Coagulase -testfundering, procedure en gebruik

De Coagulasetest Het is een laboratoriumtechniek die wordt gebruikt om de aanwezigheid van het coagulase -enzym te benadrukken. Dit enzym heeft de eigenschap van stoeprol plasma. Loeb in 1903 was de eerste die dit enzym beschreef.

Deze test wordt uitgevoerd om positieve kokosnoten, positieve catalase te gram, waardoor de stammen van kunnen Staphylococcus aureus van de rest van de Staphylococci, omdat hij het enige micro -organisme is van klinisch belang dat het produceert.

Beide afbeeldingen onthullen een positieve coagulasetest. Bron: Left Afbeelding: Philippinjl [CC BY-SA 3.0 (http: // creativeCommons.Org/licenties/by-sa/3.0/]]. Rechtsafbeelding: Foto gemaakt door de auteur MSC. Marielsa Gil.

In die zin worden de leden van de Staphylococaee -familie die deze negatieve test geven vaak Staphylococcus coagulase -negatief genoemd.

Er zijn enkele spanningen anders dan S. aureus  die coagulase kan produceren, zoals Staphylococcus schleiferi spp coagulans, s. Hyicus, s. Intermedius en s. Delphini.

De eerste drie zijn echter van klinisch belang op veterinair niveau en kunnen zelden worden gevonden als een oorzakelijk middel van menselijke infecties, terwijl S. Delphini Het wordt alleen gevonden in mariene omgevingen.

Bovendien verschillen ze gemakkelijk omdat S. Hyicus En S. Intermedius Ze gisten de mannitol niet en S. Schleiferi spp coagulans gist de maltose niet, noch de trehalosa, terwijl S. aureus Ja gist deze koolhydraten.

De aanwezigheid van het coagulase -enzym is gekoppeld aan de virulentie van stammen.  Deze theorie is echter gedaald, gezien het feit dat andere virulente negatieve coagulase -soorten worden waargenomen in staat om belangrijke infecties te produceren.

[TOC]

Basis

Staphylococcus aureus Het produceert twee soorten coagulase, een die blijft gekoppeld aan de celwand, ook wel een agglutinatiefactor of reactieve factor van coagulase (FRC) genoemd, en een extracellulaire die wordt vrijgegeven in vloeibare gewassen. Daarom worden ze respectievelijk de verenigde coagulase en vrije coagulase genoemd.

Het coagulase -enzym is zijn naam verschuldigd aan de actie die het produceert. Dit heeft het vermogen om fibrinogeen in fibrine te transformeren, waardoor een duidelijk stolsel ontstaat wanneer het in plasma is, dat wil zeggen dat dit enzym de trombine -activiteit van de coagulatie -waterval simuleert.

Een van de meest geaccepteerde theorieën is zelfs dat de Verenigde Coagulase reageert met vrije coagulase om coagulatiefactoren te activeren. Deze activering genereert een stof die vergelijkbaar is met hoe protrombine het doet, waardoor een verbinding ontstaat met trombine -functie.

Kan u van dienst zijn: schildklierprofiel: hormoonfunctie, belang, kwantificering

Het verschil met de normale coagulatie -waterval is dat deze reactie niet de aanwezigheid van calcium nodig heeft en niet wordt beïnvloed door heparine.

Om de coagulase -test uit te voeren, is het voldoende om een ​​nieuw Staphylococcus -gewas te onder ogen te zien met een bij voorkeur konijnenplasma en dus de vorming waar te nemen of niet van het stolsel.

Er zijn specifieke technieken om tegelijkertijd verenigde coagulase en verenigde en vrije coagulase te detecteren.

Enkele stammen van S. aureus Ze geven een sneller positief resultaat dan anderen. De snelheid van stolselvorming is recht evenredig met de huidige coagulaseconcentratie.

De techniek van de coagulasetest in de dia detecteert de United Coagulas.

Procedure

-Coagulasetest bij houder

Materialen

-Schoon schuifblad

-Konijnenplasma bij voorkeur kan ook menselijk of paardenplasma worden gebruikt. Het plasma kan commercieel gelyofiliseerd en gereconstitueerd worden wanneer het zal worden gebruikt of kan worden gebruikt (onlangs genomen). Een ander levensvatbaar alternatief is het gebruik van fibrinogeen.

-Zoutoplossing (0,85%) steriel (SSF).

Vers plasma verkrijgen

Extraheer menselijk of dier veneus bloed. Elk van de volgende anticoagulantia kan worden gebruikt: EDTA, calciumoxalaat, heparine of natriumcitraat. Meng goed en centrifuge. Verwijder aseptisch het supernatant (plasma), zonder rode bloedcellen en afzetting in een steriele buis.

Plasma -scheiding. Bron: Foto gemaakt door de auteur: MSC. Marielsa Gil.

Gelyofiliseerd plasma

Reconstitute zoals gespecificeerd door de commerciële kitflesje.

Verse fibrinogeen

Van een gecitreerd plasma, meng plasma met een verzadigde oplossing van natriumchloride. Laten.

Gooi supernatant weg, reconsteer het neerslag tot 5 keer zijn volume met steriel gedestilleerd water. Voeg 5 heparine -eenheden toe voor elke ml fibrinogeen. Redden.

Techniek

In een dia wordt een druppel zoutoplossing en een druppel plasma afzonderlijk geplaatst. Neem met platina hendel 1 of 2 pure kolonies van het micro -organisme om te proberen.

Meng de bacteriële belasting in de plasmadruppel en herhaal de werking in de SSF -druppel. Let op de resultaten onmiddellijk. Een positief resultaat zal het resultaat zijn waar de vorming van een macroscopisch geagglutineerd (wit neerslag) wordt waargenomen na een minuut aan de druppel met plasma.

Het kan u van dienst zijn: Ecophysiology: welke studies en toepassingen bij dieren en groenten

SSF's druppel dient als een negatieve controle. Als agglutinatie met de SSF wordt waargenomen, betekent dit dat het micro-organisme zelf-aglutine is, in staat zijn om vals positieve resultaten te bieden. In dit geval moet het worden bevestigd door de buistest.

Het wordt ook aanbevolen om een ​​positieve controle op te zetten met een bekende spanning van S. aureus.   

Interpretatie

Agglutinatie binnen 5 tot 20 seg (sterke positieve test).

Variabele agglutinatie tussen 20 seconden en één minuut (positieve vertraagde test).

Een zekere mate van agglutinatie na een minuut (twijfelachtige test). Het wordt aanbevolen om de test te herhalen of te bevestigen door de buismethode.

Er is geen agglutinatie (negatieve test).

Resultaat met SSF. Het moet altijd negatief geven, als het resultaat van de test automatisch is.

-Tube coagulasetest

Materialen

-Steriele testbuis

-Plasma

-Maria Bath bij 37 ° C.

Techniek

Meet met een steriele 0,5 ml pipet van plasma en plaats deze in een 12 x 75 testbuis. Laad de platina -handgreep met 2 tot 4 zuivere kolonies om te studeren van een vast gewas van 18 tot 24 uur en het in het plasma zorgvuldig in het plasma, meng en incubeer bij 37 ° C gedurende 4 uur.

Onderzoek de buis op het eerste uur zonder hem te schudden, gewoon zachtjes gekanteld. Als er nog geen stolsel wordt waargenomen, kunt u elke 30 minuten blijven observeren tot het voltooien van 4 uur. Als het na 4 uur nog steeds negatief is, kan het tot 24 uur worden achtergelaten, maar bij kamertemperatuur. Observeer en rapporteer het resultaat.

Op basis van de ervaring raden sommige microbiologen aan om 500 µl van een bacteriële suspensie te gebruiken door een gewas van 18 uur in een vloeibaar medium om de test uit te voeren.

Blijkbaar biedt het snellere en betrouwbaardere resultaten dan wanneer kolonies uit vaste media worden geëmulgeerd, vooral als het menselijk plasma verkregen uit de bloedbank is gebruikt.

Het gebruik van stammen uit een bouillon helpt de mogelijke aanwezigheid van menselijke anti-stafylococcale antilichamen in plasma te verdunnen die de werking van coagulase kunnen remmen.

Interpretatie

Als een stolsel dat alle vloeistof bedekt (volledige coagulatie) of stolling dat niets in de resterende vloeistof (gedeeltelijke coagulatie) moet worden beschouwd als een positieve test.

Kan u van dienst zijn: takken van biologie en wat bestuderen ze

Als het niet wordt gevormd, dat wil zeggen, de ophanging is homogeen, de test is negatief.

-Coagulasetest met fibrinogeen

Fibrinogeen wordt net als plasma gebruikt en dient zowel voor de houder -test als voor buistest. Ga verder zoals beschreven voor plasma en interpreteer op dezelfde manier.

Gebruik

Het wordt gebruikt om de Staphylococcus aureus van negatieve coagulase staphylococci.

QA

Nieuwe gewassen hebben van een spanning van S. aureus Om te worden gebruikt als positieve controle. Je kunt ook een spanning hebben van S. epidermidis Als negatieve controle.

Beperkingen

-Een positieve test mag niet 24 uur in incubatie worden gelaten, zoals de S. aureus produceert fibrinolisine die het stolsel oplost.

-Voor betrouwbare test moet vers of vers gereconstitueerd plasma worden gebruikt, en het is belangrijk om verse bacteriële gewassen te gebruiken (18 tot 24 uur). Dit voorkomt valse negatieven.

-De test moet gezamenlijk worden uitgevoerd met een negatieve controle en een positieve.

-Sommige solide media kunnen de coagulase -test verstoren. Het wordt niet aanbevolen.

-Als gecitreerd plasma wordt gebruikt, wordt het aanbevolen om 5 heparine -eenheden per ml plasma te plaatsen om valse positieven te voorkomen. Dit komt omdat sommige verschillende micro -organismen van S. aureus Ze kunnen citraat ontbinden en plasma -stolsel maken. In dit geval is het raadzaam om gram en een catalasetest te doen.

-Het is belangrijk, in de buistest, de reactie om de 30 minuten bewaken, omdat er stammen zijn van S. aureus die hoge concentraties fibrinolisine produceren en het nieuw gevormde stolsel verdunnen. Vermijd valse negatieven.

-Bij het monitoren van de test moet de buis abrupt worden vermeden, dit kan het begin van de vorming van het stolsel die niet wordt hersteld vernietigen, waardoor valse negatieven worden veroorzaakt.

Referenties

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e ed. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR. Argentinië.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Bailey & Scott microbiologische diagnose. 12 ed. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR. Argentinië.
3. Mac Faddin J. (2003). Biochemische tests voor de identificatie van klinisch belang bacteriën. 3e ed. Pan -Amerikaans redactioneel. Buenos Aires. Argentinië.
4. Pro-Lab Laboratories. Konijn coaguleren plasma. Beschikbaar op: Pro-lab.com
5. "Coagulase." Wikipedia, gratis encyclopedie. Feb 2019, 04:23 UTC. ABR 2019, 15:50 Wikipedia.borg.