De helft van mijn wat is, fundering, voorbereiding, gebruik

Hij Mijn helft Het is een biochemische test die wordt gebruikt om de identificatie van soorten bacteriën die tot de Enterobacteriace -familie behoren te helpen. Het is vrij voedzaam en bestaat uit glucose, gistextract, pepton, Tripteine, L -ornitine Hydrochloride, Bromocresh en Agar Purple.

De betekenis van zijn acroniem (mijn) beschrijft elk van de parameters die in dit medium kunnen worden waargenomen; Motiliteit, indol en ornitine. Motiliteit is het vermogen van het micro -organisme om rond de aanwezigheid van flagella te bewegen. Om deze eigenschap te kunnen waarnemen, moet de consistentie van het medium semi -oplolid zijn, dus de voorbereiding heeft minder hoeveelheid agar.

Schema van interpretatie van resultaten in de mediummijn. Bron: Opgesteld door auteur MSC. Marielsa Gil

Indolproductie bewijst de aanwezigheid van de enzym Triptofanasa die op het tryptofaanaminozuur werkt, noodzakelijk om een ​​onthullend reagens te gebruiken om de productie van indol zichtbaar te maken.

Ten slotte bepaalt ornithine of de bacteriën in staat zijn tot decarboxillary.

Basis

Peptone, gistextract en triptein

Deze elementen dragen bij aan de voedingskracht van dit medium. Ze dienen als een bron van essentiële voedingsstoffen en aminozuren voor bacteriële ontwikkeling.

Bovendien is Triptein een bron van tryptofaan om de aanwezigheid van de enzym Triptofanasa aan te tonen, die de tryptofaan afbreekt.

De indol is kleurloos, daarom wordt de aanwezigheid ervan onthuld door vijf druppels van het Ehrlich- of Kovacs-reagens toe te voegen, beide met p-dimethylaminobenzaldehyde.

De aldehyde -groep van deze verbinding reageert met de indol, waardoor een fuchsia rood -vormig product op het oppervlak van de agar wordt gegenereerd.

Elk overblijfsel van kleur moet als een positieve test worden beschouwd. De test moet onmiddellijk worden gelezen, omdat de tijd de kleur degradeert.

Aan de andere kant moet deze test worden onthuld nadat hij de resultaten van motiliteit en decarboxylering van ornithine heeft opgemerkt.

Kan u van dienst zijn: compact bot: kenmerken, structuur, functies

Interpretatie

Positieve test: Vorming van een Fuchsia -rode ring bij het toevoegen van de Kovacs -reagens druppels.

Negatieve test: Er is geen ringvorming.

Beweeglijkheid

De bacteriecapaciteit van verplaatsen zal bewijs zijn.

Een negatieve motiliteitstest zal worden aangetoond door een dunne groeilijn te observeren, en alles wat er in de buurt zal zijn, zal zonder groei zijn.

Het is belangrijk dat motiliteit wordt gelezen voordat het wordt onthuld.

In mobiele bacteriën maar van langzame groei is het moeilijk om zijn motiliteit met dit medium aan te tonen. In dit geval wordt het aanbevolen om andere tests of methoden te gebruiken, zoals de medium motiliteit of de lopende drop -methode.

Glucose

Glucose is fermenteerbaar koolhydraat dat naast het leveren van energie het medium verzuren, een noodzakelijke voorwaarde zodat de decarboxylering van het ornithine -aminozuur kan optreden.

Glucosefermentatie moet altijd optreden, gebaseerd op het principe dat alle bacteriën die tot de familie Enterobacteriaceae behoren de glucose gisten.

L -nitin

In het geval dat de bacteriën het enzym ornitine decarboxylase produceren, kan het werken zodra het medium is aangezuurd door glucosefermentatie.

Het enzym ornithine decarboxylase werkt op de carboxylgroep van het aminozuur dat een amine produceert genaamd putresina die opnieuw het medium alkheies.

Deze test moet worden gelezen na 24 uur incubatie, want als u probeert te lezen voordat u de test met een vals negatief verkeerd kunt begrijpen.

Vergeet niet dat de eerste reactie die optreedt, de fermentatie van glucose is, dus het medium wordt geel in een beginfase (eerste 10 tot 12 uur). Als de decarboxylering van de ornithine later optreedt, wordt het medium paars.

Het is belangrijk om de decarboxyleringstest van het ornithine te interpreteren voordat de indol wordt onthuld, omdat het aggregaat van het Kovacs -reagens de kleur van het medium wijzigt.

Kan u van dienst zijn: de koninkrijken van de natuur en de kenmerken ervan

Interpretatie

Negatieve test: geel of geel medium.

Positieve test: volledig paarse helft.

PH -indicator

In dit geval wordt bromocresol paars gebruikt; de persoon die verantwoordelijk is voor het onthullen wanneer er een verandering van pH in het midden is. Door aan te zuiveren wordt de indicator geel, en wanneer alkalinaries paars wordt.

Gezaaid en onthulde techniek

Om het medium van mij te zaaien, wordt een rechte of naald gebruikt en een deel van de kolonie om te studeren wordt ermee verzameld.

Een diepe punctie wordt gemaakt in mijn midden in een rechte lijn. Het is niet raadzaam.

Incubeer gedurende 24 tot 48 uur bij 37 ° C bij aerobiose. Let op de resultaten in deze volgorde: motiliteit, decarboxylering van de ornithine en onthullen uiteindelijk de indool.

Het is raadzaam om 2 ml naar het medium te nemen, over te brengen naar een steriele buis en de indoletest daar uit te voeren, dus als deze negatief geeft, kan de rest van de oorspronkelijke buis 24 uur meer worden geïncubeerd, om de indol opnieuw te onthullen.

De ontwikkeling van de indool wordt als volgt gedaan: 3 tot 5 druppels van het Kovacs -reagens worden toegevoegd in de mijn omgeving en roert sterk. Er wordt opgemerkt of er al dan niet een rode ring van Fuchsia verschijnt.

Voorbereiding

Mijn helft

Weeg 31 gr van mijn omgeving en lost op in een liter gedestilleerd water.

Verwarm tot het mengsel een minuut kookt, vaak roert totdat u de agar volledig oplost. Verdeel 4 ml van het medium in 13/100 testbuizen met katoenen deksel.

Steriliseer in autoclaaf bij 121 ° C gedurende 15 minuten. Verwijder uit de autoclaaf en laat recht in een schok staan, zodat een semi -solid taco wordt gevormd.

Bewaar in een koelkast van 2-8 ° C. Laat een bacteriële stam temperatuur.

De kleur van het gedehydrateerde medium is beige en die van het medium bereid paars enigszins opalescent.

Het kan u van dienst zijn: Divergent Evolution: Oorzaken en voorbeelden

De uiteindelijke pH van het voorbereide medium is 6,5 ± 0.2

Het medium wordt geel met zure pH en is paars tot alkalische pH.

Kovacs Reactive (Indol Test Developer)

Dit reagens wordt als volgt bereid:

150 ml amyl, isoamyl of butylalcohol worden gemeten (een van de drie). 10 gr van p-dimethylaminobenzaldehyde lost erin op. Vervolgens worden langzaam 50 ml geconcentreerd zoutzuur toegevoegd.

Het voorbereide reagens is kleurloos of helder geel. Het moet worden opgeslagen in de barnsteenfles en worden bewaard in de koelkast. Een donkerbruine kleur toont zijn verslechtering.

Ook kan het Kovacs -reagens worden vervangen door het Ehrlich -reagens. De laatste, omdat het gevoeliger is, heeft de voorkeur om de indol in bacteriën te onthullen die het in minimale hoeveelheden produceren, zoals in sommige niet -fermenterende negatieve bacillen en bepaalde anaëroben.

Gebruik

Dit medium is een test die een batterij van biochemische tests aanvult voor de identificatie van de bacteriën die tot de Enterobacterias -familie behoren.

De decarboxylatiegegevens van de ornithin dienen om te differentiëren Shigella sonnei, dat geeft positief, van Shigella Boydii, Shigella flexneri en s. Dysenterieae, Ze geven negatief.

Het onderscheidt ook het geslacht Klebsiella, dat negatief geeft, van het Enterobacter -geslacht, waar de meeste van zijn soorten positief geven.

Bron: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e ed. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR. Argentinië.

QA

Elke keer als de helft van mij is voorbereid, kan een controletest worden uitgevoerd. Hiervoor worden bekende of gecertificeerde stammen gebruikt om het gedrag van het medium te observeren.

De soorten die kunnen worden gebruikt, zijn Escherichia Coli, Morganella Morganii, Klebsiella Pneumoniae, Enterobacter Aerogenes En Proteus Mirabilis.

De verwachte resultaten zijn EN. coli en m. Morganii. Dan M: +, I: + en O: +.

Klebsiella pneumoniae Geef alles negatief (m:-, i:-, o :-). Proteus Mirabilis En Enterobacter aerogenes Dan M:+ I:- en O: +.

Referenties

1. Mac Faddin J. (2003). Biochemische tests voor de identificatie van klinisch belang bacteriën. 3e ed. Pan -Amerikaans redactioneel. Buenos Aires. Argentinië.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Bailey & Scott microbiologische diagnose. 12 ed. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR. Argentinië.