Giemsa -vlekken

De kleuring van Giemsa is een veel voorkomende methode om verschillende weefsels en bloedmonsters te onderzoeken

Wat is de vlekken van Giemsa?

De Giemsa -vlekken Het is een soort klinische monsters (weefsels, bloed), gebaseerd op het mengsel van zuur en basiskleuringen. Het creëerde Gustav Giemsa, Duitse chemicus en bacterioloog, die het werk van Romanowsky perfectioneerde door glycerol toe te voegen om de verbindingen te stabiliseren.

De veranderingen die zijn gegenereerd in de oorspronkelijke Romanowsky -techniek mochten de microscopische waarnemingen aanzienlijk verbeteren, daarom werd de techniek gedoopt met de naam Giemsa -kleuring.

Omdat het een eenvoudige techniek is om uit te voeren, van grote functioneerbaarheid en economisch, wordt het momenteel op grote schaal gebruikt in het klinische laboratorium voor hematologische geur, beenmergmonsters en weefselsneden.

De kleurtechniek van Giemsa is zeer nuttig voor cytologische studies, omdat het de observatie van specifieke celstructuren mogelijk maakt. Deze techniek bevlekt cytoplasmata, kernen, nucleolos, vacuolen en celkorrels, en onderscheiden zelfs fijne chromatine -sporen.

Bovendien kunnen significante veranderingen in de grootte, vorm of kleuring van de kern worden gedetecteerd, waar het mogelijk is.

Foundation of Giemsa's vlekken

Romanowsky Type kleurstoffen hebben als basiscontrast tussen zuur en basiskleurstoffen, om respectievelijk basis- en zure structuren te doden. Zoals te zien is, is er een affiniteit van de zure kleurstoffen van het verven van de basisstructuren en vice versa.

De gebruikte basiskleurstof is methyleenblauw en zijn roestige derivaten (Azure A en Azure B), terwijl de zure kleurstof eosine is.

De zure structuren van de cellen zijn nucleïnezuren, de korrels van de basofiele gesegmenteerde, onder andere. Daarom zullen ze worden geverfd met methyleenblauw.

In dezelfde zin zijn de basisstructuren van de cellen hemoglobine en sommige korrels, zoals de inhoud in de gesegmenteerde eosinofielen, onder andere. Deze zullen met Eosina worden geverfd.

Aan de andere kant, omdat methyleen en azuurblauw blauw worden gekenmerkt door metacromatische kleurstoffen, kunnen ze een variabele toon geven aan de verschillende structuren, volgens de belasting van polyianions die ze bezitten.

Dit is hoe de strategische combinatie van basis- en zure kleurstoffen erin slaagt een breed spectrum van kleuren te ontwikkelen, volgens de biochemische kenmerken van elke structuur, door lichtblauw, donkerblauw, lila en paars blauwe tinten lopen, in het geval van zuurzuurstructuren.

De kleuring van Eosina is stabieler en genereert kleuren tussen roodachtig, oranje en zalm.

Materialen

Bereiding van de moederoplossing

De bereiding van de moederoplossing vereist het wegen van 600 mg Giemsa -stof, het meten van 500 cc aceton -vrije metilolische alcohol en 50 cc neutrale glycerine.

Voorbereidingsmodus

Plaats het zware Giessa -stof op een mortel. Als er knobbels zijn, moeten ze worden verpulverd. Voeg vervolgens een merkbare hoeveelheid van de gemeten glycerine toe en meng zeer goed. Het verkregen mengsel wordt in een zeer schone barnsteenfles gegoten.

De rest van glycerine wordt in de mortel geplaatst. Meng opnieuw om de rest van de kleurstof te reinigen die aan de mortelwanden is vastgelopen en gooi dezelfde fles.

Kan u van dienst zijn: Conidia

De fles is bedekt en duurt 2 uur in een waterbad bij 55 ° C. Zo lang.

Vervolgens mag het mengsel afkoelen om de alcohol te plaatsen. Eerder wordt een deel van de gemeten alcohol in de mortel geplaatst om te voltooien wat kleurt en wordt vervolgens aan het mengsel toegevoegd, naast de rest van de alcohol.

Deze voorbereiding moet ten minste 2 weken worden toegestaan. Het gedeelte dat wordt gebruikt uit de moederoplossing moet worden gefilterd.

Om de besmetting van de voorbereiding te voorkomen, wordt het aanbevolen om het gedeelte door te geven dat constant wordt gebruikt aan een kleine barnsteenfles met druppel. Herhaal elke keer dat het reagens uitgeput is.

Bufferoplossing Voorbereiding

Aan de andere kant wordt een 7,2 pH -bufferoplossing als volgt bereid:

6.77 gr van natriumfosfaat (watervrij) (nahpo worden gewogen₄), 2,59 gr van kaliumdihydrogen fosfaat (kh₂Po₄) en gedestilleerd water tot 1.000 cc.

Eindvoorbereiding

Voor de bereiding van de uiteindelijke kleuroplossing worden 2 cc van de gefilterde moederoplossing gemeten en gemengd met 6 cc van de bufferoplossing. Het mengsel wordt geroerd.

Een relevant feit waarmee rekening moet worden gehouden, is dat kleurstofvoorbereidingstechnieken kunnen veranderen volgens het commerciële huis.

Extra materialen die nodig zijn om kleur uit te voeren

Afgezien van de beschreven materialen, kleurbruggen, treden met water of buffer voor wassen, schuifplakken of deksel, een stopwatch, een stopwatch om kleurtijden en droogpapier te regelen of wat materiaal dat dient te drogen (gaas of katoen (gaas of katoen).

Techniek

Kleuringsproces

1. Voorafgaand aan het kleuren moet het uitgebreide monster op een schone dia klaar zijn.

Monsters kunnen bloed, beenmerg, histologische weefsels of cervicale vaginale monsters zijn. Het wordt aanbevolen dat de uitgebreide goed zijn en 1 of 2 uur drogen hebben voordat ze ze inkleuren.

2. Op een kleurbrug worden alle vellen geplaatst die te kleuren zijn. Het werkt altijd in dezelfde volgorde en elk blad wordt goed geïdentificeerd.

3. Plaats een paar druppels van 100% (methanol) metalen alcohol op de geur en laat 3 tot 5 minuten vertrekken om het monster te repareren en uitdrogen.

4. Gooi de methanol in het vel weg en laat de lucht drogen.

5. Eenmaal droog, plaats de uiteindelijke kleuroplossing met een druppelaar totdat deze het hele blad bedekt. Verlaat Act gedurende 15 minuten. Sommige auteurs bevelen aan tot 25 minuten. Het hangt af van het commerciële huis.

6. Giet de kleurstof af en was het wrijven met gedestilleerd water of met een 7.2 bufferoplossing.

7. Laat de buitenbladen op een droogpapier drogen, verticaal gerangschikt met behulp van een ondersteuning.

Kan u dienen: Renina: Structuur, productie, secretie, functies

8. Reinig de achterkant van de dia met gaas of katoen bevochtigd in alcohol om de rest van de kleurstof te elimineren.

Gebruik/toepassingen van de vlekken van Giemsa

De kleurtechniek van Giemsa wordt in verschillende gebieden gebruikt: in hematologie, mycologie, bacteriologie, parasitologie, cytologie en cytogenetica.

Hematologie

Het is het meest voorkomende gebruik dat aan deze kleuring wordt gegeven. Daarmee wordt elk van de cellen aanwezig in beenmergmonsters of perifeer bloed geïdentificeerd. Evenals het berekenen van het aantal van elke serie, het kunnen detecteren van leukocytose of leukopenie, trombocytopenie, enz.

Omdat het gevoelig is om onrijpe cellen te identificeren, is het relevant bij de diagnose van acute of chronische leukemie. Het is ook mogelijk om onder andere de diagnose van anemieën te stellen, zoals drepanocytaire, falciforme bloedarmoede.

Mycologie

In dit gebied is het gebruik gebruikelijk voor het zoeken naar Histoplasma capsulatum (intracellulaire dimorfe schimmel) in weefselmonsters.

Bacteriologie

In hematologische uitstrijkjes geverfd met giemsa, is het mogelijk om te detecteren Borrelias SP Bij patiënten die de ziekte bestuderen die Recurrentis -koorts wordt genoemd. Spiroquettes worden overvloedig waargenomen bij erytrocyten, in monsters genomen in de koortsachtige piek.

Het is ook mogelijk om intracellulaire bacteriën te visualiseren, zoals Rickettsias SP En Chlamydia trachomatis In geïnfecteerde cellen.

parasitologie

Op het gebied van parasitologie heeft Giemsa's kleuring de diagnose van parasitaire ziekten toegestaan, zoals malaria, Chagas Evil en Leishmaniasis.

In de eerste twee, de parasieten Plasmodium SP en de Cruzi Tripaosoma, Ze kunnen respectievelijk worden gevisualiseerd in perifeer bloed van geïnfecteerde patiënten. Ze kunnen in verschillende fasen worden gevonden volgens de fase waarin de ziekte is.

Om de zoektocht naar bloedparasieten te verbeteren, wordt het aanbevolen.

Evenzo kunnen cutane leishmaniasis worden gediagnosticeerd bij het evalueren van monsters van lederen biopten geverfd met Giemsa, waar de parasiet wordt gevonden.

Cytologie

De kleuring van Giemsa wordt ook gebruikt voor de cytologische studie van endocervicale monsters, hoewel het niet de techniek is die het meest voor dit doel wordt gebruikt.

Maar in geval van schaarste van hulpbronnen kan het worden gebruikt, met een functioneerbaarheid die vergelijkbaar is met die aangeboden door het PAP -meer en een lagere kosten. Het vereist echter expertise door het examenant.

Cytogenetica

Een relevant kenmerk van de kleuring van Giemsa is het vermogen om zich sterk aan te sluiten bij de regio's die rijk zijn aan Adenines en Timinas van DNA. Hierdoor kan DNA worden gevisualiseerd tijdens celmyitose, in verschillende condensatietoestanden.

Deze studies zijn nodig om chromatische afwijkingen te detecteren, zoals duplicaties, deleties of translocaties van de verschillende regio's van chromosomen.

Giemsa -vlekken. Bron: Panreac Applichem ItW Reagentia. Versie 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Spanje.

Aanbevelingen voor goede vlekken

- Het drogen van de vellen mag niet worden versneld. De prudentiële tijd voor het drogen ervan moet buiten worden verwacht. Ongeveer 2 uur.

Kan u van dienst zijn: Timina

- Kleur onmiddellijk na 2 uur voor betere resultaten.

- Om de geuren beter te laten repareren en geverfd te worden, moet het monster op het blad worden verdeeld zodat er een dunne en uniforme laag is.

- Het voorkeursbloedmonster is het capillair, omdat de Smere.

- Als veneus bloed wordt gebruikt, moet EDTA worden gebruikt als een anticoagulans en geen heparine, omdat deze laatste meestal de cellen vervormt.

Veel voorkomende fouten bij de kleuring van Giemsa

In de praktijk van deze kleur kunt u fouten maken. Ze worden bewezen door plotselinge veranderingen in de tonaliteiten van de structuren.

Extreem blauwe kleuring

Het kan te wijten zijn aan:

- Zeer dik uitstrijkje.

- Overstorm de vlekkende tijd.

- Onvoldoende wassen.

- Gebruik van reagentia ver boven de neutrale pH (alkalisch).

Onder deze omstandigheden zijn de kleuren van de volgende structuren zodanig vervormd dat erytrocyten in plaats van rozenzout, n groen zullen zijn, de korrels van de eosinofielen die moeten worden geverfd in rode baksteen zal blauwachtig of grijs worden of grijs, enzovoort zal er afwijking zijn in de gebruikelijke tinten.

Overmatig roze kleuring

Het kan te wijten zijn aan:

- Onvoldoende kleurtijd.

- Langdurige of buitensporige wasbeurt.

- Slecht drogen.

- Gebruik van zeer zure reagentia.

In dit specifieke geval zullen de structuren die normaal in het blauw worden geverfd niet bijna zichtbaar zijn, terwijl de structuren die als roos worden geverfd, zeer overdreven tonen zullen hebben.

Voorbeeld: erytrocyten nemen een sterke heldere of oranje rode kleur, nucleaire chromatine ziet er lichtroze uit en de eosinofiele korrels worden geverfd door helder helder rood helder.

Aanwezigheid van neerslag in het uitstrijkje

De oorzaken kunnen zijn:

- Gebruik vuile of slechte plakjes.

- Laat het uitstrijkje niet drogen.

- Laat de fixeeroplossing te lang achter.

- Onvoldoende wassen aan het einde van de vlekken.

- Onvoldoende filtratie of niet -filtratie van de kleurstof die wordt gebruikt.

Aanwezigheid van morfologische artefacten

In de uitstrijkjes kunnen morfologische artefacten verschijnen die de visualisatie en interpretatie van de aanwezige structuren belemmeren. Dit is te wijten aan:

- Type gebruikte anticoagulans, zoals heparine.

- Gebruik van vuile, verslechterde of vettige vellen.

Opslagmodus

Na voorbereid, moet de kleurstof worden gehandhaafd bij kamertemperatuur (15-25 ° C), om te voorkomen dat de kleurstof neerslaat. Het moet worden opgeslagen in een goed gesloten barnsteencontainer.

Referenties

1. Cannova, D., Brito, E. En Simons, m. (2016). Evaluatie van kleurtechnieken voor de diagnose van cutane leishmaniasis. Salus. 
2. Panreac Applichem Itw realsjs. Giemsa -vlekken. Versie 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Spanje.
3. Clark, G. Kleurprocedures (1981). Williams & Willkins.