Wright -vlekken

Verschillende perifeer bloed smess geverfd met Wright -kleuring. NAAR. Acute leukemie B. Plasmodium vivax binnen de erytrocyt. C. Plasmodium falciparum, macrogametocito. D. Lymfocyten

Wat is de vlekken van Wright?

De Wright -vlekken Het is een kleuringstechniek gecreëerd door de Amerikaanse patholoog James Homer Wright in 1902, gebaseerd op de kleuring van Romanowsky, om verschillende soorten bloedcellen beter te onderscheiden. 

Deze kleuring is polychromatisch, wat betekent dat het verschillende kleuren genereert, afhankelijk van de structuur die de kleurstof absorbeert. Deze kleurtechniek is veel gebruikt om differentiële witte bloedcellen uit te voeren en de morfologie van rode bloedcellen, bloedplaatjes en leukocyten in perifeer bloed en beenmerg te bestuderen.

De toepassing ervan is erg belangrijk, omdat afwijkingen kunnen worden gezien in de verschillende cellijnen van het bloed, waardoor de diagnose van ziekten zoals leukemie of bacteriële of parasitaire infecties wordt vergemakkelijkt.

Misschien zijn dit de meest voorkomende toepassingen waarin deze techniek wordt gebruikt, maar ze zijn niet de enige. Het is ook nuttig in andere monsters dan bloed en beenmerg, zoals monsters van nasale secretie, fecaal slijm, sputum, huid, onder andere.

Stichting van Wright's vlekken

Wright's kleuring werd geboren uit de Romanowsky -vlek.

Het mengsel van kleurstoffen die in Wright -kleuring worden gebruikt, veroorzaakt het effect dat bekend staat als Romanowsky, dat wil zeggen het een prachtige paarse kleuring voor de leukocyten kernen en neutrofiele korrels, terwijl rode bloedcellen roze zijn.

De componenten die verantwoordelijk zijn voor het geven van typische kleuren van Wright's kleuring zijn blauw B en Eosina en. Het waargenomen effect zal afhangen van de link van de kleurstoffen met de chemische structuren en de interacties van blauwe B en de eosine en.

Zure structuren, zoals nucleïnezuren, nucleaire eiwitten en onrijpe reactief cytoplasma van sommige soorten cellen, set blauwe B (basiskleuring).

Terwijl basisstructuren, zoals hemoglobine, de korrels van de gesegmenteerde eosinofielen, naast andere celstructuren, de eosine en (zure kleuring) instellen.

Het kleurresultaat kan worden beïnvloed door verschillende factoren, zoals de pH van de Wright -kleurstof, de demping- en wassoplossing, evenals de kleur- en fixingstijd.

Daarom is elke stap in de bereiding van de reagentia cruciaal en moet worden gedaan om voor elk detail te zorgen.

Materialen

Wright Dye. Voor 100 ml is het vereist:

Weeg 0.3 gr van Wright -kleurstof, maat 97 ml methanol en 3 ml glycerol.

Voorbereiding

Op een mortelplaats neemt de zware hoeveelheid Wright's kleurstof en neemt geleidelijk glycerol op totdat het stof volledig is opgelost.

Vervolgens wordt methanol toegevoegd, gemengd en in een barnsteenfles gegoten.

Voordat u gebruikt, moet de oplossing met zachte bewegingen en filter worden geroerd.

Kan u van dienst zijn: Directionele selectie: wat is, definitie, voorbeelden

Gebufferde bufferoplossing

In een liter van gedestilleerd water wordt 3,76 g dinatriumhydrofosfaat toegevoegd (NA₂HPO₄   2h₂0) plus 2,1 gr van dihydrogene kaliumfosfaat (kh₂Po₄)).

Meng heel goed totdat je alle opgenomen reagentia oplost. Pas de pH aan op 7,2.  Giet in een glazen pot en houd op kamertemperatuur.

Extra materialen die nodig zijn om kleur uit te voeren

Bovendien zijn andere materialen nodig om de kleurtechniek uit te voeren, dit zijn: Porta -objecten of dekt objecten, kleurbrug, banden met water of buffer om te wassen, een stopwatch om kleurentijden te nemen en wat droogmateriaal (absorberend papier, gaas of katoen of katoen of katoen, )).

Wright -vlekkende componenten

Methanol

Alcohol (methanol) dient als een fixer van het bloeduitstrijkje in de dia.

In principe is het een reducerend reactief, dehydrator en coagulant fixeermiddel. Daarom is hun functie om eiwitten te coaguleren en ze onoplosbaar te maken, maar zonder gedenatureerd te worden.

Methanol is het meest gebruikte reagens om uitstrijkjes in alle laboratoria te repareren, omdat het betere resultaten oplevert dan die verkregen met ethanol. De ideale concentratie is 99%.

De schokdemper

De schokdemper (gebufferde oplossing) heeft de functie van het aanpassen of onderhouden.

De doorgang van bevestiging met methanoluitdratencellen en schokdemper helpt ze te rehydrateren.

Eosina (Y)

Eosina heeft affiniteit voor basiscomponenten omdat het een zure kleurstof is. Twee soorten eosine zijn zeer bekend als elkaar, zo veel dat beide kunnen worden gebruikt, waardoor hetzelfde resultaat wordt verkregen.

De ene wordt eosine genoemd en, gele eosine of tetrabromofluoresceïne, en de andere, eosine B, blauwachtige eritrosine of dibromodyitrofluoresceine. Eosine en is echter degene die het meest wordt gebruikt.

De belangrijkste eigenschap van deze kleurstof is de negatieve polariteit, dit maakt het aangetrokken door cellulaire structuren met positieve belasting.

Methyleenblauw

Is de basiskleurstof. De belangrijkste eigenschap is metacromie, dat wil zeggen dat niet alle structuren aan dezelfde kleur zullen worden geverfd, het zal afhangen van de chemische samenstelling van de structuren die kleur hebben.

Sommigen worden licht of donkerblauw, en anderen van donkerpaarse of bleke lila.

Techniek

1. Maak het uitgebreide monster zodat er een dunne film is, of het nu op een dia is of covers.
2. Laat de lucht ongeveer 2 uur drogen.
3. Plaats de droge geur op de kleurbrug of vlekkend emmer met het uitgebreide monster omhoog.
4. Bedek het vel met de Wright -daling van Gota om het hele oppervlak te bedekken. Verlaat Act 5-8 minuten.
5. De kleurstof moet de dia volledig bedekken, zonder door de randen te morsen. Als het tijdens de kleurstijd begint te verdampen, moeten extra druppels worden geplaatst.
6. Voeg vervolgens een gelijke hoeveelheid van de schokdemper toe, blaas een beetje tot de karakteristieke metalen helderheid verschijnt. Tam 10 tot 15 minuten.
7. Was met kraanwater, plaatst de zachte straal totdat het vel er roze uitziet.
8. Met een gaas geïmpregneerd met alcohol elimineerde de kleurkeuring achter in de dia.
9. Laat het uitstrijkje drogen voordat u de onderdompelingolie plaatst om deze in de microscoop te visualiseren.

Kan u van dienst zijn: taxonomische niveaus

Gebruik/toepassingen van Wright -kleuring

Hematologie

Het is ideaal voor het kleuring van perifeer bloedwort.

Vanwege de chemische eigenschappen van deze combinatie van kleurstoffen kunnen celstructuren gemakkelijk worden herkend, waardoor de verschillende soorten aanwezige cellen kunnen onderscheiden.

Loopneus

Deze techniek is zeer nuttig voor het identificeren van nasale secretiecellen (epitheelcellen, gesegmenteerde eosinofielen, polymorfonucleair) bij de diagnose van allergische rhinitis.

parasitologie

In die zin is het nuttig geweest voor de studie van Leishmania sp Binnen de histiocyten van het subcutane celweefsel bij huidzweren. Het wordt ook gebruikt om leukocyten te identificeren in het ontlastingsmonster (fecaal leukogram).

In dit geval is het interessant voor de arts om te weten of de leukocytose aanwezig in de ontlasting door polymorfonucleair of mononucleair is. Deze bevinding in het fecale leukogram leidt respectievelijk of het een bacteriële of virale infectie is.

Aan de andere kant kunnen de parasieten die in het bloed circuleren zich in de erytrocyt bevinden of vrij in het plasma. De gezochte parasieten zijn Plasmodium spp, trypanosoma cruzii en Filarias, en in veterinair is nuttig bij het zoeken naar Theilery equ En Babesia caballi, Causale agenten van de baby, vooral bij paarden.

De kleuring van Wright, en ook die van Giemsa, laat hemoparasieten onderscheiden van normale cellulaire componenten. Hiervoor kunnen twee soorten uitgebreide worden gebruikt:

Fijne verlengd

Bloed wordt uitgebreid als een dunne film op een dia. Wright -kleuring, onthullend de kenmerken van de kern en cytoplasma.

Dikke druppel

Deze methodologie wordt gebruikt om de aanwezigheid van parasieten in een grotere hoeveelheid bloed te onderzoeken.

Hiervoor wordt een grote druppel bloed op een dia geplaatst. Eenmaal daar moet je defibrineren, waardoor grotere en grotere cirkels uit het midden zijn, met behulp van de rand van een andere dia.

Ten slotte moeten erytrocyten om de parasieten in de dikke geur te observeren, worden vermeld met water.

Luchtweginfecties

Op ademhalingsniveau is deze techniek ook nuttig, omdat de cellen die aanwezig zijn in sputummonsters, bronchiale of bronchalveolaire wassen belangrijk zijn om de diagnose te stellen.

Hier kunt u polymorfonucleaire cellen en mononucleaire cellen onderscheiden.

Bacteriologie

Het gebruik van deze techniek in bacteriologie is beperkt, omdat het niet goed is om bacteriën te verven. Daarom worden voor hun kleuring andere gespecialiseerde kleuringstechnieken gebruikt.

Het is echter gebruikt om epitheelcellen te zoeken met inclusielichamen Chlamydia trachomatis In uitstrijkje urethraal of endocervicaal slijmvlies, hoewel het moet worden herkend dat dit niet de beste methode is.

Het kan u van dienst zijn: hemocianines

Het is ook mogelijk om, tussen rode bloedcellen, spiraalbacteriën te observeren, zoals Borrelia burgdorferi Bij geïnfecteerde patiënten, evenals morelen of lichamen van opname van Ehrlichia SP In het cytoplasma van lymfocyten, monocyten of neutrofielen in een bloeduitstrijkje.

Mycologie

Hij Histoplasma capsulatum Het is een vaak gediagnosticeerde pathogene schimmel door de microscopische observatie van verschillende weefselmonsters, verven met Wright -kleuring.

Hoe worden de bloedmonsterstructuren waargenomen met Wright's kleuring?

Aanbevelingen voor het tincion van sanguineous srols voor hemogramlezen. Bron: Retamales E, Mazo V. Public Health Institute, regering van Chili

Aanbevelingen voor goede vlekken

- De uitbreidingen van bloedmonsters moeten spontaan drogen. De uitstrijkjes moeten zo dun mogelijk zijn om een ​​betere fixatie van de kleurstof te verkrijgen en overlapping te voorkomen.

- Voor het verven van hoge kwaliteit is het raadzaam. Aan de andere kant is het ideale monster capillair bloed, zonder anticoagulans.

- Als veneus bloed echter wordt gebruikt, moet het worden gebruikt als een EDTA en niet -heparine -anticoagulans, omdat de laatste cellulaire structuren kan vervormen.

- Om de verslechtering van de voorbereide kleurstof te voorkomen, moet deze op droge plaatsen worden opgeslagen.

- Tijdens het wasproces wordt het gebruik van water aangepast aan de neutrale pH aanbevolen.

- Het is raadzaam om de vervenmethoden van tijd tot tijd in het laboratorium te testen.

Dit gebeurt kleurmonsters of uitgebreide patronen, als kwaliteitscontrole. Deze stap is belangrijk, omdat er ervoor wordt gezorgd dat de kleuring goed is voorbereid en de kleurtijden goed gestandaardiseerd zijn.

Als het patroonblad slecht is gekleurd, zijn er problemen die moeten worden opgelost.

Veel voorkomende fouten in de kleuring van Wright

Zeer bleke kleuring

De zeer bleke uitstrijkjes zijn meestal te wijten aan een zeer korte tijd van vlekken of een zeer overdreven wassen. Het wordt gecorrigeerd door de contacttijd te verlengen met de kleurstof of de afnemende wastijd te verminderen.

Bellen van de kleurstof

De aanwezigheid van kleurplaten in de geur kan verschillende oorzaken hebben. De meest voorkomende zijn: gebruik van de niet -gefilterde kleurstof, kleurstof op ongelijke kleurbruggen, draag vuile lakens met stof of vet, maak geen goed wassen wanneer de kleuring is voltooid.

Wrijven met extreem roodachtige of blauwe kleuring

De schokdemper is verantwoordelijk voor de pH van de kleurstof. Kleuren met pH onder de aangegeven (zuur) zullen resulteren in het verkrijgen van zeer roodachtige geuren.

Als de pH van de kleurstof boven (alkalisch) is, krijgt u een extreem blauwachtig uitstrijkje.

Opslagmodus

Het reagens moet bij kamertemperatuur worden bewaard.

Referenties

1. López-jácome, l., Hernández-Durán, m., Colín-Castro, C., Ortega-peña, s., Cerón-González, G., Franco-Cendejas, f. (2014). Basiskleuring in het microbiologielaboratorium. Onderzoek naar gehandicapten.
2. Calderón, a., Cardona, J., Vergara, of. (2013). Babesia SPP -frequentie. In paarden van Montería, Córdoba (Colombia). Revisie. Udcaactual Disulg. wetenschapper. 
3. Retamales, E., Mazo, V. Public Health Institute of Chile. Aanbevelingen voor het tincion van sanguineous srols voor hemogramlezen.