Simmons citraat agar

Pseudomonas fluorescens in Simmons Citraat agar. Bron: een twijfel, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Wat is Simmons Citraat Apar?

Hij Simmons citraat agar Het is een vast medium dat wordt gebruikt als een biochemische test van identificatie van micro -organismen, vooral gram -negatieve bacillen. Het originele medium is gemaakt door Koser in 1923.

Koser's citraatmedium bestond uit een bouillon met natriumfosfaat, ammoniumfosfaat, monopotoon fosfaat, magnesiumsulfaat en natriumcitraat.

Zoals te zien is, is de enige koolstofbron in het medium citraat, en stikstof is ammoniumfosfaat, die eiwitten en koolhydraten weglaten als een bron van deze elementen, die vaak in andere media aanwezig is.

Daarom kunnen de geïnoculeerde bacteriën in dat medium zich alleen reproduceren als het de koolstof van het citraat kan nemen. De test was positief als er in het midden troebelheid was. Ik had echter het ongemak dat niet -specifieke troebelheid zou kunnen optreden.

Dit probleem werd opgelost door Simmons door Bromotimol Agar toe te voegen aan de oorspronkelijke formule van Koser. Hoewel het principe hetzelfde is, wordt het anders geïnterpreteerd.

Basis

Sommige bacteriën hebben het vermogen om te overleven in afwezigheid van gisting of productie van melkzuur, die energie moeten bereiken door het gebruik van andere substraten. In deze test is de enige aangeboden koolstofbron citraat.

Bacteriën die kunnen overleven onder deze omstandigheden metaboliseren citraat snel door een alternatieve route naar de traditionele, met behulp van de tricarbonzuurcyclus of de citraatfermentatiecyclus.

Het katabolisme van citraat door bacteriën omvat een enzymatisch mechanisme zonder de interventie van co -enzym tot. Dit enzym is bekend onder de naam citrica (citraat oxalacetaat-liasa) of demolase citraat. De reactie vereist de aanwezigheid van een bivalent kation, dat in dat geval wordt geleverd door magnesium.

Kan u van dienst zijn: soorten ademhaling en hun kenmerken

De reactie genereert oxaloacetaat en pyruvaat, die vervolgens aanleiding geven tot organische zuren in het midden van een alkalische pH gevormd door het gebruik van de stikstofbron. Deze organische zuren worden gebruikt als koolstofbron die carbonaten en bicarbonaten genereert, die het medium verder alkaliseerden.

Gezaaide modus

Het Simmons citraatmedium moet enigszins worden geïnoculeerd in visstaart met rechte of naald, en 24 uur geïncubeerd tot 35-37 ° C. Culmineerde de tijd dat de resultaten worden waargenomen.

De gezaaide wordt alleen gedaan op het oppervlak van de agar, zonder lekke band.

Interpretatie

Als het medium de oorspronkelijke kleur is (groen) en er is geen zichtbare groei, is de test negatief, maar als het medium blauw verandert, geeft de aanwezigheid van alkalische producten aan, die wordt gedetecteerd door de pH -indicator. In dit geval is de test positief.

Dit gebeurt omdat als de bacteriën de koolstof van het citraat gebruiken, het ook in staat is om de stikstof uit het ammoniumfosfaat te halen waarmee het ammoniak vrijgeeft, alkalisatie van het medium.

Aan de andere kant, als de groei van de bacteriën in het midden wordt waargenomen, maar er is geen kleurverandering, moet de test ook als positief worden beschouwd, want als er groei is, betekent dit dat de bacteriën citraat kunnen gebruiken als een koolstofbron, hoewel er op dat moment geen pH -verandering is (soms kan het duren).

Als er twijfel bestaat in de interpretatie van de uiteindelijke kleur, kan dit worden vergeleken met een niet -opgebouwd citraatbuis.

Voorbereiding

Weeg 24,2 gr van het uitgedroogde medium voor een liter water. Meng en vertrek om ongeveer 5 minuten. Voltooi het oplossen van de medium verwarming gedurende 1 of twee minuten, zwaait vaak.

Kan u van dienst zijn: wat is het macromoleculaire niveau?

Serveer 4 ml 4 ml in test- en autoclavarbuizen bij 121 ° C gedurende 15 minuten. Bij het verlaten van de autoclaaf, kantelen met behulp van een ondersteuning, zodat de agar wordt gestold in de vorm van een fluitpiek met weinig taco of achtergrond en meer ring.

De uiteindelijke pH van het medium citraat is 6,9 (groene kleur). Dit medium is erg gevoelig voor pH -verandering.

Een pH 6 of lager, het medium wordt gele kleur. Deze kleur wordt niet waargenomen in de bacterietest.

En bij pH 7,6 of hoger, verandert het medium in blauw van intense Pruisen.

Gebruik

Simmons Citraat Agar wordt gebruikt om bepaalde micro -organismen te identificeren, met name bacillen die behoren tot de familie Enterobacteriaceae en andere niet -fermenterende glucose -bacillen.

Laatste overwegingen

Het Simmons citraatmedium is een zeer delicate test, omdat er valse positieven kunnen worden verkregen als sommige fouten worden gemaakt.

De zorg die moet worden besteed, zijn de volgende:

Inoculo

Een zeer dik of geladen bacterieel inoculum mag niet worden gedaan, omdat het een koperachtige gele kleur kan veroorzaken in de plaats van de gezaaide, zonder de rest van het medium te beïnvloeden, maar kan geloven dat er groei is. Het betekent niet dat het bewijs is van positiviteit. 

Evenzo kan een dik inoculum een ​​vals positief genereren, omdat voorgevormde organische verbindingen binnen de celwanden van morboundaire bacteriën voldoende koolstof en stikstof kunnen afgeven om de pH -indicator te draaien.

Daarom is het ideaal om de naald te zaaien in plaats van het platinakend, om te voorkomen dat overtollig materiaal wordt gebruikt.

Kan je van dienst zijn: voedselketen van de jungle

Gezaaid

Aan de andere kant, wanneer de batterij van biochemische tests voor de identificatie van het betreffende micro -organisme zaaien, is het belangrijk dat de citraattest de eerste is om de weerstand van eiwitten of koolhydraten uit een ander medium te vermijden.

Onder deze omstandigheid is het mogelijk om een ​​vals -positief te verkrijgen, omdat elk van deze stoffen die door fout worden geïntroduceerd, zal worden gemetaboliseerd en een wijziging van de pH zal veroorzaken.

Een andere manier om het slepen van middelen te voorkomen, is door het handvat te verbranden en een nieuw inoculum te nemen tussen de ene test en de andere.

Er moet ook voorzichtig zijn bij het aanraken van de kolonie om het inoculum uit te voeren, omdat het moet worden vermeden om een ​​deel van de gewasagar te slepen waaruit bacteriën komen, vanwege het bovenstaande uitgelegd.

In die zin raden Matsen, Sherris en Branson aan het inoculum in fysiologische oplossing te verdunnen voordat de citraattest wordt inoculeren om de overdracht van andere koolstofbronnen te voorkomen.

Kleurintensiteit

Er moet rekening mee worden gehouden dat de intensiteit van de geproduceerde kleur wanneer de test positief is, kan variëren volgens het commerciële huis.

Bovendien zijn er micro -organismen die na 24 uur positief zijn, maar er zijn andere stammen die 48 uur of meer vereisen om een ​​pH -verandering te produceren.

Referenties

1. Bbl Simmons citraat agar slants. BD hersteld.com.
2. Simmons citraat agar. Hersteld van Britanialab.com.