EC Breatment, voorbereiding en gebruik

Hij EC -bouillon of bouillon Escherichia coli Het is een selectieve vloeibare kweekmedium. Dit medium wordt aanbevolen volgens de standaardmethoden voor het aantal totale en fecale coliformen, door de meest waarschijnlijke nummertechniek (NMP) in water- en voedselmonsters, waarbij het hoofdmiddel is de hoofdmiddel is Escherichia coli.

De EC -bouillon bestaat uit tripteine, lactose, galzouten, pipotasisch fosfaat, monopotasisch fosfaat, natriumchloride en water. De formule is strategisch ontworpen om de groei van totale en fecale coliformen te bevorderen en de ontwikkeling van andere bijbehorende micro -organismen te voorkomen.

Figuratieve weergave van de voorbereiding van de EC -bouillon. Bron: Pixabay.com

De bacterie Escherichia coli Het is het belangrijkste fecale coliform aanwezig als een verontreinigende stof in water- en voedselbronnen, die de oorzaak is van belangrijke gastro -intestinale effecten.

Opgemerkt moet worden dat er veel serotypes van zijn Escherchia coli; Onder hen kan de enterohemorrágica (EHEC), enteroInvasive (eiec), entteopathogeen (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) en enteroagregative (EAEC) worden vermeld.

Dit medium heeft de mogelijkheid om de ontwikkeling van ze allemaal toe te staan, maar kan ze niet van elkaar onderscheiden. Hiervoor moeten extra tests worden uitgevoerd.

De microbiologische studie van water en voedsel voor het meest waarschijnlijke aantal (NMP) voor het zoeken naar totale en fecale coliformen is een protocol dat uit verschillende fasen bestaat; vermoedelijke fase, bevestigende fase en voltooiingsfase. EC -bouillon wordt gebruikt in de bevestigende fase.

[TOC]

Basis

EC -bouillon

Het EC -medium is gebaseerd op het bieden van de nodige voedingselementen voor de optimale ontwikkeling van totale en fecale coliformen, waar de bacteriën zijn inbegrepen Escherichia coli.

Deze voedingselementen worden geleverd door Triptein, die een uitstekende bron van peptiden en aminozuren zijn. Bovendien bevat het ook lactose, een fermenteerbaar koolhydraat dat energie levert en u in staat stelt om te laten zien of de bacterie gas produceert.

Aan de andere kant bevat het medium galzouten die de selectieve aard bieden, omdat het de groei van gram -positieve micro -organismen remt die in de steekproef kunnen zijn.

Het kan je van dienst zijn: Flora en Fauna van Nuevo León

Evenzo dipotasy fosfat. Dit systeem is noodzakelijk, omdat de lactose in de bouillon de neiging heeft om het medium te verzuren wanneer het wordt gefermenteerd door micro -organismen, maar dit wordt gecompenseerd door fosfaatzouten.

Daarom zijn deze elementen essentieel, omdat zuurgraad zonder controle de goede ontwikkeling van gezochte micro -organismen kan beïnvloeden.

Van zijn kant stabiliseert natriumchloride het milieu, terwijl water het oplosmiddel is van de aanwezige opgeloste stoffen en het milieu voor vloeibare consistentie biedt.

EC -bouillon gewijzigd met novobiocine

Okrend en Rose creëerden een verscheidenheid aan de EC -bouillon, genaamd EC Modified EC Broth. De modificatie bestond uit de afname van de concentratie van galzouten en het aggregaat van 20 mg/dl novobiocina.

Deze aanpassing is voorstander van het herstel van stammen van Escherichia coli Enterohemorrágica (O157: H7).

Dit bacteriële serotype veroorzaakt ernstige hemorragische colitis die hemolytisch uremisch syndroom (SUH) kan veroorzaken; die op zijn beurt acuut nierfalen kan genereren, met een hoog sterftecijfer dat tot 50% bij ouderen kan bereiken.

Vanwege de morbide veroorzaakt door deze bacteriën voor de consumptie van vervuild voedsel, beveelt het Amerikaanse ministerie van Landbouw (USDA) het gebruik van dit medium ten zeerste aan.

Voorbereiding

EC -bouillon

Weeg 37,4 gr van het gedehydrateerde medium en los op in 1 liter gedestilleerd water. Het mengsel moet 5 minuten worden toegestaan. Vervolgens lost het in een warmtebron regelmatig op en lost het vaak op.

Eenmaal opgelost, wordt het verdeeld in testbuizen die eerder zijn geconditioneerd met een Durham -buis binnenin. Steriliseer in autoclaaf bij 121 ° C gedurende 15 minuten.

Kan u dienen: Sphingomyeline: wat is, structuur, functies, synthese

De middelgrote pH moet 6,9 ± 0,2 zijn.  De kleur van het gedehydrateerde medium is beige en voorbereid is duidelijk amber.

De bouillons worden tot gebruik in de koelkast opgeslagen. Op het moment van gebruik moeten de bouillons op kamertemperatuur zijn.

Aan de andere kant kan de EC -bouillon ook in dubbele concentratie worden bereid.

EC -bouillon gewijzigd met novobiocine

Weeg 36,7 gr van het gedehydrateerde medium en los op in 1 liter water. De rest van de voorbereiding is gelijk aan die hierboven beschreven.

Gebruik

Totale en fecale coliforme analyse

De EC -bouillon is ideaal voor de bevestigende fase van het coliforme onderzoek door de NMP -methode, beide in watermonsters, zoals in farmaceutische en voedingsmiddelen.

Snelle en gasproductiebouillon die worden verkregen in de vermoedelijke fase moeten worden hersteld in felgroene bouillons bij 2% en in EC -bouillon.

Voor totale coliformen worden EC -bouillons 24 tot 48 uur bij 37 ° C in aerobiose geïncubeerd en voor fecale coliformen worden ze 24 tot 48 uur bij 44 ° C geïncubeerd in aerobiose.

In beide gevallen wordt het als volgt geïnterpreteerd: de duistere buizen met gasproductie worden als positief beschouwd. Als er binnen 24 uur geen gasproductie is, blijft de incubatie tot 48 uur doorgaan.

Positieve EC -bouillons gaan naar de volledige bevestigende fase, die bestaat uit belonen in selectieve media zoals Mac Conkey, EMB of Endo Endo Agar.

Als de gebruikte bouillon wordt gewijzigd met novobiocine, worden de positieve buizen aanbevolen om te lijken in Mac Conkey Agar met Sorbitol.

QA

Kwaliteitscontrole moet worden uitgevoerd vanaf elke voorbereide medium batch. In de eerste plaats moet de steriliteit van de omgeving. In die zin worden een of twee bouillons zonder inoculeren in aerobiose gedurende 24 uur bij 37 ° C geïncubeerd. Het verwachte resultaat is een transparante bouillon, zonder troebelheid of kleurverandering.

Kan u van dienst zijn: interspecifieke competentie: kenmerken en voorbeelden

Ten tweede moet de groei van bekende stammen worden geëvalueerd, hiervoor kunt u de volgende bacteriën gebruiken: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella Typhimurium ATCC 14028.

In alle gevallen wordt een bevredigende microbiële ontwikkeling verwacht, waarbij een bewolkte bouillon met gasproductie voor wordt waargenomen EN. coli en zonder gas voor Salmonella.

Andere stammen die in de controle kunnen worden opgenomen, zijn: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Deze stammen moeten volledig worden geremd.

aanbevelingen

-De plaatsing van de Durham -buizen is onmisbaar voor de studie van coliformen.

-Verdeel het medium in de testbuizen voor het steriliseren, nooit daarna.

-Gebruik niet als het medium meer dan 3 maanden heeft voorbereid.

-Gebruik niet als een verandering van de gebruikelijke kenmerken van het medium wordt waargenomen.

Referenties

1. Britania Laboratories. Middle EC. 2015. Beschikbaar op: Britanialab.com
2. EN. coli Enterohemorragisch. Het Centrum voor voedselzekerheid en volksgezondheid. 2010. Beschikbaar op: CFSPH.agastaat.Edu
3. Corporation Neogen. Gemiddelde EC. Beschikbaar op: Foodsafety.Neogen.com
4. Neogen. Medified EC gemodificeerd met novobiocina. Beschikbaar op: Foodsafety.Neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, door Castillo M. Detectie, isolatie en karakterisering van Escherichia coli Shiga -toxineproducent van vers gemalen vlees van Butchers of Concepción, provincie Tucumán. Rev Arg van Microbiol; 2010, 42 (4): 284-287.  Beschikbaar op: www.Scielo.borg.