verlaat, laat u afkoelen tot een geschatte temperatuur van 50 ° C en voegt u 2 ml van de voorbereide hemoglobine -oplossing, 2 ml van het verrijkingssupplement (Isoobalex of Bralex) en 2 ml remmingssupplement toe. Meng en serveer in petri -steriele platen.

Laat stollen en opslaan in de koelkast tot gebruik.

De kleur van het voorbereide medium is kersenrood. De uiteindelijke pH van het medium is 7,2 ± 0,2

Thayer Martin Agar is aangepast

Weeg 8,2 gr van het gedehydrateerde GC -medium en schorsen op 100 ml. Voeg 1 gr van agar-water toe en voeg 0,3 gr grucose toe. Meng en kook gedurende 1 minuut met frequente agitatie om in zijn geheel op te lossen. Steriliseer het mengsel in autoclaaf bij 121 ° C gedurende 15 minuten.

Bereid hemoglobine- en verrijkingssupplement voor zoals hierboven beschreven.

Het gebruikte remmingssupplement is V.C.N.T (vancomycine, colistine, nistatine, trimetoprim).

Kan u van dienst zijn: pre -evolutionistische theorieën, zijn auteurs en ideeën

-Voorbereid

Ga verder op de manier die wordt beschreven voor de Thayer Martin Original Agar.

Gebruik

Thayer Martin Agar moet humeur zijn voordat de monsters zaaien. Veelgebruikte monsters zijn faryngeale exsudaten, nasale exsudaten, vaginale, urethrale en/of rectaal en CSF.

Gebruik vers genomen monsters en maak sterke inoculums over de agar. De monsters worden rechtstreeks gezaaid vanwege materiaalafvoer en vielen zich vervolgens op vanwege de uitputting op het oppervlak.

De platen worden 24 tot 48 uur geïncubeerd bij 35-37 ° C in microaerophili-kan (5% CO₂)). Na de incubatietijd worden de platen onderzocht op zoek naar kleine kolonies, grijs en soms mucoid uiterlijk.

Voer gram en bevestigende biochemische tests uit voor verdachte kolonies.

QA

Om kwaliteitscontrole uit te voeren, kan Thayer Martin de volgende microbiële stammen gebruiken.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 en Neisseria meningitidis ATCC 13090; In beide stammen wordt een bevredigende ontwikkeling verwacht.

De volgende stammen moeten ook worden opgenomen: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus Mirabilis ATCC 43071 en Candida albicans ATCC 10231. In allemaal wordt in dit medium een ​​totale of gedeeltelijke remming verwacht.

Beperkingen

-Houd er rekening mee dat in de middelste bacteriën die resistent zijn tegen de gebruikte remmers kunnen groeien.

-Er zijn stammen van Neisseria gonorrhoeae die gevoelig kan zijn voor de gebruikte concentratie van vancomycine. Om deze reden wordt het aanbevolen om parallelle chocolade -agar te gebruiken aangevuld met isovalex, maar zonder remmers.

-Er zijn nistatine -resistente giststammen die in dit medium kunnen groeien en de isolatie van pathogene neisserieën kunnen verstoren, vooral gonokokken.

Referenties

1. Britania Laboratories. Thayer Martin Media Modified. Beschikbaar op: Britanialab.com