Tcbs agar wat is, fundering, voorbereiding, gebruik

Hij TCBS Agar Het is een zeer selectieve en differentiële vaste kweek, gebruikt voor het isolement en de teelt van bacteriën van het geslacht Vibrio, vooral Vibrio cholerae, v. Vulnificus En V. parahaemolyticus Als belangrijkste ziekteverwekkers van dit genre.

Het acroniem TCBS betekent thiosulfaat galgalcitraat. Deze agar staat ook bekend als een selectief medium voor vibries. De oorspronkelijke formule is gemaakt door Nakanishi en vervolgens aangepast door Kobayashi.

Het is samengesteld uit gistextract, pepton van vlees, tripteïne, natriumcitraat, natriumthiosulfaat, oxgalk, sucrose, natriumchloride, ijzercitraat, bromool blauw, thymolblauw en agar.

Deze samenstelling maakt voldoende ontwikkeling van vibriumsoorten mogelijk uit monsters van water, voedsel en uitwerpselen; behalve Vibrio Hollisae, dat niet groeit in dit medium. Bovendien is het TCBS -medium in staat om de groei van andere bijbehorende bacteriën te remmen, vooral coliformen.

Vanwege de ernstige gastro-intestinale en extra-intestinale problemen die sommige soorten van het geslacht Vibrio produceren, is hun diagnose erg belangrijk. De mens is voornamelijk besmet met de consumptie van rauw of weinig gekookt voedsel van de zee of vervuilde wateren, maar ook door wondinfectie.

Hierdoor moeten klinische laboratoria TCBS -agar opnemen in de studie van copoults van monsters voor vloeibare ontlasting, vooral met het uiterlijk van het rijstwater. Vooral als de patiënt verwijst naar contact met zeewater of het hebben van schelpdieren of vissen.

Basis

Het extract van gisten, de peptones en de Tripteína zijn de voedzame bron van dit medium. TCBS -agar is echter een onherbergzaam medium voor de meeste bacteriën.

De hoge selectiviteit wordt gegeven door het aggregaat van natriumcitraat en oxgalk; Beide zijn remmende middelen die ook een alkalische pH op het medium bieden, de groei van de bijbehorende flora beperken en de groei van V. Cholerae, onder andere soorten. Opmerkelijk Vibrio cholerae is erg gevoelig voor zuurgraad.

Natriumchloride balanceert van zijn kant, evenwichtig in evenwicht in het milieu. Omdat de concentratie ervan hoog is, werkt het bovendien ook als een remmer, wat de groei van halofiele bacteriën bevordert.

Tarks is de fermenteerbare suiker die samen met de blauw -bromotimol blauwe en blauwe pH -indicatoren het medium differentiële karakter geven. Om deze reden is het met dit medium mogelijk om fermenterende stammen te onderscheiden van niet -fermenteren.

De kolonies van de fermentaire soorten sucrose ontwikkelen zich in kleur en zullen het medium van groen naar geel veranderen door de productie van zuren. Niet -fermenterend doorzichtig groeit en het medium blijft van de oorspronkelijke kleur (groen).

Evenzo bevat dit medium natriumthiosulfaat als een bron van zwavel en ijzerscitraat als een onthullend middel. Beide tonen bacteriën die in staat zijn om waterstofsulfide (kleurloos gas) te produceren. De H₂S wordt gevormd uit thiosulfaat en vervolgens reageren met ijzersterktecitraat wordt een zichtbaar zwart neerslag gevormd.

Ten slotte is de agar degene die de solide consistentie voor de omgeving biedt.

Voorbereiding

Weeg 89 gr van het uitgedroogde medium en lost op in een liter gedestilleerd water. Helpen oplossen voor frequente verwarming en agitatie. Het mengsel kan maximaal 2 minuten worden gekookt.

Dit medium doet geen autoclava. Na zijn oplossing wordt het rechtstreeks op steriele platen geserveerd. Door te stollen worden ze op een omgekeerde manier in bloedplaatjes besteld en tot gebruik worden bewaard in koelkast (2-8 ° C).

Het medium na de voorbereide moet op pH 8,6 ± 0,2 zijn.

De kleur van het gedehydrateerde medium is licht beige of beige-groen, en de kleur van het medium is groen bos of blauwgroen.

Het is belangrijk om de platen te laten temperen voordat de monsters zaaien.

Gebruik

Het meest voorkomende monster voor vibrieuze isolatie is diarree ontlasting.

De ontlastingsmonsters kunnen niet onmiddellijk in de selectieve omgeving worden gezaaid, ze moeten in het midden van Cary Blair worden getransporteerd.

Om de gevoeligheid van het gewas te vergroten, kunnen de ontlasting door Peptonada -water worden doorgegeven aan pH 8,4 als een middel om maximaal 8 uur te verrijken, vanaf daar is het subjectief voor de TCBS -medium.

Er moet ook rekening mee worden gehouden dat sommige vibrerende stammen septikemie bij immunosuppressieve patiënten kunnen veroorzaken, daarom kunnen ze worden geïsoleerd uit bloedculturen. Evenzo kunnen monsters van voedsel en voedsel uit de zee worden geanalyseerd wanneer er epidemische uitbraken van de cholera -ziekte zijn.

Gezaaid

Het inoculum van de onderzochte steekproef moet prominent aanwezig zijn, de gezaaide één wordt uitgevoerd door de uitputtingstruatiemethode. De platen worden 24 uur bij aerobiose bij 37 ° C geïncubeerd.

De vermoedelijke koloniën van Vibrio cholerae Het zijn middelgrote, gladde, ondoorzichtige, dunne en geel -gekleurde randen omdat ze de sucrose fermenteren.

Groeit op dezelfde manier soorten van V. Alginolyticus, V. rivier, V. Hareyi, v. Cincinnatiensis, v. Furnissii, V. Metschnikovii en een beetje V. Vulnificus. Andere klinisch belangrijke soorten zoals V. parahaemolyticus Ze fermenteren geen sucrose en ontwikkelen zich als olijfgroene koloniën.

Aan de andere kant moet er rekening mee worden gehouden dat sommige stammen van aeromonen en plesiomonen die oxidase zijn (+) kunnen groeien in dit medium en gele kolonies kunnen ontwikkelen die de arts kunnen verwarren. Terwijl sommige stammen van pseudomonas ook oxidase (+) groeien als groene kolonies evenals V. parahaemolyticus.

Beperking

De oxidasetest die positief is voor het Vibrio -geslacht mag nooit worden uitgevoerd uit kolonies verkregen uit de TCBS -agar, omdat het verkregen resultaat een vals negatief zal zijn. De verbindingen van het medium interfereren sterk in deze test. Daarom moet het worden gedaan bij personen in bloedagar.

QA

Om te bewijzen dat het medium in goede staat is, is het raadzaam.

Hiervoor kunt u stammen gebruiken van:

-Vibrio cholerae - bevredigende groei (gele koloniën, doorschijnende rand).

-Vibrio parahaemolyticus - bevredigende groei (kolonie met groen centrum en doorschijnende rand).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - Bevredigende groei (gele kolonies met halo's van dezelfde kleur rond de kolonie).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - Totale of gedeeltelijke remming (kleine gele of doorschijnende kolonies).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- Gedeeltelijke of totale remming (blauwe kolonies).

-Escherichia coli ATCC 25922 - volledig geremd.

-Proteus Mirabilis ATCC 43071 - Totale of gedeeltelijke remming. (Kleine kolonies groene rand doorschijnende rand).

Incubatie van een medium zonder inoculeren mag geen wijziging zijn.

Referenties

1. BD -laboratorium. BD. TCBS Agar. Beschikbaar op: BD.com
2. Britania Laboratories. Gemiddelde TCBS. Beschikbaar op: Britanialab.com