Bloedagar

Een bloedbenadering. Met licentie

Wat is bloedagar?

Hij Bloedagar Het is een verrijkt vaste kweekmedium, gebruikt voor het herstel en de groei van een breed scala aan micro -organismen uit klinische of subjectieve monsters.

Dit kweekmedium bestaat in feite uit een verrijkte basisagar en 5% schapenbloed. De agarbasis kan variëren afhankelijk van de behoeften, maar zal voornamelijk bestaan ​​uit peptonas, aminozuren, vitamines, vleesextract, natriumchloride, agar, onder andere. Wat het bloed betreft, menselijk bloed wordt soms gebruikt.

De bloedcollectie kan in het laboratorium worden opgesteld of kan al worden gekocht, van bedrijven die eraan zijn toegewijd. De voorbereiding van dit medium is zeer delicaat, elke onzorgvuldigheid in de uitwerking zal resulteren in een vervuild perceel.

Daarom moeten alle mogelijke voorzorgsmaatregelen worden genomen en uiteindelijk een kwaliteitscontrole uitvoeren die 37 ° C 1 plaat per 100 incubeert die zijn voorbereid.

Basis

Staphylococcus aureus gekweekt in bloedagar. Bron: Nathan lezen op flickr nathan r. Op Twitter, Wikimedia Commons

Bloedagar is een verrijkt, differentiaal en niet -selectief medium. 

• Het is een verrijkt medium omdat het draagt ​​als een hoofdadditief 5-10% bloed op een agar-basis. Beide verbindingen bevatten veel voedingsstoffen waarmee de meeste cultiveerbare bacteriën erin kunnen groeien.
• Die groei treedt op zonder beperking, dus het is niet -selectief. Als er echter verbindingen worden toegevoegd die de groei van sommige micro -organismen voorkomen en die van anderen bevorderen, wordt het selectief. Als bijvoorbeeld bepaalde soorten antibiotica of antischimmels worden toegevoegd.
• Het is differentieel, omdat het 3 soorten bacteriën mogelijk maakt: bèta-hemolytisch, alfa-hemolithisch en gamma-hemolytisch.
• Beta-hemolytisch zijn degenen die de mogelijkheid hebben om te lisar of te voltooien. Voorbeelden van ß-hemolytische bacteriën zijn Streptococcus pyogenes En Streptococcus agalactiae.
• Alpha-hemolytisch zijn die die gedeeltelijke hemolyse uitvoeren, waarbij hemoglobine wordt geoxideerd tot methemoglobine, waardoor een groenachtige kleuring rond de kolonies wordt gegenereerd. Dit fenomeen staat bekend als α of α-hemolyse hemolyse en bacteriën worden geclassificeerd als α-hemolytisch. Voorbeeld van α-hemolytische bacteriën zijn Streptococcus pneumoniae En Streptococcus van de groep Viridans.
• Gamma-hemolytische of niet-hemolytische bacteriën groeien over agar zonder veranderingen erin te genereren, een effect dat bekend staat als γ-hemolyse en micro-organisme zijn γ-hemolithisch. Voorbeeld van γ-hemolytische bacteriën: enkele stammen van Streptococcus van groep D (Streptococcus Bovis en Enterococcus faecalis)).

Toepassingen

• Dit kweekmedium is een van de meest gebruikte in het microbiologielaboratorium. Onder de micro -organismen die in dit medium kunnen groeien, zijn: strikte, optionele, microaerofiele, anaërobe, gram -positieve of gram -negatieve bacteriën, snelle groeimidteriën of langzame groei of langzame groei of langzame groei.
• Sommige veeleisende of irritante bacteriën groeien ook vanuit voedingsoogpunt, evenals schimmels en gisten. Het is nuttig voor subjectieve of reactiverende stammen die metabolisch erg zwak zijn.

Kan u van dienst zijn: cyclopentanoperhydropenantreno: structuur en belang

De keuze van het bloed- en basisagentschap zal echter variëren, afhankelijk van het micro -organisme dat waarschijnlijk zal herstellen en het gebruik dat aan de plaat zal worden gegeven (teelt of antibiogram).

Keuze uit bloedgroep

Bloed kan van lam zijn, konijn, paard of mens.

Het meest aanbevolen is lam bloed, behalve enkele uitzonderingen na. Bijvoorbeeld om soorten van te isoleren Hemophilus, waar aanbevolen bloed paard of konijn is, omdat lamsbloed enzymen heeft die factor V remmen.

Het minst aanbevolen is de mens, hoewel het het meest wordt gebruikt, misschien omdat het het gemakkelijkst is om te verkrijgen. 

Bloed moet worden gedefibreerd, verkregen zonder additief en van gezonde dieren. Voor het gebruik van menselijk bloed moeten in gedachten worden gehouden:

• Als bloed afkomstig is van personen die bacteriële infecties hebben geleden, zullen ze specifieke antilichamen bezitten. Onder deze omstandigheden is het waarschijnlijk dat de groei van sommige bacteriën zal worden geremd.
• Indien verkregen van de bloedbank, bevat het citraat en het is mogelijk dat bepaalde bacteriën zich niet in zijn aanwezigheid ontwikkelen.
• Als bloed afkomstig is van patiënten die antibiotica nemen, kan de groei van gevoelige bacteriën worden geremd.
• En als bloed van een diabetische persoon is, interfereert overtollige glucose de goed ontwikkelende hemolysepatronen.

Keuze van basistarief

Base -agar die wordt gebruikt voor de voorbereiding van het bloedagar kan erg breed zijn. Onder hen zijn: Nutrient Agar, Cerebro Heart Infusion, Triptych Soybeans, Müeller Hinton, Thayer Martin, Columbia Agar, Brucella Agar, Campylobacter Agar, etc.

Gebruik van bloedagar volgens het basismedium dat wordt gebruikt voor de voorbereiding

Voedingsagar

Deze basis wordt het minst gebruikt, omdat ze voornamelijk niet -voorthoudende bacteriën zullen groeien, zoals enterische bacillen, Pseudomonas sp, S. aureus, bacillus sp, onder andere. Het wordt niet aanbevolen om te isoleren Streptococcus.

Cerebro Heart Infusion (BHI)

Het is een van de meest gebruikt als basis, omdat het de nodige voedingsstoffen heeft voor de groei van de meeste bacteriën, inclusief Streptococcus SP en andere veeleisende bacteriën. Hoewel het niet gepast is om hemolysepatronen te observeren.

Met deze basis wordt lamsbloed gebruikt.

U kunt ook bloedagarvarianten voorbereiden, waar andere verbindingen worden toegevoegd om bepaalde micro -organismen te isoleren. Het infusie cerebro -hart is bijvoorbeeld aangevuld met konijnenbloed, cystine en glucose, dient om te isoleren Francisella tularensis.

Terwijl, met Cistina Telurito, het handig is om te isoleren Corynebacterium diphteriae. Menselijk of lam bloed kan worden gebruikt.

Kan u van dienst zijn: biotisch potentieel

Met de eerste zal bèta-trimolyse worden gezien als een smalle halo, terwijl met de tweede de halo veel breder zal zijn.

Deze basis, samen met bacitracine, maïszetmeel, paardenbloed en andere verrijkingssupplementen (isovalex), wordt gebruikt voor genderisolatie Haemophilus SP Van ademhalingsmonsters.

Als de combinatie van chlooramfenicol-gentamycine of penicilline-stoffyine antibiotica met paardenbloed wordt toegevoegd, dient het om de eisende pathogene schimmels te isoleren, zelfs met een hogere prestatie naar de Sabouraud-glucose-agar. Vooral is nuttig in afzondering van Histoplasma capsulatum.

Triptyse Soja Agar

Deze basis is het meest aanbevolen om het hemolysepatroon en de realisatie van diagnostische tests, zoals Opto -Corner en Bacitracine -belastingen, beter te observeren. Het is de klassieke bloedagar die door routine wordt gebruikt.

Met deze basis kunt u ook de speciale bloedagar voorbereiden Corynebacterium diphteriae, Met Telurito Cistina En lamsbloed.

De combinatie van dit agarbloed, meer kanamycine-vancomycine, is vooral ideaal voor anaërobe groei, vooral Bacteroides sp.

Müeller Hinton Agar

Dit bloed wordt aangevuld met bloed wordt gebruikt om het antibiogram van veeleisende micro -organismen uit te voeren, zoals Streptococcus SP. Het is ook handig voor het isoleren van bacteriën zoals Legionel Pneumophila.

Thayer Martin Agar

Dit medium is ideaal als een basis van bloedagar wanneer het vermoeden van het geslacht Neisseria, speciaal Neisseria meningitidis, Gegeven dat N. gonorrhoeae Het groeit niet in bloedagar. Het dient ook om gevoeligheidstests uit te voeren Neisseria meningitidis.

Columbia Agar

Deze basis is uitstekend voor het zaaien van monsters van maagbiopsieën op zoek naar Helicobacter Pylori.

Het medium bereidt 7% van het gedefibreerd lamsbloed met antibiotica (vancomycine, trimetoprim, amfotericine B en cefsulodine) aan om de groei van andere soorten bacteriën die aanwezig kunnen zijn te beperken.

Deze zelfde basis aangevuld met menselijke of lam bloed, nalidíxico en colistinezuur is nuttig om te isoleren Gardnerella vaginalis. Het is ook ideaal om antimicrobiële gevoeligheid voor antibiotica van dezelfde micro -organismen te evalueren.

Bovendien dient het voor de bereiding van bloedagar voor anaërobe teelt, waardoor aminoglycosiden en vancomycine worden toegevoegd. Met deze basis kunnen we hemolysepatronen goed observeren.

Brucella agar

Dit medium dat wordt gebruikt als een bloedbureaubasis, samen met de toevoeging van vitamine K, is ideaal voor de teelt van anaërobe bacteriën. In dit geval wordt het gebruik van lamsbloed aanbevolen.

Kan u van dienst zijn: huid ademhaling: kenmerken en voorbeelden van dieren

Campylobacter Agar

Campylobacter -agar aangevuld met 5% RAM -bloed en 5 antibiotica (cephalotine, amfotericine B, trimetoprim Campylobacter Jejuni In uitwerpselen.

Voorbereiding

Elk commercieel huis brengt de omgekeerde van de verpakking de aanwijzingen om een ​​liter kweekmedium voor te bereiden. De overeenkomstige berekeningen kunnen worden gemaakt om de gewenste hoeveelheid voor te bereiden, volgens de geselecteerde basisagar.

Weeg en oplossen

De basisagar is uitgedroogd (in stof), daarom moet deze worden opgelost in gedestilleerd water aangepast aan pH 7,3.

De hoeveelheid aangegeven door de gekozen basisagar wordt gewogen en opgelost in de overeenkomstige hoeveelheid water in een fixola, dan wordt deze op matige warmte verwarmd en mengt met roterende bewegingen tot het gehele stof.

Steriliseren

Eenmaal opgelost, steriliseer in autoclaaf gedurende 20 minuten bij 121 ° C.

Bloed geaggregeerd

Bij het verlaten van de autoclaaf wordt de fixola afgekoeld totdat de temperatuur tussen 40 en 50 ° C varieert. Het is een temperatuur die de menselijke huid ondersteunt, en tegelijkertijd is de agar nog niet gestold.

Om dit te doen, wordt de fixola aangeraakt met de hand en als de warmte aanvaardbaar is, is dit de ideale temperatuur om het overeenkomstige gedefibrineerde bloed toe te voegen (50 ml per liter agar). Meng om te homogeniseren.

De doorgang van het aggregaat van het bloed is cruciaal, want als het wordt gedaan wanneer het medium erg heet is, zullen de rode bloedcellen breken en het medium niet zal dienen om hemolyse te observeren.

Als het te koud wordt toegevoegd, worden knobbels gevormd en zal het oppervlak van het medium niet glad zijn om het striatum goed te kunnen maken.

Giet in de borden van Petri

Dien direct na het homogeniseren van bloed in steriele petri -platen. In elke petri -plaat wordt ongeveer 20 ml gegoten. Deze procedure wordt uitgevoerd in een laminaire stroombel of nabij de aansteker.

Op het moment van het serveren van bloed op de platen van Petri, mogen luchtbellen niet op het plaque -oppervlak worden achtergelaten. Als dit gebeurt, wordt de vlam van Bunsen's lichter snel op de plaat gepasseerd om ze te verwijderen.

De platen mogen stollen en worden opgeslagen in de koelkast (2-8 ° C) omgekeerd tot gebruik. Voordat ze bloedagarplaten gebruiken, moeten ze temperen om te kunnen zaaien.

De voorbereide platen hebben een geschatte duur van 1 week.

Referenties

1. Bayona, m. Microbiologische omstandigheden voor de teelt van Helicobacter Pylori. Revisie. Kool. Gastro -enterol. 
2. Forbes, B ,, Sahm, D., Weissfeld, een. Bailey & Scott microbiologische diagnose. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR.