Chocoladeagar

Yersinia pestis bacteriën op een chocolade -agar -plaque. Bron: Department of Health and Human Services, Wikimedia Commons

Wat is chocolade -agar?

Hij Chocoladeagar Het is een middel van solide, verrijkte, niet -selectieve en niet -differentiële cultuur. Het wordt voornamelijk gebruikt voor het isoleren van veeleisende micro -organismen vanuit het oogpunt van voedingswaarde, hoewel elk type bacteriën erin kunnen groeien.

Daarom neemt het nut ervan toe, vooral bij bemonsteringsmonsters die normaal steriel zijn, zoals CSF en gewrichtsvloeistof. Hoewel het ook is opgenomen in de media die zijn gekozen voor het planten van polymicrobiële monsters, maar in deze gevallen is het noodzakelijk om antibiotica toe te voegen die de bijkomende flora remt.

Dit medium heeft een karakteristieke bruine kleur die erg lijkt op chocolade, vandaar zijn naam. De preparaat lijkt erg op die van de bloedagar, alleen in dit geval moet het bloed worden verwarmd zodat de rode bloedcellen breken.

De voorbereiding ervan, net als bloedagar, is erg delicaat, omdat het gemakkelijk te verontreinigen is. Daarom geven veel laboratoria de voorkeur aan dit medium dat al is opgesteld door commerciële huizen die hun kwaliteit garanderen.

Basis

Het is samengesteld uit een voedingsstof -rijke agarbasis en verwarmd bloed. Hemolyse van rode bloedcellen verschaffen de middelgrote factor X (Hemina) en Factor V (NAD), noodzakelijk voor de groei van sommige micro -organismen, zoals geslacht Hemophilus. Het is ook erg handig om te isoleren Neisserias SP.

Net als Blood Agar kunnen verschillende media worden gebruikt als basisagentschap, afhankelijk van de noodzaak. Onder de gebruikte media zijn Infusion Cerebro Heart en Crush SoyBeans, hoewel de meest aanbevolen Columbia Agar, Müeller Hinton, GC Agar en Thayer Martin Agar zijn.

Kan u van dienst zijn: eenvoudige diffusie: proces en voorbeelden

Sommige chocolade -agarvarianten omvatten een verrijkt supplement, in de handel verkrijgbaar, genaamd isovalex of polyvitex.

Deze supplementen bevatten vitamine B₁₂, L-glutamine, adenine, guanine hydrochloride, p-aminobenzoic acid, nicotinamide adenine Dinucleotide (NAD), thiamine pyrophosphate, ferric nitrate, thiamine hydrochloride, cysteine ​​​​hydrochloride, l-cistine and glucose.

Het is belangrijk om te benadrukken dat chocolade -agar meer verrijkt is dan bloedagar, maar geen hemolysepatronen toestaat.

Toepassingen

• Chocolade -agar met Columbia Agar: Bevat pancreas caseïne en hart, verteerd vleespeptisch, natriumchloride, agar, gistextract en maïszetmeel. Bovendien is het rijk aan vitamines, mineralen en essentiële aminozuren. Deze basis met verwarmd bloed is ideaal om bacteriën van het genre te isoleren Neisseria. Aan de andere kant, als een supplement wordt toegevoegd aan Brucella, Het bovengenoemde micro -organisme kan worden geïsoleerd. De resultaten zijn verbeterd met behulp van paardenbloed.
• Chocolade -agar met GC Base Agar (voor Gonococci): Bevat peptones, maïszetmeel, monobasische en dibasische buffers, natriumchloride en agar. De meeste commercieel bereide chocolade -outputpresentaties worden geleverd met deze basis en bevatten geen verwarmd bloed, maar een synthetisch mengsel van hemina en een chemisch supplement van groeifactoren, vitamines, mineralen, aminozuren, factor V en glucose.
• Chocolade -agar bereid met Müeller Hinton Agar: Het wordt gebruikt om de antimicrobiële gevoeligheidstest uit te voeren van veeleisende micro -organismen, zoals Streptococcus pneumoniae, Met behulp van 5% verwarmd RAM -bloed. Het dient ook voor het primaire isolement van Neiswerk En Hemophilus, maar in het specifieke geval van het isolement van Hemophilus Het gebruik van paardenbloed heeft de voorkeur, omdat het rijk is aan factor X en V. Aan de andere kant, als het te geplanten monster uit een niet -steversiel gebied komt, wordt de toevoeging van antibiotica aanbevolen om de normale flora van het gebied te remmen. Voorbeeld: voor ademhalingsmonsters waarbij de aanwezigheid van genderbacteriën wordt vermoed Hemophilus bacitracine wordt gebruikt om de groei van te remmen Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus En Neiswerk saprofytes. 
• Chocolade -agar met Thayer Martin Agar: Het is speciaal om te isoleren Neisseria gonorrhoeae. Het moet antibiotica bevatten om de bijbehorende flora te remmen. Lamb Blood wordt gebruikt.

Het kan u van dienst zijn: Flora en Fauna van Zacatecas: meer representatieve soorten

Voorbereiding

De indicaties voor de voorbereiding van de basisagar die zal worden gebruikt, moeten worden gezien. Over het algemeen beschrijven ze hoeveel u moet wegen om een ​​liter kweekmedium voor te bereiden. In het laboratorium kunt u het benodigde exacte bedrag voorbereiden, wat meer of minder kan zijn dan een liter.

Berekeningen

Er wordt een regel van drie gemaakt om te berekenen hoeveel u moet wegen om het gewenste volume voor te bereiden. Voorbeeld:

Als het voor 1 liter nodig is om 40 GR te wegen en het laboratorium 800 ml vereist, wordt gezegd:

1000 ml -40 gram

800 ml - x

De formule zal als volgt zijn:

X = 32 gr (kwantiteit ondanks 800 ml).

Weeg en oplossen

De benodigde hoeveelheid wordt gewogen en in een felola geplaatst met het water.

Het verwarmt op matige hitte en wordt zachtjes gemengd met roterende bewegingen totdat het uitgedroogde medium volledig oplost, waardoor het 1 minuut kookt.

Steriliseren

De fixola wordt geïntroduceerd in de autoclaaf om het medium gedurende 20 minuten bij 121 ° C te steriliseren.

Bloed geaggregeerd

Bij het verlaten van de autoclaaf is het toegestaan ​​tot de temperatuur van het medium ongeveer tussen 56 en 70 ° C is om het bloed te plaatsen en te mengen totdat het medium bruine kleur draait.

Als supplementen zullen worden toegevoegd, is dit het moment om dat te doen. Meng vervolgens 20 ml en serveer 20 ml naar elke steriele petri -plaat.

De gehele procedure moet worden uitgevoerd in een laminaire stroombel of rond de Bunsen -lichter. Laat staan ​​totdat ze stollen en op een omgekeerde manier op een koelkast bewaren.

Een andere manier om chocolade -agar te bereiden zonder bloed te gebruiken

Het basismedium wordt bereid zoals hierboven beschreven, gedehydrateerd hemoglobine verkregen commercieel en gesteriliseerd in de autoclaaf wordt opgelost in de autoclaaf.

Kan u van dienst zijn: HemoolInfa

Beide oplossingen mogen bij 50 ° C afkoelen, het supplement is verbonden en toegevoegd. Meng aseptische omstandigheden en dien vervolgens in petri -steriele platen.

QA

Het is belangrijk dat het bloed op de aangegeven temperatuur wordt geplaatst, omdat het het ideaal is om de rode bloedcellen te lisar en tegelijkertijd factor V te behouden, wat dringbaar is.

Ze mogen geen bubbels zijn op het oppervlak van de agar. Van elke batch van 100 platen moet een of twee platen 24 uur in het fornuis bij 37 ° C worden geïncubeerd om de steriliteit te controleren.

Voor betere resultaten moet chocolade -agar worden gebruikt kort na de voorbereiding.

Bacteriestammen Controles moeten in het laboratorium worden genomen om de effectiviteit van het milieu vers bereid te evalueren voor de groei van de belangrijkste veeleisende micro -organismen van klinisch belang.

Referenties

1. Garcia, p., Muren, f., Fernández del Barrio, m. Praktische klinische microbiologie. Cadiz University. UCA Publications Service.
2. Chocoladeagar. Opgehaald van.Wikipedia.borg.