Dextrose aardappel, voorbereiding en gebruik

Hij Dextrose aardappelagar Het is een solide, niet -selectieve voedingscultuurmedium. Daarin kunnen bacteriële en schimmelsoorten groeien, maar het gebruik ervan is vooral aangegeven voor het isolement van filamenteuze schimmels en gisten. Het is ook bekend als PDA -medium door de uitdrukking in Engelse aardappeldextrose -agar.

Het is met name handig voor het isolement van fytopathogene schimmels, dat wil zeggen die die groenten beïnvloeden. Om de monsters van geïnfecteerde groenten te zaaien, kunnen andere media zoals Sabouraud of Malt-agar worden gebruikt, maar voor het routinematige gebruik heeft de dextrose-paus agar de voorkeur door te verkrijgen.

Aspergillus niger en sinemas in dextrose paus agar. Bron: Alextrevelian 006 bij Engels Wikipedia [Public Domain]/Joselrojas [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licenties/by-sa/4.0)]

Het wordt ook gebruikt voor het tellen van schimmelkolonies in monsters van cosmetica, farmaceutische producten en wat zuivelproducten. Het is ook bevorderlijk voor het zaaien van de huidschraapmonsters op zoek naar dermatofyten, die zeer goed groeien in dit medium, waardoor hun karakteristieke pigmenten worden ontwikkeld.

De medium dextrose -paus is een heel eenvoudig en gemakkelijk medium om in het laboratorium voor te bereiden. Het bevat, zoals de naam impliceert, aardappelinfusie, dextrose en agar -agar. Bovendien kunnen remmende stoffen worden toegevoegd om bacteriegroei te voorkomen en de selectiviteit voor schimmelsoorten te vergroten.

[TOC]

Basis

De dextrose paus agar is een kweekmedium dat de nodige voedingselementen biedt voor de ontwikkeling van filamenteuze schimmels en gisten.

De combinatie van aardappelinfusie met glucose biedt de perfecte energiebron zodat er een bevredigende groei van schimmels is. Terwijl Agar degene is die consistentie biedt aan de omgeving.

Het medium alleen remt de groei van bacteriën niet, daarom is het een niet -selectief medium. Om dit te doen, heeft selectief het aggregaat van remmende stoffen zoals wijnsteenzuur of antibiotica nodig.

Voorbereiding

-Zelfgemaakte (niet -commerciële) papa dextrose agar

Petri -platen

Het is als volgt voorbereid:

In de eerste plaats worden de aardappelen zeer goed gewassen door het land te verwijderen dat ze bezitten. Ze worden met alles en shell in fijne plakjes gesneden. 200 gr van aardappelen worden gewogen en gekookt in een liter gedestilleerd water, gedurende een half uur.

De tijd is afgewerkt filters of zeef de volledige voorbereiding door gaas.

De verkregen vloeistof wordt voltooid met gedestilleerd water tot het bereiken van een liter. De infusie wordt 20 gr van agar -agar en 20 gr van dextrose toegevoegd, mengt goed en autoclava bij 121 ° C, 15 pond druk gedurende 15 minuten.

Kan u van dienst zijn: co -evolutie

Laat afkoelen tot 50 ° C en serveer in petri -steriele platen. De voorbereide platen worden in de koelkast bewaard.

Wiggen

U kunt ook dextrose -aardappelpartges voorbereiden.

In dit geval, voordat het steriliseert in de autoclaaf. Bewaar in een koelkast.

Het medium bevindt zich op een pH van 5.6 ± 0.2, sommige laboratoria voegen echter 10% wijnsteenzuur toe om de pH te verlagen tot 3,1 ± 0.1 met als doel de bacteriegroei te remmen.

In dezelfde zin geven andere laboratoria er de voorkeur aan om antibiotica toe te voegen om dit selectief te doen voor de teelt van schimmels en de ontwikkeling van bacteriën te voorkomen.

-Commerciële voorbereiding van de dextrose paus agar

Weeg 39 gr van commercieel verkrijgbare uitgedroogd en los op in een liter gedestilleerd water. Verlaat 5 minuten.

Het mengsel wordt verhit door regelmatig te roeren tot de totale oplossing. Vervolgens wordt het gedurende 15 minuten gesteriliseerd in autoclaaf bij 121 ° C.

U kunt borden of wiggen voorbereiden. Ga verder zoals hierboven beschreven.

De pH is 5,6 ± 0,2. Als de pH van 3,1 gewenst is, moet 14 ml sterarisch wijnsteenzuur worden toegevoegd aan 20% voordat u in de platen dient.

De kleur van het onvoorbereide medium is beige en voorbereid is duidelijk barnsteen met een enigszins bewolkt of opalescent uiterlijk.

Toepassingen

Proces voor het planten van plantenmonsters in dextrose -pot

-Voor bladeren met vlekken

De bladeren worden in stukken gesneden.

Plaats in een schip van 50 cc met 50% alcohol de stukken van de bladeren (bevlekte en gezonde stukken) om het oppervlak met 20 tot 30 seconden te desinfecteren. Gooi alcohol en voeg een natriumhypochloriet toe 20% gedurende 40 tot 50 seconden als ze fijne bladeren zijn en verhoog de tijd tot 80 seconden als het schors en trunks is.

Gooi het natriumhypochloriet en neem de gedesinfecteerde stukken met een steriele klem en plaats ze op het middelgrote oppervlak (maximaal 10 stuks). Plaats de datum en incubeer van 20 tot 30 ° C.

-Voor fruit en knollen

Als de vrucht vlezig is, open dan het fruit dat wordt getroffen door de schimmel en neem stukjes met een steriele scalpel, zowel van de zieken als het gezonde deel en plaats het op het oppervlak van de agar.

Als de vrucht citrus is, zoals een citroen of een sinaasappel, moeten de zaden worden geopend en zaaien.

Kan u van dienst zijn: fosfatidylinositol: structuur, training, functies

Wanneer het fruitoppervlak wordt aangetast en wordt gesproken, is het ideaal om de geraspte methode op de plaat te gebruiken; Dit bestaat uit het spelen van de sporen met een gesteriliseerde en gekoelde "L" -vormige spatel, en vervolgens 2 tot 3 keer in zigzag gezaaid op de agar.

-Voor granen

Ze desinfecteren hetzelfde als beschreven in de bladeren en vervolgens op de agar geplaatst.

-Voor takken en stengels

Een raspecue van de cortex wordt uitgevoerd en vervolgens worden stukken van het gezonde en zieke deel genomen en direct op de agar gezaaid en gezaaid.

De geplante plaques worden 72 uur in aerobiose geïncubeerd bij 20-30 ° C.

Proces voor het planten van huidschalen, haar of nagels op de dextrose paus agar

Het monster moet worden uitgevoerd met behulp van een scalpelplaat nr. 11, om aangetaste haar, huid of nagelschalen te snijden op zoek naar dermatofyten. Voordat het monster wordt gebruikt, moet het gebied met 70% alcohol worden gedesinfecteerd.

-Huidmonster

In de zwendellaesies moet de rand van het letsel worden geschraapt, omdat het waarschijnlijker is om de schimmel te vinden.

In exudatieve laesies wordt het monster genomen met droog of nat wattenstaafje. Zaai onmiddellijk over de paus dextrose of sabouraud agar. Vermijd middel van transport.

Een andere methode voor het nemen van monsters is via de techniek van het tapijtvierkant van Mariat en Ada Campos. In dit geval wordt het getroffen gebied 5 keer ingewreven met een stuk steriele wol voor het volgende gewas.

Het monster kan direct in de kweekmedium worden geplaatst.

-Haarmonster

Afhankelijk van de pathologie kan het aangetaste deel of de wortelstart worden gesneden. Plaats het monster in de kweekmedium.

-Spijker

Ze kunnen worden geschraapt of een specifiek deel van de getroffen nagel gesneden. Zal afhangen van het type letsel.

Snijd het monster in bits van 1 mm voordat u zaait om de kans op schimmelcontact met het kweekmedium te vergroten.

Identificatieprocedure

De kolonies verkregen in de plaat zijn geïsoleerd in buizen bevatten.

De microscopische studie (observatie van structuren en hun formaties) kan worden gedaan door microculturen of directe observatie van de microscoop tussen plaat en lamel.

Kan u van dienst zijn: histidine: kenmerken, structuur, functies, voedsel

Kolonies tellen

Dit medium kan ook worden gebruikt om de lading van schimmels en gisten te bepalen die aanwezig zijn in plantenmonsters, voedsel, cosmetica of medicijnen. Daartoe wordt aardappelaardappel aangevuld met antibiotica gebruikt, zoals: (chlooramfenicol, chloorotetracycline of beide).

Giet 1 ml van het monster - bij voorkeur verdund - op een steriele en lege petri -plaat, smelt vervolgens een dextrose -aardappelpistool en laat het afkoelen bij 45 ° C. Giet over de petri -plaat en roteer tot het homogeniseren. Laat in rust tot.

Incubeer in aerobiose bij 20-25 ° C (schimmels) of bij 30-32 ° C (gisten) gedurende 5 tot 7 dagen of meer, afhankelijk van het type schimmel dat wordt gezocht en het type monster. Twee platen kunnen worden gebruikt om beide temperatuurbereiken te incuberen.

Hoogleraar schimmelkolonies in een steekproef van voedsel. Dextrose aardappelagar aangevuld met antibiotica. Bron: Pxhere.com Photo/777267

Onderhoud van schimmelsoorten

Dextrose paus agar kan worden gebruikt om haalbare schimmelstammen te handhaven voor meerdere jaren.

Hiervoor wordt de schimmel gekweekt in dextrose -aardappelpartjes en zodra de schimmel is gekweekt, is deze bedekt met minerale olie. De olie moet 45 minuten in autoclaaf worden gesteriliseerd en een geschatte viscositeit van 300 tot 330 saybolt hebben. De olie moet de punt van de ring van 1 tot 2 cm overschrijden.

QA

Vanaf elke voorbereide partij moeten 1 of 2 platen worden genomen en gedurende 48 uur of 20 ° C gedurende 96 uur bij 25 ° C worden geïncubeerd en gedurende 96 uur bij 25 ° C. Goede steriliteitscontrole is er een waarin de ontwikkeling van kolonies niet wordt waargenomen.

U kunt ook bekende of gecertificeerde bedieningselementen gebruiken, zoals:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrofytes ATCC 9533. In alle gevallen wordt een goede groei verwacht.

Referenties

1. Britania Laboratories. Glycosado pot. 2015. Beschikbaar op: Britanialab.com
2. Neogen Laboratories. Dextrose aardappel. Beschikbaar op: Foodsafety.Neogen.com
3. Insumolab Laboratory. Dextrose aardappelagar. Beschikbaar bij: Insumolab.Klet
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Bailey & Scott microbiologische diagnose. 12 ed. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR. Argentinië.
5. Huis-huis G. Algemene mycologie. 1994.  2e ed. Centrale Universiteit van Venezuela, bibliotheekedities. Venezuela Caracas.
6. Aceituno M. Evaluatie van microbiologische kwaliteit in oogschaduw, compact stoftype van een nationaal productielaboratorium, volgens Pharmacoea USP 2005. Scriptie om te kiezen voor de titel van farmaceutische chemicus. Universiteit van San Carlos van Guatemala.
7. Cuétara M. Verwerking van oppervlaktemonsters. Ibero -American Mycology Magazine. 2007; PP. 1-12