Ureumbouillon wat is, fundering, voorbereiding, gebruik

Hij Ureumbouillon Het is een vloeibare kweekmedium, gebruikt om de aanwezigheid van ureasa -enzym in bepaalde micro -organismen aan te tonen. Ureasa is een microbieel enzym dat op een constitutieve manier voorkomt, dat wil zeggen, het wordt gesynthetiseerd ongeacht of niet door het substraat te zijn waarop het werkt.

De functie van de ureasa is gerelateerd aan de ontleding van organische verbindingen. Niet alle micro -organismen kunnen dit enzym synthetiseren, daarom stelt de bepaling in het laboratorium u in staat bepaalde bacteriestammen te identificeren en zelfs onderscheid te maken tussen soorten van hetzelfde geslacht.

Er zijn twee soorten ureumtests: Stuart en Christensen. Ze verschillen in hun samenstelling en gevoeligheid. De eerste is speciaal om een ​​grote hoeveelheid ureasa te tonen die wordt geproduceerd door soorten van het eiwit geslacht.

De tweede is gevoeliger en kan de laatste tijd kleine hoeveelheden ureasa detecteren door andere bacteriële genres, zoals Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter en Mycobacterium.

Stuart's ureumbouillon bestaat uit ureum, natriumchloride, dipotassiumfosfat.

Terwijl de bouillon of ureumgreep van Christensen bestaat uit peptonas, natriumchloride, monopotásisch fosfaat, glucose, ureum, fenolrood, gedestilleerd water en agar-uitstraling. De laatste alleen als het het vaste medium is.

Basis

Het ureasa -enzym hydrolyseert het ureum om koolstofanhydride, water en twee ammoniakmoleculen te vormen. Deze verbindingen reageren op het eindproduct genaamd ammoniumcarbonaat.

Ureum de stuart bouillon

Stuart's ureumbouillon is meer gebufferd met een pH van 6,8. Daarom moet het micro -organisme in staat zijn om grote hoeveelheden ammonium te vormen om het rood van Fenol te draaien. De pH moet boven 8 stijgen.

Daarom is de ureumbouillon van Stuart selectief voor proteussoorten, wat positieve resultaten oplevert in 24 tot 48 uur incubatie en is ze niet effectief voor bacteriën die weinig hoeveelheden ureasa produceren of die het ureum langzaam hydrolyseren.

Dit komt omdat proteussoorten ureum kunnen gebruiken als stikstofbron. Aan de andere kant hebben andere bacteriën die bacteriën produceren een extra bron nodig.

Het kan u van dienst zijn: Succinaat dehydrogenase: structuur, functie, regulering, ziekten

Pérez et al. (2002) bepaalde dat de ureumbouillon van Stuart net zo efficiënt was als de ureumagar van Christensen, om de ureasa te bepalen in giststammen van de openhartigheid.

De auteurs van de studie beweren 100% toeval te hebben bereikt met beide media (Stuart en Christensen) door 24 en 48 uur te incuberen; De uitzondering maken dat de spanningen die de media erin slaagden om te veranderen in een sterke roze-fucsia-kleur als positief.

Dit verklaring is noodzakelijk, omdat Lodder (1970) zei dat bijna alle gisten erin slagen om de ring van het ureum de christensen ureum te plaatsen naar Pale Rosado. Dit komt omdat ze ureum in minimale hoeveelheden kunnen hydrolyseren en de vorming van amines door oxidatieve decarboxylering van oppervlakteaminozuren. Dit moet niet als positief worden geïnterpreteerd.

Christensen's ureumbouillon of agar

Christensen's ureumbouillon of agar is minder gebufferd en kunnen kleine hoeveelheden ammonium detecteren. Bovendien is dit medium verrijkt met peptonas en glucose. Deze verbindingen maken andere ureasa die micro -organismen produceren die niet groeien in de Stuart -bouillon ontwikkelen.

Evenzo biedt de ureumtest van Christensen snellere resultaten, vooral voor Proteus, om in slechts 30 minuten sterk positief te kunnen geven.

De rest van de producerende micro -organismen van Ureasa slaagt erin om de kleur van de omgeving enigszins na 6 uur te draaien, en sterk na 24, 48, 72 uur of meer, en zelfs sommige stammen kunnen na 5 of 6 dagen zwakke reacties geven.

Interpretatie van beide media (Stuart en Christensen)

Het medium is oorspronkelijk geel-oranje en een positieve reactie zal de kleur veranderen van de medium naar roze fucsia. Kleurintensiteit is recht evenredig met de hoeveelheid geproduceerde ammonium.

Een negatieve reactie zal de oorspronkelijke kleur verlaten, behalve voor gisten, die een lichtroze kunnen geven met het ureummedium van Christensen.

Voorbereiding

Ureum de stuart bouillon

Weeg de benodigde gram volgens de aanwijzingen van het commerciële huis. Los op in bij voorkeur steriel gedestilleerd water.  Gebruik geen warmte om op te lossen, omdat ureum warmtegevoelig is.

Kan u van dienst zijn: monosachariden

Om de membraanfiltratiemethode te steriliseren wordt gebruikt. Hiervoor wordt een Millipor -filter gebruikt met poriën van 0,45 µs diameter. Gebruik geen autoclaaf. Zodra de oplossing is gefilterd, wordt deze verdeeld in steriele buizen. Om betrouwbare resultaten te verkrijgen, moet tussen 1,5 ml worden overgedragen als een minimale hoeveelheid bij 3 ml als een maximale hoeveelheid per buis.

Blijf in de koelkast en humor voordat u gebruikt.

Als de filtratiemethode niet beschikbaar is, moet het medium onmiddellijk worden gebruikt om betrouwbare resultaten te verkrijgen.

Een andere manier om Stuart's ureumbouillon voor te bereiden is als volgt:

Sommige commerciële huizen verkopen het basismedium voor de ureumtest, exclusief ureum.

Het bedrag dat door het commerciële huis wordt aangegeven, weegt. Het lost op in gedestilleerd water en gesteriliseerd in de autoclaaf bij 121 ° C gedurende 15 minuten. Laat een beetje staan ​​en wanneer het medium warm is 100 ml van een 20% voorbereide ureumoplossing en filtering door filtratie wordt toegevoegd.

Het is verdeeld in steriele buizen, zoals hierboven beschreven.

Christensen's ureumbouillon of agar

-Ureumoplossing Voorbereiding

Weeg 29 gr van uitgedroogd ureum en lost op in 100 ml gedestilleerd water. Gebruik de filtratiemethode om te steriliseren. Niet autoclavaat.

-Ureumbasis agar

Los 24 gr van gedehydrateerde basis op in 950 ml gedestilleerd water. Steriliseer in autoclaaf bij 121 ° C gedurende 15 minuten. Laat staan ​​totdat het een temperatuur van 50 ° C bereikt en voeg het ureum eerder op een aseptische manier toe,.

Giet 4 tot 5 ml in steriele buizen en kantel tot ze stollen. Een lange fluitpiek moet zijn.

Dit medium kan ook in vloeibare vorm worden bereid.

Toepassingen

De ureumtest is uiterst effectief om het proteus -genre te onderscheiden van andere genres van de familie Enterobacteriaceae, gezien de snelle reactie die Proteus biedt.

Als de samenstelling van Christensen wordt gebruikt, helpt de test onderscheid te maken tussen soorten van hetzelfde geslacht. Bijvoorbeeld, S. Hemolyticus en s. Warneri sOP Staphylococcus Negatieve en bètahemolytische coagulase, Maar ze verschillen in wat S. Hemolyticus Het is negatief en S. Warneri Het is positief ureum.

Kan u van dienst zijn: entisch zenuwstelsel

Aan de andere kant gebruikte McNulty met succes 2% Christensen's ureumbouillon om de aanwezigheid van te bestuderen Helicobacter Pylori In biopsiemonsters genomen uit het maagslijmvlies (antrale gebied).

De aanwezigheid van H. pylori Het wordt bewezen met een positieve ureumtest. De duur om de resultaten te observeren is recht evenredig met de hoeveelheid aanwezige micro -organismen.

Zoals te zien is, is het een eenvoudige methode voor de diagnose van Helicobacter Pylori In maagbiopsies.

Ten slotte is deze test ook nuttig om soorten te differentiëren van de genres Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus en Mycobacteria.

Ureumtest gezaaid

De twee methoden vereisen een sterk microbieel inoculum om de resultaten te optimaliseren. De bacteriekolonies worden bij voorkeur afkomstig uit bloedagar en gisten van de Sabouraud -agar, behalve enkele uitzonderingen na. Het inoculum is geëmulgeerd in de vloeibare omgeving.

Voor Stuart's ureumbouillon wordt 37 ºC 24 tot 48 uur geïncubeerd, wetende dat het alleen op zoek is naar stammen van het eiwit geslacht wanneer de stam een ​​bacterie is. Voor gisten kunt u 24 tot 48 uur incubatie incuberen bij 37 ° C of bij kamertemperatuur.

In het geval van de ureumbouillon van Christensen wordt 37 ºC 24 uur geïncubeerd. Als de test negatief is, kan deze tot 6 dagen worden geïncubeerd. Als de test positief geeft vóór 6 uur, geeft dit aan dat het een stam is van het eiwitgenre.

In het geval van Christensen's ureum -agar wordt de ring van de agar sterk geïnoculeerd, zonder lekke band. De bouillon is incuba en interpreteert op dezelfde manier.

QA

Om het medium te testen, kunt u bedieningselementen gebruiken, zoals Proteus Mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 en Salmonella Typhimurium.  De eerste twee moeten positieve resultaten geven en de laatste twee negatieve resultaten.

Referenties

1. Britania Laboratories. Christensen Media (ureumbasis agar). Beschikbaar op: Britanialab.com