Bismuth Sulfite Agency, voorbereiding en gebruik

Hij bismut sulfite agar Het is een solide, selectieve en differentiële cultuurmiddelen, speciaal geformuleerd voor isolatie van Salmonella enterica subgrupo enterica typhi seretypo, Onder andere soorten salmonella. Het milieu staat bekend als BSA is het eens in het Engelse bismut sulfite -agar.

De originele bismut sulfiet -agarformule werd in 1927 gemaakt door Wilson en Blair (glucose bismuth sulfietijzeren medium); Dit bevatte natriumsulfiet, glucose, bismut-oplossing, ammoniumcitraat, ferro sulfaat en agar-adding.

48 -uur Groei van Salmonella SP -incubatie in Bismuth Sulfite Agar. Bron: Pixnio.COM -auteur: DR. W. R. Erving, USCDCP

Tegenwoordig is er een aanpassing van het oorspronkelijke medium, samengesteld uit vleesextract, peptones van vlees en caseïne, bismuts sulfietindicator, glucose, disatriumfosfaat, ijzersulfaat, felgroen en agar-agar.

Er zijn veel middelen voor het isolement van Salmonella -soorten, maar als het gaat om het herstellen van het Typhi -serotype, biedt de bismuts sulfiet -agar een opmerkelijk voordeel daarover, omdat in de meerderheid een zeer laag of nul herstel van dit micro -organisme wordt verkregen.

Het is echter noodzakelijk om meer dan één type medium te gebruiken als het gaat om het isoleren van enteropathogeen, omdat bismut sulfite -agar minder effectief is voor andere salmonella -soorten en voor het Shigella -geslacht, die in deze agar worden geremd of ontwikkeld.

Opgemerkt moet worden dat van alle soorten Salmonella, het Typhi -serotype een van de belangrijkste enteropathogen in de mens is, dit is het enige reservoir. Deze serovariteit produceert tyfus, gastro -enteritis, bacteremie en septikemie.

Om deze reden is het relevant om deze agar op te nemen wanneer monsters van water, uitwerpselen of voedingsmiddelen worden geanalyseerd wanneer uw aanwezigheid wordt vermoed.

[TOC]

Basis

Zoals de meeste teeltmedia bevat bismutsulfietagar voedingsstoffen om bacteriële ontwikkeling te bevorderen, zoals peptones en vleesextract. Evenzo functioneert glucose als een bron van energie en koolstof.

Kan u van dienst zijn: biogenetische elementen

Nu zullen niet alle bacteriën in dit medium groeien, omdat de bismut sulfite -agar een selectief medium is. Dit bevat verbindingen die de groei van gram -positieve micro -organismen en bepaalde gram negatieve bacteriën remmen. Deze verbindingen zijn: de bismut sulfietindicator en felgroen.

Aan de andere kant handhaaft het dinatriumfosfaat de osmolariteit en de pH van het medium.

Bovendien is bismuts sulfietagar een differentiaal medium dankzij de aanwezigheid van ijzersulfaat, dat de vorming van h toont₂S.  De H₂S gevormd door bacteriën reageert met ijzerpaardsulfaat en vormt een duidelijk zichtbaar onoplosbaar neerslag.

Ten slotte biedt Agar -agar een solide consistentie voor het milieu.

Voorbereiding

Weeg 52,3 gr van het gedehydrateerde medium en los op in een liter water. Verwarm het mengsel gedurende 1 minuut met frequente agitatie, tot de totale oplossing. Wees niet te veel oververhit. Dit medium wordt niet gesteriliseerd in autoclaaf, omdat de extreme warmte het kweekmedium beschadigt.

Laat afkoelen bij 45 ° C en schud voordat u op petrische steriele platen serveert. Het wordt aanbevolen om borden met een goede dikte te maken. Hiervoor moet 25 ml in elke plaat worden gegoten. Laat stollen. Zoals een middel is dat niet wordt gesteriliseerd, is het normaal dat het onmiddellijk wordt gebruikt om te worden voorgesteld.

Een studie van D'Aust in 1977 toonde echter aan dat er een beter herstel van is Salmonella Typhimurium En Salmonella enteritidis Aangezien het bismut sulfietmedium leeftijden, worden de prestaties voor serovaries niet beïnvloed Typhi En Parathyphi B.

D'Aous beveelt aan om de platen te gebruiken tot de dag 4 van koeling, hoewel het waarschuwt dat als het medium de selectiviteit afneemt, waardoor gemakkelijker stammen van zich ontwikkelt Proteus vulgaris.

Dat is de reden waarom, voor zeer vervuilde monsters, zoals uitwerpselen, het de voorkeur verdient om het nieuw voorbereide medium te gebruiken. Anders gebruikt voor dag 4 van zijn voorbereiding. Andere auteurs bevelen aan om de platen te gebruiken de dag na hun voorbereiding, opgeslagen in koeling.

Kan u dienen: uracil: structuur, functies, eigenschappen, synthese

Gekoelde platen moeten vóór het gebruik zijn. De middelgrote pH moet 7,5 ± 0,2 zijn. De kleur van het onbetaalde medium is beige en voorbereid is opalescente groenachtig grijs.

Toepassingen

Onder de monsters die in dit medium kunnen worden gezaaid, zijn ontlastingsmonsters, consumptiewateren of voedsel en voedsel.

Om de isolaten te verbeteren, wordt het aanbevolen om een ​​pre-verrijkingsbehandeling uit te voeren met lactosebouillon en na verrijking met tetrationate bouillon of selenito-bouilloncystine, alvorens te zaaien in bismut sulfietagar.

De platen worden 24 tot 48 uur geïncubeerd bij 35 ° C ± 0,2, in aerobiose.

Kenmerken van de koloniën in bismut sulfietagar

De kolonies van Salmonella Typhi Ze worden meestal in deze agar gezien in 24 uur met een zwart centrum en omgeven door een felgroene halo. Terwijl, in 48 uur zwarte draait volledig vanwege de vorming van waterstofsulfide.

Salmonella parathyphi a presenteert kolonies met variabele kenmerken. Na 18 uur incubatie kunnen zwarte, groene of transparante kolonies worden waargenomen, met mucoid uiterlijk. Terwijl ze na 48 uur volledig zwart worden waargenomen en soms met een uitgesproken metalen helderheid.

S. Parathyphi a Het heeft de neiging om het medium rond de kolonie te vervallen.

Salmonella SP Black of GrayerColonias Grounds, met of zonder metalen heldere, Maying wordt het oppervlak of niet.

Coliforme stammen zijn meestal volledig geremd, maar als ze groeien, ontwikkelen ze zich als ondoorzichtige groene of bruine koloniën en metalen helderheid. Verf het medium niet rond de kolonie.

Beperking

-Zeer zwakke inoculums kunnen kolonies van Salmonella Typhi lichtgroen, onopgemerkt worden en de cultuur melden als negatief.

Kan u van dienst zijn: takken van fysiologie

- Bismut sulfiet -agar kan het herstel van sommige salmonella -soorten remmen, zoals S. Sendai, s. Berta, s. Gallinarum, s. abortus-equi.

-Dit medium remt de meeste soorten van het Shigella -geslacht.

- S. Typhi en S. Arizonae Ze kunnen zeer vergelijkbare kolonies geven.

-De coliformen geproduceerd door H₂S zoals Proteus en Citrobacter produceren kolonies vergelijkbaar met die van Salmonella, dus het is noodzakelijk om biochemische identificatietests uit te voeren.

-Een goede ostria moet worden gedaan om geïsoleerde kolonies te verkrijgen; Het is de enige manier om de typische kenmerken van de kolonies van het geslacht Salmonella te observeren.

QA

Voor steriliteitscontrole wordt een plaque geïncubeerd zonder te inoculeren bij 37 ° C, er wordt verwacht dat er geen groei of kleurverandering is.

Voor kwaliteitscontrole kunt u bekende stammen zaaien zoals:

Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Het wordt verwacht dat Escherichia coli En Shigella flexneri zijn gedeeltelijk geremd om respectievelijk groenachtige en bruine bruine kolonies te ontwikkelen. Terwijl beide Salmonglars een uitstekende ontwikkeling moeten hebben met zwarte kolonies met metalen helderheid, en ten slotte Enterococcus faecalis moet volledig worden geremd.

Referenties

1. Wilson, W., & E. M. MCV. Blair. Gebruik van een glucose bismut sulfietijzermedium voor het isolement van B. Tyfosus En B. Proteus. The Journal of Hygiene, 1927; 26(4), 374-391. Opgehaald van .Jstor.borg
2. D'Aust JY. Effect van opslagomstandigheden van de prestaties van bismut sulfiet -agar. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122-124. Beschikbaar in: NCBI.NLM.NIH.Gov
3. IVD -laboratoria. Bismuth-Sulfite Agar volgens Wilson-Blair. 2009. Beschikbaar op: bismuthsulfitagar_span_jan_2009%20 (2).PDF
4. Himedia Laboratories. Bismut sulfite agar. 2017. Beschikbaar bij: Himediabs.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Bailey & Scott microbiologische diagnose. 12 ed. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR. Argentinië.
6.  Morales R, van La Cruz D, Leyva G en Ybarra M. Bacteriologische kwaliteit van rauwe geitenmelk geproduceerd in Miravalles, puebla. Rev Mex van ing chem 2012; 11 (1): 45-54