Agar tsi wat is, fundering, voorbereiding, gebruik

Hij Tsi agar o Triple Sugar Iron Agar is een vaste kweekmedium dat dient als een biochemische test om de eerste identificatie van gram negatieve bacillen te begeleiden. Het is gebaseerd op bewijs.

De samenstelling en fundering lijkt erg op de Kigler -hierrotest, met het verschil dat deze laatste alleen glucose en lactose bevat. Aan de andere kant, zoals de naam aangeeft - bevat de drievoudige suikerijzeragar drie fermenteerbare koolhydraten: glucose, lactose en sucrose.

Bovendien heeft het TSI -medium vier eiwitderivaten die het een zeer voedzame agar maken: gistextract, vleesextract, pepton en peptoneiwit. Het bevat ook ferro ammoniumsulfaat, natriumthiosulfaat, natriumchloride, fenolrood en agar.

Het onvermogen van een micro -organisme bij het fermenteren van de in de omgeving aanwezige glucose wordt onmiddellijk uitgesloten dat deze tot de familie Enterobacteriaceae behoort. Daarom is deze test essentieel om te beslissen welke identificatieroute moet worden genomen om het geslacht en de soort te bepalen.

Elk laboratorium beslist of het werkt met TSI Agar of met Kligler -hierro.

Basis

Elk van de verbindingen vervult een functie in het medium.

Natrium- en agarchloride

Natriumchloride is nodig om de osmotische balans van het medium te handhaven. Terwijl de agar je solide consistentie geeft.

PH -indicator (fenol rood)

De voorbereide medium pH is gebalanceerd bij 7,3 en de pH -indicator (fenol rood) wordt geel onder 6,8. Dit betekent dat kleine hoeveelheden zuren die worden geproduceerd door de fermentatie van suikers de roodoranje in geel medium zullen veranderen.

Als het niet voorkomt fermentatie, zal er alkalisatie van het medium zijn vanwege het gebruik van peptonen, die van rood-oranje naar sterk rood worden.

Eiwitderivaten (gistextract, vleesextract, pepton en peptoneiwit)

Wanneer bacteriën de eiwitten in de TSI -agar metaboliseren, worden amines geproduceerd die het medium alkaliseren (voornamelijk op het niveau van de ring), omdat de reactie zuurstof nodig heeft. De amines veranderen de ring naar sterk rood.

Maar dit hangt af van het vermogen om bacteriën te fermenteren of niet koolhydraten.

Koolhydraatfermentatie (glucose, lactose en sucrose)

De studie van suikersfermentatie kan verschillende beelden geven en elk wordt anders geïnterpreteerd. De interpretatie van de test verdeelt micro -organismen in 3 categorieën: niet -glucosefermenters, niet -lactose -gisters en lactose/sucrose fermenters.

Opgemerkt moet worden dat de hoeveelheid glucose in het midden beperkt is, terwijl de concentratie lactose en sucrose 10 keer hoger is.

Bacteriën van de familie Enterobacteriaceae en andere glucose -fermenterende micro -organismen zullen deze suiker beginnen te gisten, omdat de eenvoudigste koolhydraat is om energie te verkrijgen om energie te verkrijgen.

Kan u van dienst zijn: isotone oplossing: componenten, voorbereiding, voorbeelden

Aan de andere kant zijn lactose en sucrose complexe koolhydraten die moeten worden ontleed en glucose moeten worden zodat ze de embden-meyerhof-cyclus kunnen betreden.

-Niet -fermentaire micro -organismen

Wanneer het geïnoculeerde micro -organisme niet in staat is om glucose te gisten, kan veel minder andere koolhydraten fermenteren. Daarom worden hier zuren niet gevormd, maar er is aminevorming in de ring vanwege het gebruik van peptones.

In dit geval wordt de afschuining een sterke.

Interpretatie: K / K betekent alkalische schuine / alkalische of neutrale achtergrond

Zie in de afbeelding aan het begin van het artikel de afbeelding van de buis d.

Dit resultaat geeft aan dat het micro -organisme niet tot de familie Enterobacteriaceae behoort.

-Niet -fermentaire micro -organismen van lactose/sucrose

Als de bacteriën in staat zijn om glucose te fermenteren maar niet lactose of sucrose, zal het volgende plaatsvinden:

De bacteriën zullen na ongeveer 6 tot 8 uur alle aanwezige glucose consumeren, waardoor zowel de ring als de taco kunnen verzuren; dat wil zeggen, de agar zal volledig geel zijn geworden. Maar wanneer glucose uitgeput is en de onmogelijkheid krijgt om lactose en sucrose te gebruiken, zullen de bacteriën beginnen met het metabolisme van eiwitten.

Deze reactie heeft zuurstof nodig, dus degradatie van Peptonas treedt op op het oppervlak (ring). De amines produceerden alkleiniseren het schuine kronkelende geel tot rood. Deze reactie wordt bewezen na 18 tot 24 uur incubatie.

Interpretatie: K/A betekent alkalische ring en zure taco.

Zie in de afbeelding aan het begin van het artikel de afbeelding van buis B.

-Fermentaire/sucrose fermenterende micro -organismen

Micro -organismen die in staat zijn om lactose en sucrose te fermenteren, kunnen duidelijk glucose fermenteren. Nadat de minimale hoeveelheid glucose in het medium is uitgeput, begint het gevormde pyruvaat te metaboliseren om zuren te vormen door de Krebs -aerobe cyclus en in de periode van 8 tot 12 uur zal het hele medium geel zijn.

Als de bacteriën in staat zijn om lactose of sucrose te ontvouwen, zullen zuren worden geproduceerd en na 18 tot 24 uur zullen de gehele buisbis en taco- geel worden.

Opgemerkt moet worden dat het gebruik van glucose nodig heeft.

Interpretatie: a/ a betekent zure schuine/ zure achtergrond. Kan gas presenteren of niet.

Zie in de afbeelding aan het begin van het artikel de afbeelding van de buis a.

Kan u dienen: cytosine: structuur, functies, eigenschappen, synthese

Gasproductie

Sommige micro -organismen zijn in staat om gas te produceren tijdens suikersfermentatie. Het gas wordt bewezen in de buis vanwege de druk die het uitoefent in de agar. De druk veroorzaakt de vorming van bubbels of de verplaatsing van de agar. Soms kan gasvorming breken naar het milieu.

Het is belangrijk dat bij het zaaien van het TSI -medium de lekkinrage netjes door het midden van de agar wordt gedaan totdat het de bodem bereikt. Als de prik afwijkt aan de wanden van de buis, kan dit valse positieven in de gasproductie veroorzaken, omdat deze ontsnapt aan het kanaal dat ten onrechte is gevormd.

Gasproductie, evenals reacties die optreden in de agar -schuine zich, hebben zuurstof nodig, daarom wordt aanbevolen dat de buis wordt bedekt met katoenkap en als baquelietdeksel wordt gebruikt, moet deze niet volledig worden aangepast.

Gasproductie wordt gerapporteerd als positief (+) of negatief (-).

Natriumtiosulfaat en ferro ammoniumsulfaat ((waterstofsulfide -productie)

Bacteriën die in staat zijn om waterstofsulfide (kleurloos gas) te produceren, nemen zwavel van natriumthiosulfaat aanwezig in het medium. Zodra de H is gevormd₂S reageert met ferro ammoniumsulfaat en produceert ijzersulfide (duidelijk zichtbaar zwart neerslag).

H₂S wordt gerapporteerd als positief (+) of negatief (-).

Zie in de afbeelding aan het begin van het artikel de afbeelding van buis C.

Voorbereiding

Weeg 62,5 gr van de halve sugar ijzeragar (TSI) uitgedroogd en lost op in een liter gedestilleerd water.

Heet om de agar op te lossen. B' olie. Verdeel 4 ml van het medium in 13/100 testbuizen met katoenen deksel.

Steriliseer in autoclaaf bij 121 ° C gedurende 15 minuten. Verwijder uit de autoclaaf en laat de neiging staan. Er moet worden gezorgd dat zowel de basis als de afschuining dezelfde afstand hebben.

Bewaar in een koelkast van 2-8 ° C. Laat een bacteriële stam temperatuur.

De kleur van het gedehydrateerde medium is licht beige en het voorbereide medium is roodoranje

De uiteindelijke pH van het voorbereide medium is 7,3 ± 0,2.

Toepassingen

De TSI -test wordt veel gebruikt op het laboratoriumniveau van de microbiologie. Deze test is onmisbaar om het type test te begeleiden dat moet worden toegepast om de identificatie van het geslacht en de soort te bereiken. Uw goede uitvoering en interpretatie kan materiaal en werk besparen.

Als het resultaat een TSI K/K K is en de cytochroomoxidasetest positief geeft, moeten tests worden gebruikt voor de identificatie van niet -ferming gram negatieve bacillen, zoals pseudomonas, alkaline, achromobacter, Burkholderia, onder andere genres, naast andere genres. Als het negatieve oxidase is, is het gericht op de Acinetobacter, Stenotrophomonas, enz.

Het kan u van dienst zijn: TOTIPOTOTIALITEIT: Geschiedenis, kenmerken en belang

Aan de andere kant, als een TSI A/A of K/A wordt verkregen en de cytochroom oxidasetest negatief is, verminderen ze nitraten tot nitrieten, we zullen er zeker van zijn dat het een micro -organisme is van de Enterobacteriace -familie. In dit geval zal de identificatieroute worden georiënteerd op specifieke tests voor deze groep bacteriën.

Aan de andere kant, als een afbeelding k/a of a/a wordt verkregen en de cytochroom oxidasetest positief is, worden de extra tests gericht op de identificatie van fermenterende stammen die niet tot de familie Enterobacteriaceae behoren, zoals: Aeromonas , Plesiomonas, Vibrio en Pasteurella.

Een TSI met waterstofsulfide, negatieve oxidase, zal de volgende genres van de familie Enterobacteriaceae leiden: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella of Salmonella.

Een TSI met schaars of matig waterstofsulfide in de alkalische ring met alkalische achtergrond en een positieve oxidase, zal testen leiden voor de identificatie van niet -fermenterende gram negatieve bacillen producenten van h₂S, zoals Shewanella putrefaciens.

Ten slotte kan de TSI worden gebruikt voor het onderzoek naar de productie van waterstofsulfide in gram positieve bacillen, vooral wanneer het wordt vermoed Erysipelothrix rhusiopathiae.

Gezaaid

Het TSI -medium moet worden geïnoculeerd met zuivere kolonies, geïsoleerd in primaire of selectieve gewassen. Als de kolonie wordt afkomstig van selectieve middelen die zijn gezaaid met monsters met gemengde flora, moet de voorzichtigheid alleen van het oppervlak worden gezet, omdat er in het onderste deel van de kolonie levensvatbare stammen in dat medium kan zijn geremd.

Daarom mag het handvat nooit afkoelen in een selectief medium en vervolgens de kolonie nemen en een TSI -medium inoculeren.

De gezaaide is klaar met een rechte of naald. Punctie zal worden uitgevoerd, waardoor het door het midden van het midden ligt totdat het de bodem bereikt, en dan is de gezaaide in het inoculeren van het zigzagvormige oppervlak. Maak geen twee puncties.

Incubeer bij 37 ° C in aerobiose gedurende 18-24 uur. Interpreteer op dit moment, noch voor, noch daarna.

Beperkingen

De TSI -test moet worden gelezen tussen 18 en 24 uur incubatie. Een lezing voor deze tijd kan een valse gisting geven a/a. Terwijl een lezing na deze tijd kan leiden tot een vals negatief beeld van niet -fermenter, vanwege de consumptie van peptonen die het medium alkaliseren.

Referenties

1. Britania Laboratories. TSI Agar (triple Sugar Iron Agar). 2015. Beschikbaar op: Britanialab.com
2. BD Laboratories. Triple Sugar Iron Agar (TSI Agar). 2003. Beschikbaar op: BD.com