Emb

E Lungerangulaire vlek. Coli op emb agar. Bron: Eunice Laurent, CC BY-SA 4.0, Wikimedia Commons

Wat is de agar emb?

Hij Emb Het is een selectief en differentieel vaste kweekmedium dat wordt gebruikt voor het isoleren van gram -negatieve bacillen, voornamelijk van de familie Enterobacteriase en andere niet -voortschrijdende gram -negatieve backli. Het is ook bekend met het acroniem EAM, wat betekent Eosina-Azul van methyleen.

Dit medium is gemaakt door Holt-Harris en Teague in 1916. Het bevat pepton, lactose, sucrose, dipotassiumfosfaat, agar, eosine, methyleenblauw en water. Het lijkt erg op de MacConkey -agar, vooral als de emb -agar door Levine wordt gebruikt, die geen sucrose bevat.

In feite bepaalt elk laboratorium of het met het een of het ander werkt, omdat ze dezelfde functie vervullen, hoewel ze biochemisch anders zijn.

Het presenteert zelfs hetzelfde ongemak als klassieke MacConkey Agar in Swarming's productie voor geslacht Proteus. Daarom kan de concentratie van de agar om dit fenomeen te voorkomen, met maximaal 5% worden verhoogd.

Basis

Selectief

De EMP -agar is subtiel selectief omdat het anilinische (eosine en methyleenblauw) kleur bevat, die fungeren als remmers, waardoor de groei van de meeste gram -positieve bacteriën en sommige veeleisende veeleisende veeleisende veeleisende bacillen voorkomen.

Deze agar heeft echter het ongemak dat sommige gram -positieve bacteriën de aanwezigheid van remmende stoffen kunnen weerstaan ​​en als kleine kleurloze punctief kunnen groeien, zoals de Enterococcus faecalis en een beetje Staphylococcus.

Bepaalde gisten kunnen ook groeien, zoals Candida albicans complex, die zeer kleine roze kolonies zullen geven. Clamidospores kunnen zich zelfs uit deze gist ontwikkelen als het monster door diepte wordt gezaaid.

Differentiaal

Aan de andere kant is Emb Agar ook een differentieel medium, omdat deze kleurstoffen samen (eosine en methyleenblauw) de eigenschap hebben om een ​​neerslag in zure pH te vormen, daarom dienen ze als indicatoren voor de productie van hetzelfde.

Kan u van dienst zijn: allometrie

Daarom produceren zwak fermenterende of sucrose -bacteriën paarse kleuren in 24 tot 48 uur. Bijvoorbeeld genres Klebsiella, Enterobacter En Serratia.

Die bacteriën die lactose sterk gisten, zoals Escherichia coli, of sucrose, zoals Enterocolithic Yersinia of Proteus Penneri, Ze vormen een groenachtig zwart neerslag, waardoor metalen helderheid verschijnt, kenmerkend bij deze soorten.

Opgemerkt moet worden dat als het EMB -levinemedium wordt gebruikt (zonder sucrose), Enterocolithic Yersinia En Proteus Penneri Ze zullen transparante kolonies produceren.

Bacteriën die geen lactose of sucrose fermenteren, worden gevoed door de aanwezigheid van peptonas, die aminozuren en stikstof bieden die nodig zijn voor bacteriële ontwikkeling, en transparante kolonies produceren. Bijvoorbeeld genres Salmonella En Shigella, onder andere.

Het is ook belangrijk om dat geslacht te benadrukken Acinetobacter Het kan blauwe lavendelkolonies presenteren, zelfs als het geen lactosefermeter of sucrose is, maar ze hebben de eigenschap om het methyleenblauw op zijn celwand te bevestigen. Dit kan ook gebeuren met andere oxidatieve bacteriën.

Voorbereiding

Het originele uitgedroogde medium is licht beige. Om dit kweekmedium voor te bereiden, moet 36 gram van het gedehydrateerde medium worden gewogen en gesuspendeerd in een oplossing die een liter gedestilleerd water bevat.

Nadat je het mengsel 5 minuten in rust hebt verlaten, neem je de fixola naar een warmtebron en meng je op een krachtige en constante manier totdat het kookt en volledig oplost.

Vervolgens moet het reeds opgeloste kweekmedium gedurende 15 minuten worden gesteriliseerd met behulp van de autoclaaf bij 121 ° C.

Tijd voltooid, het wordt verwijderd uit de autoclaaf en laat kort staan. Dan is het nog steeds heet (45-50 ° C) tussen 15 tot 20 ml agar op elke petri-steriele plaat. Het medium moet blauwe lakmoes zijn.

Kan u van dienst zijn: ililase: kenmerken, classificatie, structuur, functies

Na geserveerd worden de platen enigszins onbedekt totdat de agar een beetje afkoelt. Dan zijn ze bedekt en mogen ze volledig stollen. Vervolgens worden ze besteld in een omgekeerde bloedplaatjes en worden ze tot gebruik bewaard in koelkast (8 ° C).

Deze procedure wordt bij voorkeur uitgevoerd in een laminaire stroombel of voor Bunsen's Lighter om verontreiniging te voorkomen.

Het is belangrijk om in gedachten te houden dat elk commercieel huis de hoeveelheid zal aangeven die moet worden gewogen om het kweekmedium voor te bereiden.

De uiteindelijke pH van het medium moet 7 zijn.2 ± 0.2

Toepassingen

• Dit medium wordt gebruikt om urine en uitwerpselen of andere vorm van klinische monsters te zaaien, vooral als de aanwezigheid van niet -onthoudende gram -negatieve bacillen wordt vermoed, zoals de bacillen die behoort tot de familie Enterobacteriaceae, die in dit medium zeer goed groeit.
• De enteropathogene bacteriën van de genres Shigella En Salmonella Ze worden onderscheiden door hun kleurloze of enigszins barnsteenkolonies.
• Andere niet -fermenterende bacillen groeien, zoals Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, onder andere.
• Dit medium is ook zeer nuttig in de microbiologische analyse van voedsel en water, omdat het ideaal is voor de volledige bevestigingsfase van de bepaling van coliformen, dat wil zeggen de aanwezigheid van bevestigen EN. coli Van duistere EC -bouillons, van de meest waarschijnlijke nummertechniek (NMP).

QA

Om te controleren of het nieuw voorbereide kweekmedium goed werkt, kunnen controles worden gezaaid om de kenmerken van de koloniën te observeren en te verifiëren dat ze geven zoals verwacht.

Om dit te doen, kunt u ATCC -stammen of goed geïdentificeerde stammen van gebruiken EN. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella SP, Salmonella Typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa en sommige gram -positieve bacteriën, zoals S. aureus.

Het wordt verwacht dat EN. coli goed ontwikkelde blauwachtige zwarte kolonies met groene metalen glans. Terwijl Enterobacter aerogenes En Klebsiella SP Ze moeten goed ontwikkelde slijmvliesblaasjes blauwachtig zwart geven.

Het kan u van dienst zijn: Winograsky -kolom

Voor zijn deel, Salmonella Typhimurium En Shigella flexneri Ze moeten grote, kleurloze koloniën ontwikkelen of met een lichte barnsteenkleur.

Eindelijk het genre Pseudomonas aeruginosa Het groeit als kleurloze kolonies van onregelmatige grootte, terwijl gram -positieve bacteriën volledig moeten worden geremd of opgroeien met zeer kleine kolonies.

Laatste overwegingen

Soms zorgt sterilisatie ervoor dat methyleenblauw vermindert, waardoor een oranje medium wordt waargenomen. Om methyleenblauw te oxide en de paarse kleur te herstellen, moet deze zachtjes worden gemengd totdat de kleur herstelt.

Ook kan de kleurstof na gesteriliseerde neerslaan, dus deze moet goed worden gemengd voordat de petri -platen worden geserveerd.

Referenties

1. Eosina en methyleenblauwe agar. Hersteld van Calab.com.
2. Levine E.M.B. (Met Eosina en methyleenblauw). Hersteld van Britanialab.com.