Fosfaatbuffer (PBS) fundering, voorbereiding en gebruik

Hij fosfaatbuffer, bps of zoutoplossingfosfaatbuffer Het is een buffer en isotone oplossing, waarvan de functie is om de pH en osmotische druk het dichtst bij de natuurlijke (fysiologische) omgevingsomgeving te behouden. Het acroniem PBS gemiddelde fosfaatgebufferde zoutoplossing.

PH en osmolariteit zijn twee zeer belangrijke aspecten die moeten worden gecontroleerd in bepaalde laboratoriumprotocollen. In het geval van pH is het essentieel dat het wordt gecontroleerd, vooral in biochemische reacties, omdat deze kunnen variëren of niet kunnen worden uitgevoerd als de reactanten in een ongepaste pH zijn.

Buffer salino PBS fosfaat in twee verschillende pH. Bron: Pixinio.com

Terwijl de controle van osmolariteit essentieel is, vooral bij het werken met levende cellen, omdat de plasmamembranen van de cellen reageren volgens de concentratie van opgeloste stoffen waarin ze worden gevonden.

Als de cellen worden overgebracht naar een hypertone medium, zullen ze uitdrogen, omdat de watergradiënt naar de zijkant zal worden getransporteerd waar een grotere concentratie opgeloste stoffen is. Als cellen integendeel, cellen in een hypotonisch medium worden geplaatst, zullen de cellen vloeistof absorberen totdat liegt.

Dat is de reden waarom de PBS -buffer voor laboratoriumprotocollen die celonderhoud vereisen, wordt gebruikt In vitro, Op deze manier zullen de cellen niet worden beschadigd.

PBS bestaat uit een combinatie van zouten, zoals natriumchloride, natriumfosfaat, kaliumchloride en kaliumfosfaat. PBS -samenstelling kan variëren, afhankelijk van het protocol.

[TOC]

Basis

In principe is de functie van de zoutoplossingfosfaatbuffer om een ​​constante fysiologische pH te behouden naast een elektrolytische concentratie vergelijkbaar met die in het organisme.

In deze omgeving kunnen de cellen stabiel blijven, omdat de fysiologische omstandigheden zoveel mogelijk simuleren.

Voor de oorspronkelijke PBS -formulering kunnen andere verbindingen van noodzakelijke verbindingen worden toegevoegd, bijvoorbeeld de toevoeging van EDTA aan de buffer is nuttig voor het wassen van rode bloedcellen in de cross -incompatibiliteitstest.

De EDTA voorkomt de fractie van het complement C1 dat aanwezig is in het serum, om te splitsen en te lijden tegen de rode bloedcellen, dat wil zeggen valse resultaten van incompatibiliteit vermijden. Bovendien helpt EDTA cellen te dissociëren.

Kan u van dienst zijn: fylogenetische boom: typen en hun kenmerken, voorbeelden

Voorbereiding

De hoeveelheid zouten die moeten worden gewogen voor de uitwerking van de zoutoplossing -fosfaat PBS is afhankelijk van de hoeveelheid die nodig is om zich voor te bereiden:

-Oplossing Oplossing Buffer Salino Phfosphate (PBS 10x)

Voor een liter oplossing:

Wegen:

80,6 g NaCl,

2.2 g KCL,

11,5 g na₂HPO₄,

2,0 g KH₂HPO₄

Voorbereidingstechniek

Plaats in een beker de zware zouten, voeg voldoende water (80%) toe en meng de roerplaat met magnetische staaf tot de zouten oplossen.

PBS -voorbereiding met agiterend ijzer met een magnetische balk . Bron: Gebruiker: Ruhrfisch, Wikipedia. com

Filter om uitgewikkelde deeltjes te verwijderen. Gebruik filters met 0,45 µm poriën. Autoclave -sterilice en verdeelt aseptisch in laminaire stroombel in glazen potten met deksel.

Aan de 10x -oplossing (geconcentreerd) past de pH niet aan. De aanpassing wordt gemaakt zodra deze is verdund tot de buffer PBS 1x -concentratie (verdunning 1:10).

-Zoutfosfaatbuffer (PBS 1x)

PBS 1x kan direct worden voorbereid, met een gewicht van de overeenkomstige hoeveelheden van elk zout of kunnen de moederoplossing (1:10) bereiden met steriel gedestilleerd water.

-Om direct een liter zoutoplossing -fosfaat PBS 1x spijt voor te bereiden:

8.06 g NaCl,

0,22 g KCl,

1,15 g na₂HPO₄,

0,20 g KH₂HPO₄

Voorbereidingstechniek

Ga verder zoals uitgelegd in de geconcentreerde oplossing. Vervolgens moet de pH worden aangepast. Om dit te doen, meet de pH en gebruik afhankelijk van het resultaat zuur (HCl) of base (NaOH) om de pH respectievelijk te verlagen of te uploaden, totdat deze 7.4 is.

Het zuur of de basis wordt gedraaid door druppel toegevoegd terwijl de pH-waarde van de oplossing wordt bewaakt met behulp van een pH-meter. Filter, autoclaaf sterilice en verdeelt aseptisch in conische buizen of flessen indien nodig.

-Om de PBS 1x voor te bereiden op de 10x moederoplossing:

Maak een verdunning 1:10. Om bijvoorbeeld 1 liter PBS 1x te bereiden, meet je 100 ml van de moederoplossing en voeg je 700 ml steriel gedestilleerd water toe. Pas de pH aan en voltooi de hoeveelheid water totdat deze 1000 ml bereikt.

Kan u van dienst zijn: Directionele selectie: wat is, definitie, voorbeelden

De voorbereide PBS -buffer is kleurloos en transparant.

Dagelijks gebruik PBS kan worden bewaard bij kamertemperatuur en de rest in de koelkast.

.Oplossingen voor pH -instelling

HCl

Voor 100 ml HCl (zoutzuur) tot 1 molair.

Meet 91 ml gedestilleerd water en plaats het in een neerslagvat van 250 ml capaciteit.

Meet 8,62 ml geconcentreerde HCl en voeg het langzaam toe aan de beker die het water bevat (doet het nooit ondersteboven). Neem relevante bioveiligheidsmaatregelen bij het hanteren van sterke zuren (zeer corrosieve substantie).

Meng 5 minuten met een roerplaat met een magnetische staaf in het glas. Ga naar een bal van 100 ml en spoel op 100 ml met h₂Of gedistilleerd.

Nao

Voor 100 ml NaOH (natriumhydroxide) 10 molair.

Meet 40 ml gedestilleerd water en plaats het in een capaciteitsbeker van 250 ml. Meet 40 gr van NaOH en voeg toe aan het water. Meng met een roerplaat met een magnetische staaf in het glas.

Ga naar een 100 ml aggroidbal en spoel met gedestilleerd water. Volgen aan bioveiligheidsnormen, omdat deze reactie exotherme is (energie vrij in de vorm van warmte).

Als u andere hoeveelheden zoutoplossing voor zoutoplossing wilt voorbereiden, kunt u de volgende tabel raadplegen:

Bron: "Viral and Human Genomics Laboratory, UASLP School of Medicine"

Toepassingen

Voornamelijk wordt het gebruikt in celbiologie -laboratoria, immunologie, immunohistochemie, bacteriologie, virologie en onderzoek.

Het is ideaal om cellulair wassen door centrifugaat (rode bloedcellen) te maken, celmonocapas gewassen, in spectroscopische ellipsometrietechnieken, bij de kwantificering van bacteriële biofilms, bij het behoud van celgewassen voor virussen, als een oplossing voor het wassen in de techniek van indirect Immunofluorescentie en in technieken voor de karakterisering van monoklonale antilichamen.

Het dient ook om cellen of weefsels te transporteren, als verdunningsmiddel voor het tellen van cellen, de bereiding van celzymen (tripsine), als een verdunningsmethode.

Kan u van dienst zijn: heterotrofe voeding: kenmerken, fasen, typen, voorbeelden

Aan de andere kant toonden Martin en medewerkers in 2006 aan dat PBS nuttig is in forensische wetenschapslaboratoria, met name bij het herstel van sperma uit vaginale uitstrijkjes, of bij het herstel van vaginale cellen van penisuitstanden. Op deze manier kan het worden vastgesteld als er een seksuele relatie is geweest.

Beperkingen

-Sommige PBS -buffer brengt als conserveermiddel een stof die natrium azid wordt genoemd. Deze verbinding kan explosieve stoffen genereren als deze in contact komt met lood of koper. Om deze reden moet speciale zorg worden besteed bij het weggooien van dit reagens voor de drainage. Indien weggegooid door deze route, moet er overvloedig water worden toegevoegd om tot het maximum te verdunnen.

-De fosfaatbuffer mag niet worden toegevoegd zink, omdat het sommige zouten neerslaat.

-Wangen en medewerkers hebben in 2018 vastgesteld dat het gebruik van PBS niet geschikt was voor het wassen van primaire acute myeloïde leukemie (AML) geëxtraheerd uit perifeer bloed, omdat veel cellen verloren gaan door lysis, met een grote afname van eiwitmateriaal.

Daarom bepaalden ze dat AML -primaire cellen niet mogen worden gewassen met PBS na opslag in vloeibare stikstof.

Referenties

1. Coll J. (1993). Diagnostische technieken in virologie. Ed Díaz de Santos. 360 pg
2. Rodríguez M, Ortiz T. Cel cultuur. Verandering van medium. Afdeling Normaal en Pathological Histology University of Sevilla. Beschikbaar in personeel.ons.is
3. Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) voorbereiding. (2008). Standaard operationele procedures (SOP's) Virale en menselijke genomics Laboratorium Faculteit der Geneeskunde UASLP. Beschikbaar bij: Genomics.UASLP.mx
4. "Zoutoplossing fosfaat buff." Wikipedia, gratis encyclopedie. Apr 2019, 19:36 UTC. Apr 2019, 02:57 is.Wikipedia.borg.
5. Pietrasanta L, Von-Bilderling C.Onderwerpen in moleculaire biofysica. Beschikbaar bij: gebruikers.DF.UBA.AR
6. Rediaal. Handmatig. PBS+EDTA. Beschikbaar op: Felsan.com.AR
7. Martin NC, Pirie AA, Ford LV, Callaghan CL, McTurbate K, Lucy D, Scrimger DG. Het gebruik van fosfaatgebufferde zoutoplossing voor het herstel van cellen en spermatozoa uit wattenstaafjes. Sci Justice. 2006; 46 (3): 179-84. Beschikbaar in: NCBI.NLM.NIH.Gov
8. Wangen R, Aasebø E, Treeni A, et al. Behoudsmethode en fosfaatgebufferde zoutoplossing was het acute myeloïde leukemie -proteoom. Int J mol sci. 2018; 19 (1): 296. Beschikbaar in: NCBI.NLM.NIH.Gov
9. Martínez R, Gragera R.  (2008). Theoretische en praktische grondslagen van histochemie. Superior Council of Scientific Investigations. Madrid. Beschikbaar bij: boeken.Google.co.gaan