Kinyoun -kleuring

Cryptosporidium parvum geverfd met kinyoun -kleuring. Bron: Punlop Anusonpornpl, Wiikimedia Commons

Wat is de vlekken van Kinyoun?

De Kinyoun -kleuring Het is een kleuringstechniek die wordt gebruikt om bacteriën en alcoholbestendige parasieten te verven. Hij werd geboren uit de aanpassing van de kleuring van Ziehl-Neelsen. Beide technieken worden op dezelfde manier geïnterpreteerd, maar ze verschillen in twee elementen: bij de voorbereiding van het hoofdreagens en waarin de Kinyoun -techniek geen warmte gebruikt.

Om deze reden staat het ook bekend als Ziehl-Neelsen in koud gemodificeerd, of Kinyoun's koude kleuring. Wordt aangegeven voor de kleur van Mycobacterium tuberculose, Leprae mycobacterium, Atypische mycobacteriën, Nocardias sp, Cryptosporidium Parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium Felis, Cryptosporidium Muris En Cyclosporras cayetanensis.

Het is vermeldenswaard Nocardie Ze worden zwak geverfd met deze techniek, omdat ze gedeeltelijk zure alcohol zijn, dus voor dit genre is er een modificatie van de methodologie.

Op zijn beurt is de techniek van Kinyoun gecombineerd met de trichromische techniek die door Didier is aangepast voor de detectie van coccidios (Cryptosporidium parvum En Isospora belli) en microsporidaire sporen (Enterocytozoon Bieneusi En Enchelitozoon intestinalis)).

Basis

Het belangrijkste reagens van kleuring is carbolfucsin of fenicada fuchsin, die de eigenschap heeft om de bestaande carbole zuren in de riddercelwand aan te sluiten, rijk aan lipiden (mycolzuren) van mycobacteriën en bepaalde parasieten.

Deze vereniging wordt niet tegengegaan door de zure decolorant, daarom worden micro -organismen gedefinieerd als resistent alcoholzuur.

In tegenstelling tot de Ziehl-Neelsen-techniek die de kleurstof bevestigt door hitte, is deze stap in de Kinyoun-techniek niet nodig, omdat de voorbereide Fenicada-fuchsine-oplossing een hoge concentratie fenol bevat.

Het kan je van dienst zijn: Salmonella-Shigella Agar

Het fenol lost het lipidenmateriaal van de celwand op, waardoor de carbolfucsin -kleurstof mogelijk wordt. Nadat de kleurstof doordringt, wordt deze opgelost ondanks het wassen met alcoholzuur.

Op deze manier nemen resistente alcoholzuur micro -organismen de karakteristieke rode kleur, terwijl alles wat geen zure alcohol is, wordt verkleurd en blauw geverfd.

Techniek

Materialen

• Gemodificeerde fenicated fuchsin.
• Alcoholzuur.
• Methyleenblauw.

Kinyoun Fenicated Fuchsina -voorbereiding

• Basic Fuchsina: 4 Gr.
• Fenol: 8 ml.
• Alcohol (95%): 20 ml.
• Gedestilleerd water: 100 ml.

De basisfuchsine in alcohol moet langzaam worden opgelost, waardoor constant wordt mengt. Vervolgens smelt het gekristalliseerde fenol in een badkamer bij 56 ° C. Eenmaal opgelost, worden 8 ml toegevoegd aan de eerder voorbereide fuchsin -oplossing.

Alcoholzuurvoorbereiding

• Geconcentreerd zoutzuur: 3 ml.
• Ethanol (95%): 97 ml.

U moet meten, meedoen en mixen.

Methyleenblauw contrastkleurbereiding

• Methyleenblauw: 0.3 g.
• Gedestilleerd water: 100 ml.

Het weegt en lost op.

Kinyoun's kleurtechniek

• Bereid een uitstrijkje rechtstreeks uit het monster, dat sputum, longvloeistof, urinesediment, cerebrospinale vloeistof of ontlasting kan zijn, onder andere, of uit een suspensie van micro -organismen verkregen uit pure kolonies ontwikkeld in mediamedia.
• Bepaal het uitstrijkje met warmte.
• Plaats het uitstrijkje op de kleurbrug en dek af met het Fenicada Fuchsin -reagens van Kinyoun bereid. Laat 3 of 5 minuten staan.
• Was met gedestilleerd water.
• Decoreer 3 minuten met zure alcohol en was opnieuw met gedestilleerd water.
• Versier opnieuw met zure alcohol gedurende 1 of 2 minuten totdat het meer kleuren is.
• Was met gedestilleerd water en laat weglopend, plaats de dia in verticale positie.
• Bedek de voorbereiding met methyleenblauw en laat 4 minuten vertrekken.
• Was met gedestilleerd water en laat de lucht drogen.
• Onderzoek 40x en vervolgens 100x.

Kan u van dienst zijn: Clear Field Microscoop: Kenmerken, onderdelen, functies

Als u de kleuring van resistente alcoholzuurmicro -organismen wilt verbeteren en versnellen, wordt 1 druppel van een hydraterend middel toegevoegd (zoals kikker nr. 7) tot 30 of 40 ml fenicate fuchsine van Kinyoun van Kinyoun.

Sommige laboratoria veranderen de blauwe methyleencontrastverf als gevolg van felgroen of picrinezuur. De eerste geeft een groene kleur aan de achtergrond en de tweede genereert een gele kleur.

Speciale Kinyoun -techniek voor Nocardie

Om de kleuring van genderbacteriën te verbeteren Nocardie Een aanpassing van de kleuring van Kinyoun wordt gebruikt. De techniek is als volgt:

• Bedek het uitstrijkje met Fenicada Fuchsina van Kinyoun voor 3 minuten.
• Was met gedestilleerd water.
• Kort verkleurd met 3% voorbereide alcohol totdat het meer kleuren is.
• Was opnieuw met gedestilleerd water.
• Bedek de preparaat met methyleenblauw en verlaat handel gedurende 30 seconden.
• Was met gedestilleerd water en laat de lucht drogen.

Gecombineerde techniek van fenicated en trichromic fuchsina gemodificeerd door Didier

Deze techniek wordt aanbevolen voor de analyse van ontlastingsmonsters op zoek naar coccidios en sporen van Microsporidium sp tegelijkertijd. De te volgen procedure is als volgt:

• Bedek het uitstrijkje met Fenicada Fuchsina van Kinyoun voor 10 minuten.
• Verwijder de kleurstof en wassen met gedestilleerd water.
• Versier 30 seconden met zoutzuuralcohol.
• Was opnieuw met gedestilleerd water.
• Bedek het uitstrijkje met trichromische oplossing gedurende 30 minuten bij 37 ° C.
• Was met gedestilleerd water.
• Decoreer 10 seconden met alcohol van azijnzuur.
• Was de geur gedurende 30 seconden met behulp van 95% ethanol.

QA

Als positieve controle worden uitstrijkjes bereid met stammen van Mycobacterium tuberculose en ze zijn geverfd met de reagentia bereid om te controleren of de bacteriën de juiste kleur nemen (rood-fucsia).

Het kan je van dienst zijn: gametoogenese

Negatieve controles kunnen ook worden gebruikt door uitstrijkje te bereiden met elke stam die geen resistent alcoholzuur is, waardoor het hele monster de contrastkleur heeft.

Kinyoun-techniek vergeleken met de Ziehl-Neelsen-techniek

De techniek van Kinyoun is eenvoudiger omdat hij de doorgang van verwarming elimineert, maar het belangrijkste voordeel is dat het de emissie van dampen vermijdt, zeer giftig en langdurige kanker veroorzaakt. Daarom is de kleuring van Kinyoun veiliger voor het personeel dat verantwoordelijk is voor het uitvoeren van kleuring.

Het is belangrijk om rekening te houden met dat u voorzichtig moet zijn dat de reagentia niet direct in contact komen met de huid, omdat ze corrosief zijn en de verkleuring ontvlambaar is.

Wat nadelen betreft, geeft een negatief uitstrijkje niet noodzakelijkerwijs aan dat het micro -organisme niet aanwezig is. Bovendien kan de aanwezigheid van cellulair detritus valse positieven veroorzaken, wat verwarring in de diagnose genereert.

Referentie

1. Toegepaste klinische chemie. BK Kinyoun Kit. Cromakit herstelde.is.
2. Orozco-Rrr, m. Kinyoun -kleuring en twee coccidios in hiv. MD Medical Magazine. 
3. Forbes, B., Sahm, D., Weissfeld, een. Bailey & Scott microbiologische diagnose. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR.