Neubauer camerasistiek, kenmerken, gebruik

De Neubauer -camera, Heatimeter of hechocytometer, is een laboratoriuminstrument dat bestaat uit een speciale glazen plaque. Deze kamer dient om sommige celtypen uit te voeren, zoals rode bloedcellen, witte bloedcellen en bloedplaatjes, hoewel deze kan worden gebruikt om sporen, sperma, parasieten, enz.

Het presenteert zeer bijzondere kenmerken, omdat het bestaat uit 3 zones, een centraal voor de graaf en twee ondersteuningszones. Elke camera heeft twee teldebieden of zich aan de bovenkant, een aan de bovenkant en één aan de onderkant.

Neubauer -camera. Bron: Santibadia [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licenties/by-sa/4.0)]. Bewerkte afbeelding.

Deze hebben meerdere divisies in een rastervorm. De tellende gebieden zijn de middelgrote dozen die worden gevonden in de 4 hoeken van beide dradenkruid, plus het centrale vierkant.

De camerasamenstelling moet zeer zorgvuldig worden uitgevoerd, omdat elk detail de celtelling beïnvloedt. Er zijn veel fouten die kunnen worden gemaakt, maar als een van hen zich voordoet, moet de camera worden gedemonteerd, schoon en opnieuw geassembleerd. Onder de belangrijkste fouten kan het volgende worden vermeld:

Rebosar de camera of maak een onvoldoende vulling, laat de camera drogen, probeer overtollig vloeistof met gaas te verwijderen, kantel de camera door hem te vervoeren, een vuile of natte camera te vullen, de verdunning of het monster niet goed te mengen, onder andere. Al deze fouten zullen een onwerkelijke waarde resulteren.

[TOC]

Geschiedenis

Neubauer's camera is een precisie -instrument en in het productieproces gaat het door strikte kwaliteitscontrole door. Het is gemaakt voor precieze deeltjes of vormen door mm³, zoals cellen in verschillende vloeistoffen. De delicate graphics zijn gesneden met diamanten potlood.

Kenmerken van de Neubauer -kamer

De complete camera is de grootte van een normale dia zodat deze op de microscoopplaat kan worden geplaatst.

De camera bestaat uit drie centrale rechthoekige oppervlakken (A, B, C). In zone "B" bevindt de R- of tellingzone zich, ook wel Reticulum genoemd. Één aan elke kant van de camera, gescheiden door de "D" -zone.

Grafisch schema van de Neubauer -camera. Bron: praktische hematologiehandleiding. Bioanalysis School van de Universiteit van Carabobo, Venezuela.

Elk reticulum is een gepolijst gebied dat het bijdrage -gebied bevat gegraveerd. Het bestaat uit een vierkant met een oppervlakte van 9 mm² En het is intern verdeeld in 9 foto's met 1 mm² oppervlak. De vier hoeken zijn verdeeld in 16 kleinere roosters (0.0625 mm² Van oppervlak).

Deze roosters worden gevormd door een reeks millimeterlijnen die met elkaar kruisen, die perfect grafische roosters vormen en gescheiden zijn voor de gespecificeerde maatregelen. Deze lijnen zijn opgenomen met diamanten punt.

Verbeterde Neubauer reticulum. Bron: Praktische Hematology Guide of the Bioanalysis School van de Universiteit van Carabobo, Venezuela.

De vier zijden komen overeen met het telgebied. In deze zijden of hoeken wordt het verslag van de meeste cellen (rode bloedcellen en leukocyten) uitgevoerd, terwijl bloedplaatjes in het centrale gebied worden geteld.

Kan u van dienst zijn: Malachite Green: Kenmerken, voorbereiding, toepassingen, toxiciteit

De centrale zone heeft meer afdelingen, het bestaat uit een vierkant van 1 mm² verdeeld in 25 schilderijen met een oppervlakte van 0,04 mm² elk. Deze zijn op hun beurt verdeeld in 16 roosters met een oppervlakte van 0,0025 mm².

Beschrijving van het verbeterde Neubauer reticulum. a) Vierkant van de hoeken, b) centraal vierkant, c) Gemiddeld vierkant van het centrale vierkant. Bron: Praktische Hematology Guide of the Bioanalysis School van de Universiteit van Carabobo, Venezuela.

Het gebied "A" en "C" dient als een ondersteuning om een ​​speciaal objectafdekkingen te plaatsen dat hematimetrische lamel of hematimeterhoezen wordt genoemd.

De hoogte tussen de lamel en het teloppervlak is 0,1 mm. De oppervlaktematen van de teldozen, evenals de hoogte van de camera en de verdunning van het monster, zijn noodzakelijke gegevens om de uiteindelijke berekeningen uit te voeren.

Toepassingen

Het wordt gebruikt voor celtelling. Het is vooral zeer nuttig in het hematologiegebied, omdat het mogelijk maakt dat de 3 bloedcelreeksen worden gemaakt; dat wil zeggen rode bloedcellen, witte bloedcellen en bloedplaatjes.

Het kan echter in andere gebieden worden gebruikt, bijvoorbeeld om sperma, sporen, bacteriën of andere belangrijke elementen te tellen, afhankelijk van het type monster.

Hoe wordt gebruikt?

Monsterbereiding

Om het aantal cellen uit te voeren, begint het meestal bij een eerdere verdunning. Voorbeeld: om witte bloedcellen te tellen, wordt een verdunning van 1:20 bereid met Turk -vloeistof. De verdunning is goed gemengd voordat de pipet wordt geladen en de Neubauer -camera opzetten.

Er zijn gelegenheden waarin een verdunning van 1:20 niet voldoende is om te tellen. Bijvoorbeeld bij patiënten die lijden aan bepaalde soorten chronische leukemieën. In deze gevallen moeten hogere verdunningen worden gemaakt als 1: 100.

Als integendeel het account erg laag is, zoals bij ernstige leukopenieën, kunnen kleinere verdunningen worden gemaakt om het monster te concentreren. Voorbeeld: u kunt een verdunning doen 1:10.

De wijzigingen die worden aangebracht, beïnvloeden de berekeningen.

Montage van de Neubauer -kamer

De kamer van Neubauer wordt geassembleerd door de hematimetrische lamel in de centrale zone te plaatsen. Beide moeten erg schoon en droog zijn. Om de lamel te plaatsen, wordt deze door de randen genomen en valt het voorzichtig op de camera.

Dit wordt gevuld door de punt van een automatische pipet of thoma -pipet onder een hoek van 35 ° aan de rand van het vrachtgebied te plaatsen. De vloeistof wordt zachtjes gelost en de laadzone wordt gevuld door capillariteit. Dit wordt aan beide kanten gedaan om de twee ontketsels te laden.

Er mogen geen verloofde worden overbelast en er mag niet vloeistof worden geweigerd. De belasting moet precies zijn. Het is belangrijk dat de vulling homogeen wordt gedaan, dat wil zeggen, er mogen geen bubbels zijn.

Zodra de camera 2 minuten in rust is ingesteld om de cellen op de achtergrond te laten neerslaan en de visualisatie en het tellen is eenvoudiger.

Nadat de rusttijd is gemonteerd op het licht van de lichtmicroscoop voor observatie. Eerst richt het zich op een 10x -doelstelling en indien nodig wordt het doorgegeven aan 40x.

Kan u van dienst zijn: Gap Anion

Om uw visualisatie te verbeteren, wordt het microscooplicht verminderd. Om dit te doen, wordt de condensor verlaagd en sluit het diafragma een beetje.

Rekening

Voor het verslag van de witte bloedcellen of leukocyten moet het gehele oppervlak van de vier middelgrote vierkanten van de hoeken en het centrale vierkant van elk reticulum worden geteld.

De telling begint in het vierkant van de linkerbovenhoek. Het begint vanaf het eerste vierkant van de voorste rij, dat wil zeggen van links naar rechts om het tegenovergestelde uiteinde te bereiken.

Daar wordt het verlaagd en wordt de look van rechts naar links geretourneerd tot het andere uiteinde en dus op de cellen binnen elk rooster in de vorm van zigzag. De 16 roosters van elk gemiddeld vierkant worden geteld.

Om te voorkomen dat er tweemaal een cel telt, zijn er regels voor de cellen die zich op de grenzen van elk rooster bevinden. De cellen die zich in de linker- en bovenlijnen bevinden, worden geteld en die die zich aan de rechterkant bevinden en onderlijnen worden genegeerd.

Er moet een handmatige celdeller beschikbaar zijn zodat de operator de apparaatsleutel zo vaak onderdrukt als het observeren van cellen. Met het gebruik van de accountant kan de operator tellen zonder dat u vanuit het microscopische veld op moet kijken. Aan het einde van het account zul je het totale aantal getelde cellen waarnemen.

Berekeningen

Voor berekeningen kunt u op verschillende manieren doorgaan. U kunt een enkel reticulum tellen of beide kunnen worden geteld en een gemiddelde van beide. In deze twee situaties moeten de getelde cellen worden vermenigvuldigd met een factor, die in dit geval 40 zou zijn. En dus wordt het totale aantal per mm verkregen³.

Maar als de twee dradenkruid wordt geteld en er geen gemiddelde is, moet deze worden vermenigvuldigd met een andere factor, in dit geval met 20.

-Vermenigvuldigingsfactor

Vervolgens wordt de vermenigvuldigingsfactor berekend.

Voor de berekeningen worden rekening gehouden met meerdere gegevens, waaronder de titel van de verdunning, de hoogte van de kamer en het oppervlak verteld.

Verdunning

De verdunning die op een standaard manier wordt gebruikt, is 1:20 voor het aantal leukocyten.

Kamerhoogte

De hoogte tussen de camera en de hematimetrische lamina is 0,1 mm.

Geteld oppervlak

Als 5 vierkanten van 1 mm worden geteld² oppervlak, het betekent dat het totale verslag van de telling 5 mm is². Deze gegevens moeten worden vermenigvuldigd met de camerahoogte om het totale volume te verkrijgen. Dat wil zeggen 5 mm² x 0,1 mm = 0,5 mm³.

Formules en berekeningen

Met de gegevens die worden gezegd, wordt gezegd:

If op 0,5 mm³ -Er zijn ° cellen geteld

In 1 mm³ --Er zullen - X aantal cellen zijn

X cel n ° = (n ° cellen gekaled x 1) /0,5 mm³

Maar verdunning moet ook in aanmerking worden genomen. Daarom is de formule als volgt:

(Nr van getelde cellen x 1) x 20/0,5 mm³

Ten slotte, om samen te vatten, kunt u het aantal getelde cellen vermenigvuldigen met 40. Aldus wordt de waarde van leukocyten per mm verkregen³.

Kan u van dienst zijn: osmose: proces, typen, verschillen met diffusie en voorbeelden

In het geval dat de twee dradenkruid wordt geteld, worden de gegevensgegevens gewijzigd die in dit geval 10 vierkanten zouden zijn, dat wil zeggen 10 mm². En een totaal volume verteld van 1 mm3. De formule zou blijven:

(N ° cellen geteld x 1) x 20/1 mm³

Daarom zou in dit geval de vermenigvuldigingsfactor 20 zijn.

Fouten

-Als het bij het laden van de camera wordt overschreden of met vloeistof wordt overschreden, zal de hoogte van de camera variëren. Dit resulteert in het tellen van het echte. Als u probeert overtollig te verwijderen met gaas of katoen, vertegenwoordigt dit een karafale fout. Door deze werking zal de cellen zich concentreren, waardoor het aantal wordt verhoogd.

-Als het slecht wordt opgeladen, zal de telling onder de reële.

-In het geval dat de camera is gemonteerd en uitgelaten, is het niet langer mogelijk om de telling te maken omdat deze onjuiste resultaten zal uitzenden.

-Als voordat de camera wordt geladen, is de verdunning van het monster niet goed gemengd, is er een risico op leesfouten, omdat de cellen niet homogeen worden verdeeld. Daarom zal er minder of grotere concentratie van cellen zijn, afhankelijk van of het monster respectievelijk uit het oppervlak van de vloeistof of de bodem van de buis wordt gehaald.  

-De aanwezigheid van bubbels vermindert de hoeveelheid vloeistof die het dradenkruis moet binnenkomen, waardoor de juiste visualisatie en verdeling van cellen wordt verstoord. Dit alles beïnvloedt de resultaten aanzienlijk.

-Til de microscoop tijdens de telling niet op totdat elk groot vierkant is voltooid om te voorkomen dat ze verloren gaan.

-Een reden voor fouten is om de camera te buigen na gemonteerd. Daarom moet u de microscoopplaat zorgvuldig uploaden.

Aanbeveling

Als u om de een of andere reden een afwijking detecteert bij het indienen van de camera, wordt het meest aanbevolen om die voorbereiding te demonteren, de camera schoon te maken en opnieuw in elkaar te zetten.

Wees heel voorzichtig bij het reinigen van de camera om de kras van de reticle te voorkomen. Aan de andere kant, houd er rekening mee dat de hematimetrische lamel delicaat en breekbaar is. Onvoldoende manipulatie kan het breken.

Zorg ervoor dat de cellen goed zijn verdeeld voordat u begint te tellen. Een ongelijke verdeling van cellen vindt plaats door een slecht mengsel van het monster of verdunning. Als dit gebeurt, moet de montage worden herhaald.

Een manier om te weten of de cellen goed zijn verdeeld, is het vergelijken van het verslag van elk groot vierkant, het aantal cellen dat door elk vierkant wordt geteld, mag niet overdreven verschillen tussen de ene en de andere.

-Als de witte bloedcellen meer dan 50 tellen.000 mm³ Het is raadzaam om het account te herhalen, waardoor een grotere verdunning wordt gemaakt.

-Als het de verdunning wijzigt, moet de vermenigvuldigingsfactor opnieuw berekenen, omdat dit de formule beïnvloedt.

Referenties

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Vergelijking van spermaconcentratie met behulp van Makler's camera en de camera van Neubauer. Urol esp 2008; 32 (4): 443-445. Beschikbaar bij: Scielo.
2. Neubauer -camera. (2018, 27 maart). Wikipedia, gratis encyclopedie. Datum van overleg: 04:10, 23 juni 2019 van ES.Wikipedia.borg
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Toepassing van een alternatieve telmethode in de kamer van Neubauer om de concentratie van vaginalis trichomonas te bepalen. Revisie. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Beschikbaar bij: ResearchGate.netto
4. Gómez-Pérez Roald E. Expermogram -analyse. Revisie. Venez. Endocrinol. Metab.  2007; 5 (2): 19-20. Beschikbaar op: VE.Scielo
5. Praktische Hematology Guide of the Bioanalysis School van de Universiteit van Carabobo. Venezuela.1998