Negatieve kleuring

Afbeelding van negatieve kleuring van het griepvirus a. Bron: zie pagina voor auteur, Wikimedia Commons

Wat is negatieve vlekken?

De negatieve kleuring Het is een speciale kleurmethode om de aanwezigheid van de capsule in sommige micro -organismen te benadrukken -vooral Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae En Cryptococcus neoformans-, van klinische monsters of pure gewassen.

Het direct gebruikte directe monster om negatieve kleuring toe te passen is cerebrospinale vloeistof. Deze techniek is een snel alternatief voor de vermoedelijke diagnose van meningitis, vooral door Cryptococcus neoformans.

Deze kleuring kan worden toegepast op steriele sputum en vloeistoffen in het algemeen, evenals op stammen verkregen van jonge pure gewassen. De techniek maakt gebruik van nigrosine of Chinese inkt voor de uitvoering ervan, daarom is het een zeer eenvoudige en economische methode die moet worden toegepast die in korte tijd informatie biedt over een grote diagnostische waarde.

In die zin is elk laboratorium in staat om deze kleur uit te voeren. Natuurlijk moet het laboratorium een ​​competent personeel hebben, dat in staat is om de gisten van de Cryptococcus neoformans geïsoleerd of in edelstening en differentiëren ze van leukocyten en artefacten die het monster kan presenteren.

Basis

Nigrosine en Chinese inkt werken op dezelfde manier, dus beide stoffen kunnen onduidelijk worden gebruikt.

Deze techniek wordt negatieve kleuring genoemd omdat het in strijd is met de rest van de kleurtechnieken. Hierin is wat zonder verven is de structuur die wordt gezocht of die u wilt zien, dat wil zeggen micro -organismen.

Daarom is de kleuring gebaseerd op het verven van de bodem van het uitstrijkje in een donkere kleur. In dit scenario zullen geabliculeerde structuren in het licht of kleurloos benadrukken.

Meestal worden de gisten waargenomen, omgeven door een heldere halo die overeenkomt met de capsule. Dit gebeurt omdat Chinese inkt en nigrosine stoffen zijn die niet in staat zijn om het polysacharide te dringen dat de capsule van levende micro -organismen vormt.

Kan u van dienst zijn: Butyric Fermentation

Opgemerkt moet worden dat andere structuren die aanwezig kunnen zijn in het directe monster, zoals leukocyten of rode bloedcellen.

Nu, als micro -organismen dood zijn, kan tinctuur erin doordringen, zodat deze kleuring ook nuttig is voor het evalueren van de levensvatbaarheid van micro -organismen.

Techniek

Materialen

Nigrosine

Nigrosine is zijn naam verschuldigd aan de zwarte kleur die het heeft. Het is een synthetische stof die wordt verkregen uit de verwarming van het mengsel van organische verbindingen -zoals nitrobenzeïne, aniline en aniline hydrochloriet -, met behulp van een katalysator (ijzer of koper) in die reactie (ijzer of koper).

Chinese inkt

Chinese inkt is een stof die voornamelijk wordt gebruikt door Aziaten om te schrijven, de uitwerking van kunstwerken en monochromatisch schilderen. Het is erg populair in de Chinese cultuur.

Het wordt verkregen uit de inktvisink gemengd met kolen in poedervorm, product van het verbranden van kleine harsachtige bomen.

Het is ook mogelijk om het te bereiden vanuit het roet van de koolwaterstofverbranding (plantaardige oliën), samen met een eiwitgelei die het de juiste consistentie geeft om de neerslag van kolendeeltjes te voorkomen.

Specificaties voor bemonstering

• Het vereist geen vasten.
• Het monster, sputum of steriele vloeistof moet ten minste 1 ml volume bevatten en moet bij kamertemperatuur naar het laboratorium worden overgebracht.
• CSF -monsters en steriele vloeistoffen moeten worden genomen door een gespecialiseerde arts.
• Het kan ook een pure oogst zijn van een verdachte stam gekoppeld aan de bovengenoemde ziekteverwekkers.

Uitvoering van de techniek met directe monsters

• De monsters moeten worden gecentrifugeerd, dan wordt het supernatant weggegooid en wordt het sediment genomen.
• Een druppel gecentrifugeerd materiaal (sediment) en een druppel Chinese of nigrosine -inkt wordt geplaatst.
• Het moet goed worden gemengd en bedekken met een omslagomslag, waardoor de druppel zich uitstrekt als een fijne film zonder de randen te overschrijden.
• Vervolgens is de microscoopbereiding gemonteerd.
• Als de voorbereiding erg donker is, kan deze worden verdund met water.

Kan u van dienst zijn: chemotropisme

Uitvoering van de techniek met stammen uit de teelt

• Een zeer klein deel van een jong gewas wordt genomen met een gezaaide naald en lost op in een druppel Chinese inkt die eerder op een schone dia is geplaatst.
• Een deksel wordt bovenop geplaatst.
• Het wordt waargenomen in de 10x microscoop en vervolgens bij 40x.

U kunt ook een deel van de kolonie in gedestilleerd water oplossen, en van daaruit een druppel nemen en het mengen met de Chinese inkt. Op deze manier zal de voorbereiding niet zo dik zijn, waardoor de structuren in afzondering kunnen worden geobserveerd. Als er agglomeraties zijn, wordt dit niet goed waargenomen.

Een andere methode is als volgt:

• Plaats een daling van de ophanging aan het ene uiteinde van de dia.
• Plaats een druppel nigrosine aan hetzelfde uiteinde en mix.
• Met behulp van een andere dia, breid het monster uit alsof het een hematologisch uitstrijkje maakt.
• Laat drogen en observeren in de microscoop.

Microscoopobservatie

Eerst moet het worden gericht op 10x doelwit om een ​​brede visie op het veld te hebben. Vervolgens moet u zoeken of er duidelijke spaties zijn. Als er zijn, focus dan met 40x om de details te zien.

Voordelen

• Het is gemakkelijk uit te voeren.
• Het is een economische techniek.
• Deze methode vereist niet dat het uitstrijkje wordt vastgesteld aan warmte of met chemicaliën, daarom worden micro -organismen waargenomen zonder vervormingen.
• De voorbereiding van de fresco hoeft niet droog te zijn, dus het kan onmiddellijk worden waargenomen, waardoor resultaten snel worden opgeleverd.

Nadeel

• Eenmaal gemonteerd, moeten nieuwe voorbereidingen onmiddellijk worden waargenomen. Als ze mogen drogen, is het niet langer mogelijk om ze te observeren en een nieuw.

Kan u van dienst zijn: zelffertilisatie

Tinning van weefsels met Chinese inkt

Een andere functie die Chinese inkt kan vervullen, is in pathologielaboratoria. Dit wordt toegepast in monsters van chirurgisch geëxtraheerd met als doel de tumorresectiemarges te markeren.

Het gemarkeerde weefsel wordt gespoten met azijnzuur. Dit fungeert als een mordant en voorkomt dat de inkt eruit komt wanneer het weefsel is onderworpen aan routinematige verwerking voor biopsiepreparaat.

De procedure bestaat uit het baden van de stof in alcohol en xyleen, en vervolgens ingebed in paraffine wax. Deze markering leidt de patholoog bij het observeren van het weefsel, wat aangeeft waar de marge van chirurgische resectie of ander punt van belang is.

Referenties

1. Nigrosine. Hersteld van ES.Wikipedia.borg.
2. Forbes, B., Sahm, D., Weissfeld, een. Bailey & Scott microbiologische diagnose. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR.