Cultuurmedia, functie, typen, voorbereiding

De cultuur media Het zijn speciale voedingsbereidingen voor het herstel, isolatie en onderhoud van bacteriële en schimmelmicro -organismen. Deze media kunnen solide, vloeibaar of semi -solid zijn.

Louis Pasteur was de eerste die aantoonde dat in een bouillon gemaakt met stukjes gekookt vlees, het zo diende dat de bacteriën in grote hoeveelheid worden gereproduceerd, tot het punt van het vertroebelen van de bouillon. In deze zin wordt Pasteur Meat Bouillon beschouwd als het eerste gebruikte vloeibare kweekmedium.

Onvoorbereide cultuurmedia (vaste stoffen en vloeistoffen). Bron: Flickr

Toen heeft Robert Koch, dankzij de hulp van zijn medewerkers Julius Richard Petri en Walter Hesse, grote vorderingen gemaakt. De eerste ontwierp de Petri -plaat, die nog steeds wordt gebruikt; En de tweede kwam bij hem op om de gelatine te vervangen voor agar-water om de solide cultuurmedia voor te bereiden, wat zeer relevant was, omdat de gelei werd aangetast door sommige micro-organismen.

Momenteel zijn er veel soorten cultuurmedia voor verschillende doeleinden, daarom zijn deze geclassificeerd volgens hun functie: een van de belangrijkste, de middelen voor voedings teelt, selectief, differentieel, transport, verrijking, tellen van tellen, kolonies, onderhoud en voor bewijs van gevoeligheid.

Sommige kweekmedia zijn speciaal om chemische reacties te observeren, die zeer nuttig zijn voor de identificatie van het betrokken micro -organisme. Onder hen kunnen ze worden genoemd: onder andere de medium Kigler, Mio, Lia, Citraat.

[TOC]

Geschiedenis

Het eerste kweekmedium werd bereid door Louis Pasteur toen hij het probeerde.

Hij bereidde een bouillon met stukjes vlees en merkte op dat hij na een paar dagen nadat hij aan de lucht was blootgesteld, troebel werd en in de bouillon was er een merkbare hoeveelheid micro -organismen. Tegelijkertijd bleef een andere bouillon met stukjes vlees die eerder gekookt en hermetisch gesloten was, doorzichtig toen de dagen voorbij de dagen gingen.

Dit trok de aandacht van veel onderzoekers en besefte dat deze micro -organismen verantwoordelijk waren voor het ontbinden van vlees en naast het produceren van enkele ziekten.

Om deze reden was het essentieel om een ​​manier te creëren om deze micro -organismen in het laboratorium te reproduceren om ze grondiger te bestuderen.

In die zin heeft Robert Koch een onschatbare bijdrage geleverd aan de verbetering van bepaalde laboratoriumtechnieken, met name die gerelateerd aan bacteriële isolatie, terwijl hij het concept van vaste kweekmedium introduceerde.

Eerst gebruikte hij aardappelplakken als een vast medium, maar voegde vervolgens gelatine toe aan de vleesbouilles met betere resultaten. Er waren echter momenten waarop de gelei smolt en een vloeibare gewas werd. Tegenwoordig is het bekend dat dit gebeurt omdat sommige bacteriën in staat zijn om de gelatine te hydrolyseren.

Het was toen dat het idee om agar-adding te gebruiken, een verbinding die zijn vrouw gebruikte om zijn snoep te verdikken, plaatsvond bij een van zijn medewerkers.

Dit medium van rudimentaire cultuur is geleidelijk geavanceerd, tot het bereiken van de cultuurmedia die tegenwoordig bekend zijn.

Samenstelling

Elk medium heeft een andere samenstelling, maar het is essentieel dat het de specifieke voedingsstoffen bevat voor een goede ontwikkeling van het type micro -organisme dat wordt gevraagd.

Het kan ook specifieke chemicaliën bevatten die helpen de metabole route te onthullen die een bepaalde spanning heeft, of die de aanwezigheid van bepaalde enzymen hebben aangetoond.

Een ander belangrijk element is het gebruik van schokdemperstoffen. Deze helpen het osmotische evenwicht van de media te behouden, evenals de pH.

Ze kunnen ook koolhydraten en een pH -indicator bevatten om de gisting van toegevoegde suiker te tonen. Een kleurverandering van het medium zal worden waargenomen als er verzuring wordt gegenereerd door fermentatie.

Sommige kweekmedia bevatten remmer stoffen. Afhankelijk van de gebruikte stof, zal de groei van micro -organismen worden beperkt en die van anderen zullen worden begunstigd.

Soorten cultuurmedia

Teeltmedia worden geclassificeerd volgens verschillende criteria. Dit zijn: volgens hun consistentie, hun samenstelling en hun functie.

- Volgens uw consistentie

Vloeistoffen

Ze bevatten geen agar -ago. Bacteriële of schimmelgroei wordt bewezen door de troebelheid van de bouillon, die oorspronkelijk doorzichtig is.

Vaste stoffen

Ze bevatten tussen 1,5 tot 2% agar -agar. Het gestolde mengsel heeft een oppervlak dat de fijne verplaatsing van de platinakhandel weerstaat, zonder dat het wordt gebroken.

Semi -solid

Ze bevatten ongeveer 0,5% van de agar -agar, daarom is het een tussenliggende toestand tussen de vloeistof en de vaste stof. Ideaal in media die dienen om motiliteit te zien. Ze worden ook aanbevolen voor het behoud van spanningen, omdat ze lang vocht houden.

Kan u van dienst zijn: Saltacionisme: kenmerken, bewijs en voorbeelden

Tweedeligheid

Het zijn middelen die zodanig worden voorbereid dat er een vaste fase is en hierover een vloeibare medium. Veel gebruikt voor bloedculturen.

- Volgens zijn compositie

Natuurlijke cultuurmedia

Het zijn stoffen die rechtstreeks uit de natuur worden genomen om bacteriën te cultiveren, waardoor ze een omgeving het dichtst in de buurt krijgen van hoe ze zich normaal in het ecosysteem ontwikkelen. Bijvoorbeeld melk, sappen, verdund bloed, serum, etc.

Synthetische cultuurmedia

Ze zijn vandaag het meest gebruikt, ze zijn de uitgedroogde middelen die we verwerven in commerciële huizen en waaraan hun chemische samenstelling bekend is, omdat ze strategisch zijn ontworpen volgens het type micro -organisme dat wordt gezocht om te isoleren.

Semi -stynthetische cultuurmedia

Het is de combinatie van een synthetisch medium waaraan een natuurlijk element wordt toegevoegd om het medium te verrijken.

Cellulaire kweekmedia

Het zijn speciale middelen voor virusteelt, zoals deze micro -organismen niet in staat zijn om buiten cellen te overleven, ze moeten weefsel of levende cellen bevatten, van een dier of een plant.

Voorbeeld: cellulaire apen niergewassen of embryonale eieren.

- Volgens het nut ervan

Nutrive, selectief, differentieel, transport, verrijking, identificatie, kwantificering van kolonies, onderhouds- en gevoeligheidstests. Zal later worden beschreven.

Functie

Ongeacht het type kweekmedium heeft iedereen iets gemeen en is dat ze de reproductie van bepaalde micro -organismen faciliteren of bevorderen. Het verschil ligt in de samenstelling van elk van hen, wat een bepalende factor is voor het uiteindelijke hulpprogramma dat ze zullen hebben.

Elk van de bestaande cultuurmedia is strategisch ontworpen voor de specifieke functie waarvoor deze is gemaakt, dat wil zeggen, allemaal een basis die de richtlijnen voor hun specifieke functie regelt.

Opgemerkt moet worden dat de kweekmedia eenmaal gezaaid moeten worden ondergaan.

Als u bijvoorbeeld mesofiele anaërobe bacteriën, bloedagar en incuberen in anaerobiose -aandoeningen (zonder zuurstof) bij 37 ° C gedurende 48 uur gedurende 48 uur wilt isoleren gedurende 48 uur bij 37 ° C.

Nu, als een schimmel nodig is om te isoleren, wordt Sabouraud Agar met antibiotica gebruikt. Het wordt meerdere dagen geïncubeerd in aerobiose, op kamertemperatuur, omdat de laatste langzaam groeit.

Eenvoudige voedzame cultuurmedia

Zoals de naam al aangeeft, bevatten deze kweekmedia voedingsstoffen, zoals vitamine, aminozuren, stikstof- en koolstofbronnen, waaronder ze kunnen worden genoemd: vleesextract of gistextract, maïszetmeel, pancreas verteerd, peptones, glucose, onder anderen, glucose, onder anderen.

Ze bevatten ook andere componenten die een osmotisch evenwicht bieden voor het milieu, omdat de meeste gewassen een pH van bijna 7,0 vereisen. Deze elementen kunnen onder andere zijn: natriumchloride, dinatriumfosfaat.

Het verdunningsmiddel is gedestilleerd water en vaste media hebben agar-advertentie.

Het doel van deze kweek betekent het herstellen van de bacteriële of schimmelmicrobiota die in een bepaald monster bestaat. Het discrimineert niet tussen micro -organismen, omdat het in staat is om een ​​groot aantal bacteriën te laten groeien, zowel gram positief als gram negatief, evenals gist en myceliale schimmels.

Ze worden aanbevolen om monsters te zaaien die afkomstig zijn van normaal steriele sites. Ze dienen echter niet voor het eisen van micro -organismen.

Ze zijn ook nuttig voor het onderhoud van spanningen, zolang ze geen glucose bevatten.

Cultuurmedia verrijken

Als bloed of verwarmd bloed aan eenvoudige voedingsmedia wordt toegevoegd, worden ze verrijkte media (respectievelijk bloed en chocolade -agar).

Deze middelen zijn zeer nuttig om monsters te zaaien die normaal steriel zijn, om stammen te redden die zwak zijn en om het eisen van micro -organismen vanuit voedingsoogpunt te isoleren.

Selectieve cultuurmedia

Selectieve kweekmedia zijn, naast het bevatten van essentiële voedingsstoffen voor de groei van bepaalde micro -organismen van interessante, ook remmende stoffen toegevoegd, zoals antibiotica, antischimmelmiddelen, kleurstoffen, galzouten, onder andere.

Remmerstoffen zijn bedoeld om de verscheidenheid aan stammen te verminderen die kunnen groeien, wat de voorkeur geeft aan de groei van een bijzonder speciale groep die wil redden.

Voorbeeld: EC -bouillon (speciaal voor totale en fecale coliformen) of Sabouraud Agar met antibiotica (specifiek voor schimmels).

Differentiële cultuurmedia

Differentiële media bevatten voedingselementen die nodig zijn voor de groei van een specifieke groep micro -organismen en bevat ook stoffen die in aanwezigheid van bepaalde micro -organismen zullen worden gemetaboliseerd of afgebroken.

Dat wil zeggen, ze zullen chemische reacties produceren die op de een of andere manier in het kweekmedium zullen worden aangetoond.

Het kan u van dienst zijn: Photic Zone: Kenmerken, Flora Light, Fauna

Sommige reacties alkalisch of verzuren het medium en dankzij de aanwezigheid van een pH -indicator kunnen deze veranderingen worden aangetoond door een gekleurde wending in het midden en de kolonie.

Daarom, onder een grote groep bacteriën die in dat medium kunnen groeien, degenen die de stof en degenen die dit niet doen metaboliseren of afbreken, simpelweg het observeren van de kleur van de kolonie en het medium.

Bloedagar maakt het bijvoorbeeld mogelijk om bacteriën te onderscheiden die bèta -hemolyse (transparante halo) produceren van die die alfa -hemolyse (groenachtige halo) produceren en van die die geen hemolyse produceren.

Selectieve en differentiële media

Een voorbeeld hiervan is wat er gebeurt in de MacConkey Agar. Het is selectief omdat het alleen de groei van gram negatieve bacillen mogelijk maakt; En het is differentieel, omdat het de fermenterende bacteriën van lactose (fuchsia kleurkolonies) van niet -fermentioning (bleke of kleurloze roze kleur) kan onderscheiden.

Transportcultuurmedia

Zoals de naam al aangeeft, worden ze middelen gebruikt om monsters te transporteren die zijn ingenomen op een min of meer verre plaats naar het laboratorium dat het monster zal verwerken. De transportmiddelen behouden het monster in de beste omstandigheden voor betrouwbare resultaten.

Deze kweekmedia hebben zeer speciale kenmerken, omdat ze de voedingsstoffen niet kunnen overschrijden, omdat de aanwezige bacteriepopulatie levensvatbaar is, maar zonder in aantal te toenemen.

Het zijn meestal semi -solide media, waardoor het monster kan worden gehydrateerd. Het moet echter niet worden verspreid om het monster zo snel mogelijk naar het laboratorium te sturen. Voorbeelden van transportmiddelen: Medio Stuart, Cary Blair en Amies.

Half- en verrijkingscultuur

Deze cultuurmedia zijn vloeistof. Ze worden gebruikt om specifieke ziekteverwekkers te redden die op elk willekeurig moment in een minimale hoeveelheid monster kunnen zijn.

Het is ook nuttig om een ​​pathogene spanning te redden die zwak kan zijn door een eerdere ontvangen behandeling. Bijv.: Peptonada Water, Tioglycolate Broth en Selenito Broth.

Deze middelen hebben remmende stoffen die de groei van de bijbehorende microbiota vermijden, en specifieke voedingsstoffen die de ontwikkeling van het micro -organisme van belangstelling geven.

Teeltmedia voor identificatiedoeleinden 

Deze media hebben stoffen die chemisch kunnen worden gemetaboliseerd door bepaalde bacteriën, waardoor chemische reacties worden geproduceerd die de aanwezigheid van specifieke enzymen of metabole routes aantonen.

Daarom worden ze gebruikt als biochemische tests die helpen erkenning van het genre en de soort van een bepaalde groep stammen. Ex: De medium Kigler bewijst of het micro -organisme in staat is om glucose en lactose te gisten, als het waterstof en gassulfide produceert.

Dit medium bevat onthullende stoffen die het mogelijk maken om de reactie te observeren, zoals de pH -indicator, en ijzerionen.

Deze eenvoudige test kan twee grote groepen bacteriële micro -organismen onderscheiden, zoals bacteriën die behoren tot de Enterobacteriaceae -familie van bacteriën die niet -fermenteren worden genoemd.

Betekent kolonies tellen

Dit zijn eenvoudige, niet -selectieve middelen die dienen voor de kwantificering van een microbiële populatie, zoals de standaardrekening. Het type micro -organisme dat in dit medium zal groeien, hangt af van de vastgestelde temperatuur- en zuurstofomstandigheden.

Teeltmedia voor gevoeligheidsbewijs

Het gestandaardiseerde medium voor dit doel is de Müeller Hinton -agar, dit betekent is ideaal om het gedrag van verschillende antibiotica te evalueren tegen een geïsoleerde pathogene micro -organismen.

Het is vooral handig in weinig veeleisende bacteriën, terwijl het bij het eisen van bacteriën alleen kan worden gebruikt als dit met bloed wordt aangevuld.

Onderhoudsmiddelen voor onderhoud

Deze middelen zijn bedoeld om het micro -organisme te reproduceren en ook de levensvatbaarheid van de bacterie of schimmel in een langer mogelijk te behouden en ook dat hun fysiologische functies worden bewaard.

Een belangrijk kenmerk is dat dit type medium geen glucose mag bevatten, want hoewel het een element is dat snelle groei biedt, produceert de fermentatie zuren die de levensduur van de micro -organisme verminderen.

Sommige laboratoria moeten bepaalde micro -organismen haalbaar houden om vervolgens te worden gebruikt in onderzoeksstudies, interne controles of voor onderwijsdoeleinden.

Voorbereiding

Er zijn momenteel veel handelsmerken die de verschillende cultuurmedia verdelen. De media komen in een gelyofiliseerde of gedehydrateerde vorm, opgenomen in hermetische en beschermde potten van licht.

Elk medium brengt een label dat de naam van het medium, zijn componenten, partijnummer en hoeveel weegt om een ​​liter kweekmedium te bereiden, specificeert.

Kan u van dienst zijn: prebiotische evolutie: waar het is gebeurd en wat nodig is

Als verdunnend wordt gedestilleerd water gebruikt. De zware hoeveelheid lost op in een liter gedestilleerd water totdat het mengsel is gehomogeniseerd. De meeste media worden gedurende 15 minuten naar de autoclaaf gebracht, 15 pond, 121 ° C temperatuur.

De vloeibare media zijn al verdeeld in hun respectieve werkbuizen, terwijl het Autoclavate van Solid Media in Erlenmeyer Flessen.

De laatste liet staan ​​totdat ze een temperatuur van 55 ° C bereiken en wordt geserveerd in Petri's borden in een laminaire stroombel of nabij de Bunsen -lichter. Ze mogen stollen en zijn omgekeerd in een koelkast.

Er zijn ook solide kweekmedia die in buizen zijn verdeeld, waardoor zichzelf kunnen stollen in taco's (recht) of fluitpiek (hellend).

Voordat het een voorbereid kweekmedium gebruikt, of het nu vast of vloeistof is, moet het temperen voordat het monster wordt gezaaid.

Belang

De cultuurmedia zijn ongetwijfeld een zeer waardevol werkinstrument voor microbiologen, omdat ze het herstel van het infectieuze agent mogelijk maken dat op een bepaald tijdstip een individu kan beïnvloeden of een voedsel, een omgeving of een oppervlak kan vervuilen.

In die zin kan worden gezegd dat microbiologie verschillende gebieden heeft, waaronder klinische, industriële, milieu-, voedselmicrobiologie, onder andere en in alle kweekmiddelen worden gebruikt.

Natuurlijk kan het type medium dat in elk geval wordt gebruikt, variëren afhankelijk van de behoeften en het type verwerkte monster. De groep micro -organisme zocht ook invloeden.

Het isoleren van het pathogene micro -organisme of het veroorzaken van vervuiling is onmisbaar om een ​​effectieve behandeling te kunnen plaatsen of procedures aan te nemen die de betreffende verontreinigende stof in kwestie kunnen elimineren.

In het geval van klinische microbiologie is het niet alleen belangrijk.

Deze studie die ook een kweekmedium gebruikt, zal toestaan ​​om te zeggen welk antimicrobieel gevoelig is en welke resistent of in een notendop, die kan worden gebruikt als een behandeling en die niet.

Daarom kunnen cultuurmedia niet ontbreken in een laboratorium voor microbiologisch, ongeacht het gebied.

Ten slotte kan worden gezegd dat cultuurmedia ons in staat hebben gesteld om verschillende aspecten te onderzoeken, zowel bacteriën als schimmels.

Kwaliteitscontrole van teeltmedia

De voorbereiding en het gebruik van cultuurmedia moet niet licht worden gedaan. In elk laboratorium moet er een appartement zijn dat kwaliteitscontroleprotocollen toepast op de media, elke keer dat nieuwe kavels worden voorbereid en dus garanderen dat ze goed voorbereid, steriel en functioneel zijn.

Om hun steriliteit te evalueren, worden een of twee middelen van elke partij willekeurig genomen en gedurende meerdere dagen geïncubeerd bij 37 ° C (er mag geen groei zijn). Om de functie te controleren worden ATCC -referentiestammen gebruikt (Amerikaanse type cultuurcollectie) naar behoren gecultiveerd en levensvatbaar.

Teelt media verwijdering

Na het gebruik van de cultuurmedia moeten ze zo worden weggegooid dat het de omgeving niet vervuilt.

Om dit te doen, wordt het materiaal gesteriliseerd in autoclaaf voordat het wordt weggegooid. Vervolgens wordt het glaswerkmateriaal verwijderd. De laatste wordt gewassen, gedroogd, gesteriliseerd en opgeslagen voor later gebruik. In het geval van het gebruik van wegwerpplaten worden deze gesteriliseerd en vervolgens weggegooid in speciale tassen.

Referenties

1. Brego -microbiologie in postzegels VIII. Robert Koch: The Triumph of Perseverance (I). SEM 2018, 117 (1): 1-18 Universiteit van Malaga. Beschikbaar op: dagen.UAB.Kat/
2. Volcy c. Genesis en evolutie van Koch's postulaten en hun relatie met fytopathologie. Een beoordeling Colomb. 2008; 26 (1): 107-15. Beschikbaar bij: Scielo.borg.co/
3. Burguet Lago Nancy, Castillo Abraham Lourdes. Kwaliteitscontrole van de cultuurmedia die worden gebruikt bij milieumonitoring van geclassificeerde productiegebieden. Cubaans Rev Hig Epidemiol 2013; 51 (2): 155-160. Beschikbaar bij: Scielo.
4. Bonilla M, Pajares S, Vigueras J, Sigala J, Le Borgne S. Didactisch materiaalhandleiding van basismicrobiologiepraktijken. Metropolitan Autonomous University. Natural Sciences and Engineering Division. Cuajimalpa -eenheid. 2016. Beschikbaar op: Cua.UAM.mx/
5. Carbajal a. Cellulaire cultuurmedia: een overzicht. Labome De wereld van laboratoria. University of Pittsburgh Medical Center, Verenigde Staten. 2013 beschikbaar op: ES/
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e ed. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR. Argentinië.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Bailey & Scott microbiologische diagnose. 12 ed. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR. Argentinië.