Malonaat bouillon, voorbereiding en gebruik

Hij Malonato bouillon Het is het vloeibare kweekmedium dat wordt gebruikt voor de diagnostische test (Malonato -test), gebruikt om sommige genres van de Enterobacterias -familie te onderscheiden. Het is gemaakt door Leifson in 1.933 en vervolgens gewijzigd door Ewing, die een kleine hoeveelheid dextrose en gistuittreksel aan de oorspronkelijke formule heeft toegevoegd.

Het medium is momenteel samengesteld uit gistextract, ammoniumsulfaat, dipotassiumfosfaat, monopotoon fosfaat, natriumchloride, natriummalonaat, dextrose en bromotimol blauw. Deze test is over het algemeen opgenomen in de biochemische identificatiebatterij voor Enterobacteria, waardoor bepaalde geslachten en soorten worden onderscheiden.

Grafische weergave van de Malonato -test. NAAR. Negatieve test, B. (Verzuring) negatieve test, c. (Midden -alcalinisatie) Positieve test. Bron: Public Domainitures gekleurde buizen.netto

De Malonato -test is voornamelijk gebaseerd op het vermogen van sommige micro -organismen om natriummalonato te gebruiken als een enkele koolstofbron en als een bron van stikstof tot ammoniumsulfaat.

De Malonato -test geeft meestal positief in sommige soorten van de genres Enterobacter, Klebsiella en Citrobacter. Terwijl de meeste soorten van de genres Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus en Providencia een negatieve reactie geven.

[TOC]

Basis

Malonaattest bestaat als bewijs.

De meeste enterobacteriën die geen malonato gebruiken, zijn in staat om in dit medium te groeien, als voedingsstoffen de dextrose en gistextract nemen.

In dit geval zal elke alkalisatiepoging als gevolg van het gebruik van peptonen worden tegengegaan door de productie van zuren die worden gegenereerd door de fermentatie van de dextrose. Evenzo fungeren de dipotassium- en monopotasische fosfaten als een buffer die de pH behouden op 6,7.

Het kan je van dienst zijn: rond Donax

Dat is de reden waarom, wanneer de test negatief is, de bouillon dezelfde originele kleur heeft (groen). Zelden zou het medium kunnen worden aangezuurd vanwege de fermentatie van de dextrose; Zonder het gebruik van peptonas en de pH -indicator zouden de kleur van het medium naar geel draaien. Hiervoor moet de pH dalen tot 6.

Wanneer deze test nu positief is dat het micro -organisme malonato en ammoniumsulfaat gebruikte als respectievelijk koolstof- en stikstofbronnen, zonder de andere componenten te gebruiken.

In dit geval is het medium alkaliseerd vanwege de bevrijding van natrium en de daaruit voortvloeiende NaOH -formatie. In deze zin verandert de pH -indicator (bromotimol blauw) de kleur van het midden van groen tot blauw wanneer de pH gelijk is aan of groter dan 7,6. Blauw kan helder of intens zijn (Pruisen Blue).

Ten slotte handhaaft natriumchloride de osmolariteit van het medium en is water de verdunde van alle componenten.

Interpretatie

Bouillon van dezelfde kleur (groen): negatieve test

Gele bouillon: negatieve test

Clear of Intense Blue Broth: Positive Test

Er is een variant genaamd malonato fenylalaninebouillon, ook wel Shaw en Clarke Medium genoemd. In dit geval kunnen twee tests worden geanalyseerd, het gebruik van malonato als koolstofbron en de productie van pyruvinezuur uit fenylalanine.

Voorbereiding

Malonato bouillon

De hoeveelheid gram die wordt gespecificeerd door de insert van het gekozen commerciële huis weegt (het kan van de ene tot de andere variëren). Zware grammen worden opgehangen in een liter gedestilleerd water. Verwarm enigszins tot de volledige ontbinding. Verdeel 3 ml van het medium in 13/100 testbuizen met katoenen deksel.

Steriliseer in autoclaaf bij 121 ° C gedurende 15 of 20 minuten.

Koel. Als ze niet onmiddellijk worden gebruikt, bewaar dan in de koelkast tot gebruik. Temper de bouillons bij kamertemperatuur voordat ze inoculeren.

Kan u van dienst zijn: Giptodon

De middelgrote pH moet 6,7 ± 0,2 zijn. De kleur van het voorbereide medium is flesgroen.

Malonato fenylalaninebouillon

Weeg 11 gr van het gedehydrateerde medium en lost op in 1 liter gedestilleerd water. De rest van de voorbereiding gelijk aan die hierboven beschreven.

Het kan ook worden bereid door 2 gr/l fenylalanine toe te voegen aan het Malonato -bouillon medium voordat het wordt gesteriliseerd.

Gebruik

Het wordt gebruikt als onderdeel van de biochemische testbatterij die zijn gemonteerd voor de identificatie van bacteriën van de familie Enterobacteriaceae.

Help onderscheid te maken tussen:

-Het geslacht Klebsiella en Enterobacter (+) van het geslacht Escherichia en Serratia (-).

-De soort van SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP, SSP SSP Salame Salmonella Salmonella enterica SSP Diarizonae (+), van de soort Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Van het geslacht Klebsiella in het algemeen (+) van het geslacht Actinobacillus (-).

-Soms kan het de differentiatie van genres en soorten bacteriën helpen die niet tot de familie Enterobacteriaceae behoren, zoals bij niet -fermenterende gram negatieve bacillen Alcaligenes faecalis (+) Acinetobacter SP (-).

Bron: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e ed. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR. Argentinië.

Procedure

Onder een lichter wordt een deel van een pure kolonie genomen, met behulp van een correct gesteriliseerde en gekoelde platinakhandel. Het genomen monster (licht inoculum) lost op in de malonato -bouillon. Het wordt 24 tot 48 uur geïncubeerd met het luie deksel in aerobiose bij 35 ° C ± 0,2.

U kunt ook de Malonato -bouillon inoculeren vanaf een oogst van 18 - 24 uur in Triptyse Soja Bouillon. In dit geval wordt 0,01 ml genomen met een steriele pipet en wordt de malonato -bouillon geïnoculeerd. Het wordt 24 tot 48 uur geïncubeerd met het luie deksel in aerobiose bij 35 ° C ± 0,2.

Kan u van dienst zijn: secundaire consumenten

Voltooid de tijd dat de resultaten worden geïnterpreteerd. Elk overblijfsel van blauwe kleur voltooid 48 uur incubatie moet als positief worden beschouwd. De test moet niet als negatief worden geïnterpreteerd totdat de incubatietijd van 48 uur is vervuld.

In het geval van het gebruik van de malonato-fenylalaninebroth-variant, wordt de malonato eerst geïnterpreteerd en vervolgens 5 druppels HCl 1N en 3-5 druppels van 8% ijzerchloride worden toegevoegd. Een donkergroene kleur wordt geïnterpreteerd als een positieve test voor fenylalanine. Als integendeel het medium lichtblauw wordt, is de test negatief voor fenylalanine.

QA

Om de steriliteitscontrole van het medium uit te voeren, moeten een of twee bouillons worden geïncubeerd bij 35 ° C ± 0,2 gedurende 24 uur incubatie. Na deze tijd zou er geen troebelheid of kleurverandering moeten zijn.

Voor kwaliteitscontrole kunt u bekende of gecertificeerde stammen gebruiken, zoals: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP ATCC 13314 en Escherichia coli ATCC 25922.

De verwachte resultaten zijn:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae En SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP Ze geven een positieve reactie (half blauw).
• Voor Escherichia coli Het resultaat moet negatief geven, dat wil zeggen, wordt verwacht dat er geen kleurverandering (groen) is of dat het geel wordt vanwege glucosefermentatie.

Beperkingen

Gebruik geen bouillon die troebelheid, neerslag, kleurverandering of enig teken van achteruitgang tonen.

Referenties

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Microbiologische isolatie van Salmonella spp. en moleculaire hulpmiddelen voor detectie. Uninorte Health. Barranquilla (col.) 2014; 30 (1): 73-94. Beschikbaar bij: Scielo.borg.co
2. Bbl. Malonaatbouillon, Ewing Modified. 2007. Beschikbaar op: BD.com
3. Senna Laboratories. Malonato bouillon. Beschikbaar op: wetenschappelijk.com
4. Renylab. Malonato bouillon. 2013. Beschikbaar op: dit.Renylab.ind.BR
5. MBIOLOGIE DIAGNOSTIEK. Malonato bouillon. Beschikbaar bij: MBIOLOGIE.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e ed. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR. Argentinië.
7. Conda pronadisa laboratoria. Malonato fenylalaninebouillon. Beschikbaar bij: Condalab.com