Hoge werkzaamheid vloeistofchromatografie (HPLC) foundation, apparatuur, typen

De Zeer efficiënte vloeistofchromatografie Het is een instrumentale techniek die wordt gebruikt in chemische analyse waarmee het mengsels mag scheiden, de componenten te zuiveren en te kwantificeren, en andere studies uit te voeren. Het is bekend met de HPLC -afkorting, afgeleid van het Engels: Hoge prestaties vloeistofchromatografie.

Dus, zoals zijn naam aangeeft, werkt het door vloeistoffen te manipuleren. Deze bestaan ​​uit een mengsel dat bestaat uit de analyt of de steekproef van interesse, en een of meer oplosmiddelen die fungeren als de mobiele fase; Dat wil zeggen, degene die de analyt over het HPLC -team en de kolom sleept.

HPLC -apparatuur. Bron: dqwyy [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licenties/by-sa/4.0)]

HPLC wordt op grote schaal verspreid door kwaliteitsanalyse -laboratoria bij tal van bedrijven; zoals apothekers en voedsel. De analist in kwestie moet het monster, de mobiele fase voorbereiden, de temperatuur en andere parameters controleren en de wegen in het wiel of de carrousel plaatsen zodat de apparatuur de injecties automatisch uitvoert.

HPLC -apparatuur wordt gekoppeld aan een computer waarmee de gegenereerde chromatogrammen kunnen worden waargenomen, en de analyse kunnen starten, de stroom van de mobiele fase regelen, het type elutie (isocratisch of door gradiënt) regelen en de detectoren inschakelen (UV -Vis of de massaspectrofotometer).

[TOC]

Basis

In tegenstelling tot conventionele vloeistofchromatografie, zoals papier of kolom gevuld met gel -silica, hangt HPLC niet af van de zwaartekracht, zodat de vloeistof de stationaire fase. Werk in plaats daarvan met hoge perspompen, die de mobiele of eluerende fase door de kolom irrigeren met een grotere intensiteit.

Op deze manier is het niet nodig.

Kan u van dienst zijn: carbonoïden: elementen, kenmerken en toepassingen

Maar de efficiëntie van deze techniek is niet exclusief te wijten aan dit detail, maar ook aan de kleine vuldeeltjes die de stationaire fase vormen. Omdat het kleiner is, is het contactoppervlak met de mobiele fase groter, dus het zal in betere mate interageren met de analyt en de moleculen zullen meer worden gescheiden.

Deze twee kenmerken, plus het feit dat de techniek detectelkoppeling mogelijk maakt, maken HPLC veel hoger dan fijn of papierlaagchromatografie. De scheidingen zijn efficiënter, de mobiele fase beweegt beter door de stationaire fase en chromatogrammen kunnen wat analyse in de analyse detecteren.

Apparatuur

Vereenvoudigd diagram van de werking van een HPLC -apparatuur. Bron: Gabriel Bolívar.

Een vereenvoudigd diagram wordt hierboven weergegeven hoe een HPLC -team werkt. De oplosmiddelen worden gevonden in hun respectieve containers, gerangschikt met slangen voor de pomp om een ​​klein volume van hen in de apparatuur te dragen; We hebben de mobiele fase.

De mobiele of eluerende fase moet eerst worden slijtage, zodat de bubbels geen invloed hebben op de scheiding van de analytmoleculen, die wordt gemengd met de mobiele fase zodra de apparatuur de injecties heeft gemaakt.

De chromatografische kolom bevindt zich in een oven waardoor de temperatuur kan worden gereguleerd. Voor verschillende monsters zijn er dus voldoende temperaturen om scheidingen met hoge prestaties te bereiken, evenals een brede catalogus van kolommen en type vullingen of stationaire fasen voor specifieke analyse in specifieke analyse.

De mobiele fase met de opgeloste analyt komt de kolom binnen en daaruit duren eerst de moleculen die "minder affiniteit voelen" voor de stationaire fase, terwijl ze vervolgens worden behouden die er het meest door worden behouden. Elk Eluida -molecuul genereert een signaal dat wordt gevisualiseerd in het chromatogram, waarbij de retentietijden van de afzonderlijke moleculen worden waargenomen.

Kan u van dienst zijn: vloeibaarmaking: concept, gassen, bodem en seismisch, baanbrekend

En aan de andere kant eindigt de mobiele fase na het passeren van de detector in een afvalcontainer.

HPLC -typen

Er zijn veel soorten HPLC, maar onder alle meest opvallende zijn de volgende vier.

Normale fasechromatografie

Normale fasechromatografie verwijst naar dat waar de stationaire fase polaire aard is, terwijl de apolaire mobiel. Hoewel het normaal wordt genoemd, wordt het in feite het minst gebruikt, als de omgekeerde fase de meest voorkomende en efficiënte.

Inverse fasechromatografie

Als een omgekeerde fase, nu is de stationaire fase Apolar en de polaire mobiele fase. Dit is vooral nuttig in biochemische analyse, omdat veel biomoleculen beter oplossen in water- en polaire oplosmiddelen.

Ionuitwisselingchromatografie

In dit type chromatografie beweegt de analyt, met een positieve of negatieve belasting, door de kolom die de ionen vervangt die het herbergt. Hoe groter de belasting, hoe groter zijn retentie, dus het wordt veel gebruikt om ionenovergangsmetalen te scheiden.

Moleculaire uitsluitingschromatografie

Deze chromatografie is, in plaats van te scheiden, verantwoordelijk voor het zuiveren van het resulterende mengsel. Zoals de naam al aangeeft, is de analyt niet langer gescheiden, afhankelijk van hoe gerelateerd aan de stationaire fase, maar volgens zijn moleculaire grootte en massa's.

De kleinste moleculen zullen meer behouden blijven dan grote moleculen, omdat deze niet vastzitten tussen de poriën van de polymere vullingen van de kolommen.

Toepassingen

HPLC maakt zowel kwalitatieve als kwantitatieve analyse mogelijk. Met betrekking tot de kwalitatieve kan, bij het vergelijken van de retentietijden van het chromatogram onder bepaalde omstandigheden, de aanwezigheid van een bepaalde verbinding kan worden gedetecteerd. Deze aanwezigheid kan een indicatie zijn van een ziekte, vervalsing of drugsgebruik.

Kan u van dienst zijn: opgeloste stof en oplosmiddel

Daarom is het een team dat deel uitmaakt van de diagnostische laboratoria. Evenzo bevindt het zich in de farmaceutische industrie, omdat het het mogelijk maakt om de zuiverheid van het product te verifiëren, evenals de kwaliteit van hetzelfde als de oplossing in de maagomgeving. De uitgangsmaterialen dienen zich ook voor bij HPLC om ze te zuiveren en een betere prestatie in drugssynthese te garanderen.

Met HPLC kunt u complexe eiwitmengsels, aminozuren, koolhydraten, lipiden, porfyrines, terpenoïden analyseren en scheiden en in wezen is het een uitstekende optie om met plantenextracten te werken.

En ten slotte kunt u met moleculaire uitsluitingchromatografie polymeren van verschillende maten selecteren, omdat sommige kleiner of groot kunnen zijn. Op deze manier worden producten met een laag of hoog gemiddelde moleculaire massa's verkregen, dit is een bepalende factor in de eigenschappen en toekomstige toepassingen of synthese.

Referenties

1. Dag, r., & Underwood, een. (1989). Kwantitatieve analytische chemie. (Vijfde ed.)). Pearson Prentice Hall.
2. Bussi Juan. (2007). Vloeistofchromatografie met hoge werkzaamheid. [PDF]. Hersteld van: vinger.Edu.Oh
3. Wikipedia. (2019). Krachtige vloeistofchromatografie. Opgehaald uit: in.Wikipedia.borg
4. Clark Jim. (2007). Hoge prestaties vloeistofchromatografie. Hersteld van: chemguide.co.Uk
5. Matthew Barkovich. (5 december 2019). Hoge prestaties vloeistofchromatografie. Chemistry Libhethexts. Hersteld van: chem.Librhetxts.borg
6. G.P. Thomas. (15 april 2013). High Performance Liquid Chromatography (HPLC) - Methoden, voordelen en toepassingen. Hersteld van: Azom.com