Agar m.R.Wat is, fundering, voorbereiding, gebruik

Hij Agar m.R.S. Het is een selectief vaste kweekmedium, gebruikt voor de isolatie en het tellen van melkzuurbacteriën, vooral van het geslacht Lactobacillus. Deze agar werd in 1960 opgericht door de mens, Rogosa en Sharpe, met het medium dezelfde naam, maar vanwege de complexiteit ervan wordt de afkorting M vaak gebruikt.R.S.

Het bestaat uit peptoneiwit, vleesextract, gistextract, glucose, sorbitan monoleato, dipbotassiumfosfaat, natriumacetaat, ammoniumcitraat, magnesiumsulfaat, mangaansulfaat en agar.

Han en Sharpe Man Agar (M.R.S.) gezaaid met lactobacillus sp. Bron: Gedoneerde foto voor dit artikel door de auteurs: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto gemaakt tijdens het onderzoek getiteld: evaluatie van melkzuurbacteriën en bifidobacteriën met probiotisch potentieel bij moedermelk en uitwerpselen van kinderen.

Deze samenstelling maakt de goede ontwikkeling van melkzuurbacteriën uit klinische monsters mogelijk, zoals uitwerpselen, vaginale secretie, orale monsters en moedermelk, evenals zuivel- en vleesvoedsel.

Het wordt niet routinematig gebruikt in klinische laboratoria, omdat melkzuurbacteriën zelden betrokken zijn bij pathologische processen. In het gebied van de voedselmicrobiologie komt het gebruik van agar m echter vaker voor.R.S.

Aan de andere kant wordt dit medium gebruikt door sommige onderzoekscentra waarvan de doelstelling de studie is van melkzuurbacteriën.

Basis

De man, Rogosa en Sharpe hebben een vrij complexe compositie. Door de functie te scheuren die elk van zijn componenten vervult, kunt u de basis verklaren.

Peptoneiwit, vleesextract, gistextract en glucose zijn voedingsstoffen die de bron van koolstof, stikstof, vitamines en mineralen bieden die nodig zijn voor bacteriegroei. Bovendien is glucose de universele energiebron die in de meeste teeltmedia wordt gebruikt.

Aan de andere kant, om de groei van melkzuurbacteriën te bevorderen, is de aanwezigheid van onmisbare cofactoren (kationen) noodzakelijk in het metabolisme van Lactobacillus en gerelateerde bacteriën; Deze verbindingen zijn natrium-, magnesium- en mangaanzouten.

Het kan u van dienst zijn: opssonisatie: wat is, typen, functies, moleculen

Evenzo zijn de sorbitan of polysorbaat monoleoaat 80 een belangrijke bron van vetzuren wanneer ze worden geabsorbeerd als voedingsstoffen.

Bovendien remmen de sorbitan monoleoate en ammoniumcitraat Act de ontwikkeling van de bijbehorende flora, met name gram negatieve bacteriën, waardoor het selectieve karakter van deze agar wordt.

Ten slotte is de agar -agar degene die de solide consistentie voor de omgeving biedt.

Er zijn andere varianten van de Rogosa Sharpe Agar; Een van hen is de aangevuld met cysteïne (m.R.S.c), zeer nuttig voor de isolatie van bifidobacteriën, onder andere micro -organismen. Aan de andere kant is er de MRS aangevuld met neomycine, paromomycine, buttisch zuur en lithiumchloride, speciaal voor de selectieve telling van bifidobacteriën in zuivelproducten.

Voorbereiding

Weeg 68,25 gram van het gedehydrateerde medium en los op in een liter gedestilleerd water. Laat 5 minuten staan. Om in zijn geheel op te lossen leidt er toe dat een warmtebron regelmatig zwaait en 1 tot 2 minuten kookt. Steriliseer in autoclaaf bij 121 ° C gedurende 15 minuten.

Wanneer u de autoclaaf verlaat, laat u een paar minuten staan ​​en distribueren nog steeds heet op Petri -steriele platen.

Laat de platen stollen en investeren, bestellen in bloedplaatjes en opslaan in de koelkast tot gebruik. Laat de borden kamertemperatuur nemen voordat u ze gebruikt.

De middelgrote pH moet 6,4 ± 0,2 zijn. Sommige commerciële huizen bevelen pH aan tussen 5,5 en 5,9.

Het gedehydrateerde medium is beige en voorbereid is donker barnsteen.

Zowel uitgedroogd medium als voorbereide platen moeten worden opgeslagen van 2 tot 8 ° C.

Toepassingen

De agar m -platen.R.S. Ze kunnen op het oppervlak worden gezaaid (uitputting of met drigalski spatel). Het kan ook door diepte worden gezaaid. De platen moeten worden geïncubeerd bij 37 ° C in microaerofilie (4% van of₂ en 5-10% CO₂) Gedurende 24 tot 72 uur.

Kan u van dienst zijn: amensalisme: kenmerken, voorbeelden, verschillen met dinerisme

De gezaaide methode wordt gekozen volgens het achtervolgde doel (isolatie of telling).

Kenmerken van de koloniën

De vermoedelijke kolonies van Lactobacillus groeien van witachtige kleur en hebben een mucoïde of romig uiterlijk in deze agar. Vervolgens moeten ze zich identificeren.

Isolatie van melkzuurbacteriën

Hiervoor wordt de gezaaide oppervlakte gebruikt. Monsters die moeten worden aangeklaagd, vereisen een eerdere procedure. 

In het geval van moedermelkmonsters wordt het aanbevolen om 1 ml van het monster te centrifugeren op 14.000 RMP gedurende 10 minuten om de vetlaag te verwijderen. 900 µl worden weggegooid, en in de resterende 100 µl wordt het sediment gesuspendeerd en het oppervlak van de agar m.R.S. Dan moet je gelijkmatig verdeelen met een Drigalski -spatel.

In het geval van ontlastingsmonsters wordt één (1) gram ontlasting gewogen en wordt 9 ml steriel peptoned water 0,1%gehomogeniseerd, overeenkomend met een verdunning 1/10. Vervolgens worden seriële verdunningen uitgevoerd, tot een laatste verdunning van 10^-4.

Eindelijk worden 100 ul verdunningen 10 genomen^-2, 10^-3 en 10^-4 En elke verdunning wordt gezaaid op mevrouw Agar, gelijkmatig verdeeld met een drigalski -spatel.

Melkzuur bacteriën tellen

In dit geval wordt de gezaaide diepte gedaan.

Voor moedermelkmonsters wordt 1 ml genomen en in een steriele conische plastic buis geplaatst. Agar MRS wordt toegevoegd bij een geschatte temperatuur van 40 ° C tot een eindvolume van 25 ml, waardoor een homogeen mengsel wordt verkregen. Vervolgens wordt het in steriele petri gegoten.

Voor ontlastingsmonsters worden verdunningen uitgevoerd, zoals hierboven beschreven. 1 ml van elke verdunning wordt genomen en plastic buizen steriel. Masted agar mrs wordt toegevoegd aan een volume van 25 ml.

Kan u van dienst zijn: Aquatic Biomes: Kenmerken, typen, flora, fauna, voorbeelden

Het mengsel van elke verdunning wordt uniform in petri -steriele platen gegoten. Laat eindelijk staan ​​tot uw polymerisatie.

Kolonies rekenen op Man en Sharpe Agar (m.R.S.)). Bron: gedoneerde foto voor dit artikel. Auteurs: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto gemaakt tijdens het onderzoek getiteld: evaluatie van melkzuurbacteriën en bifidobacteriën met probiotisch potentieel bij moedermelk en uitwerpselen van kinderen.

Op onderzoeksniveau

Elke dag wordt de studie van melkzuurbacteriën meer interesse; Vooral onderzoekers proberen nieuwe stammen te kennen en hun potentieel als initiatieffout voor standaardisatie bij de productie van zuivelproducten, onder andere toepassingen.

In die zin, Alvarado et al. (2007) gebruikte agar m.R.S. Om een ​​studie uit te voeren waarin ze melkzuurbacteriën zijn geïsoleerd, geïdentificeerd en gekarakteriseerd in een Ahumado Andes Andes -ambachtelijke kaas.

In de kaas vonden ze de aanwezigheid van bacteriën van de genres lactococcus en lactobacillus, en concludeerden dat de mengsels van geïsoleerde stammen voldoende zijn als het initiëren van stammen bij de vervaardiging van kazen uit gepasteuriseerde melk.

Aan de andere kant, Sánchez y cols. (2017) gebruikte agar m.R.S. Om de aanwezigheid van melkzuurbacteriën in het spijsverteringskanaal van de big.

Met dit medium slaagden ze erin om vier soorten te isoleren: Lactobacillus Johnsonii, Lactobacillus Brevis, Enterococcus Hirae En Pediococcus pentosaceus.

Evenzo, Báez et al. (2019) gebruikte veroudering m.R.S. Om melkzuurbacteriën (BAL) en bifidobacteriën te evalueren met probiotisch potentieel bij moedermelk en uitwerpselen van kinderen.

Ze slaagden erin om 11 Bal en 3 te isoleren Bifidobacteria sp In moedermelk, en 8 BAL en 2 Bifidobacteria sp. In uitwerpselen. Allen vervulden bepaalde parameters die ze als bacteriën met probiotische activiteit accrediteren.

De auteurs concludeerden dat zowel moedermelk als de uitwerpselen van baby's die uitsluitend dienen als natuurlijke bronnen van probiotische bacteriën.

QA

Om de kwaliteit van de agar m te evalueren.R.S. Bedieningselementen zoals:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli en Bacillus Cereus.

De verwachte resultaten zijn een bevredigende groei voor de eerste 6 bacteriën, terwijl EN. coli En Bacillus cereus moet in zijn geheel worden geremd.

Referenties

1. Britania laboratorium. M.R.S agar. Beschikbaar op: Britanialab.com