Sabouraud agar wat is, stichting, voorbereiding, gebruik

Hij Sabouraud agar, Ook bekend als Sabouraud Dextrose Agar, is het een solide kweekmedium, vooral verrijkt voor de isolatie en ontwikkeling van schimmels, zoals gisten, schimmels en dermatofyten.

Daarom kan dit medium niet ontbreken in een laboratorium voor microbiologie om de aanwezigheid van pathogene of opportunistische schimmels te onderzoeken, hetzij van klinische of niet -klinische monsters. Het is ook ideaal voor de groei van filamenteuze bacteriën zoals Streptomices en Nocardias. Het gebruik ervan is erg breed, omdat het kan worden gebruikt in menselijke, dierlijke, groente en industriële mycologie.

NAAR. Sabouraud agar zonder zeug. B. Sabouraud Agar geplant met gist. Bron: foto's gemaakt door auteur MSC. Marielsa Gil

Dit medium werd in 1896 opgericht door de uitstekende dermatoloog Raimond Sabouraud, die een gespecialiseerde wereldwijd werd erkend in hoofdhuidaandoeningen, voornamelijk veroorzaakt door dermatofytes.

De creatie ervan was zo belangrijk dat het sindsdien is gebruikt en wordt vandaag gehandhaafd, hoewel met enkele wijzigingen.

Hoewel het speciaal is voor schimmels, kan in dit medium bacteriën groeien, daarom is voor monsters met gemengde flora de opname van antibiotica in zijn bereiding vereist en remmen dus de groei van de bacteriële flora die aanwezig kan zijn.

De keuze van het antibioticum moet zorgvuldig worden uitgevoerd en rekening houden.

Basis

Sabouraud Dextrose Agar is een middel dat in zijn oorspronkelijke formulering zwak selectief is, vanwege de 5 zure pH.6 ± 0.2 kunnen echter bacteriën worden ontwikkeld, voornamelijk in langdurige incubaties.

Het medium bevat pancreascaseïne en digreatweefselpepton van dierweefsel, die de bron van koolstof en stikstof bieden voor de ontwikkeling van micro -organismen.

Het bevat ook een hoge glucoseconcentratie, die fungeert als een energiebron die de groei van schimmels boven bacteriën bevordert. Dit alles vermengd met agar -agar, component die u de juiste consistentie geeft.

Aan de andere kant kan Sabouraud Dextrose Agar selectief zijn als antibiotica worden toegevoegd.

Met antibiotica is het vooral nuttig in wondmonsters, open zweren of een monster waarin grote bacteriële besmetting wordt vermoed.

De meeste gebruikte combinaties van Sabouraud Dextrose met antibiotica

-Sabouraud Agar met chlooramfenicol: ideaal voor het herstellen van gisten en filamenteuze schimmels.

-Sabouraud Agar met gentamycine en chlooramfenicol: bijna alle filamenteuze schimmels en gisten groeien in dit medium en remt een groot aantal bacteriën, waaronder Enterobacteria, Pseudomonas en Staphylococcus.

-Sabouraud Agar met cycloheximide: het is vooral handig voor monsters van huid of luchtwegen, zolang het vermoeden van dimorfe schimmels is.

Cycloheximide moet voorzichtig worden gebruikt; Hoewel het wordt gebruikt om de groei van niet -pathogene of milieuschimmels en gisten die mogelijk als verontreinigende stoffen in een monster aanwezig zijn, te remmen, remt het ook de groei van sommige schimmels zoals Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Boydii Allescheria, Penicillium SP en Andere opportunistische schimmels.

-Sabouraud Agar met chlooramfenicol plus cycloheximide: het wordt voornamelijk gebruikt om dermatofyten en dimorfe schimmels te isoleren. Heeft het ongemak dat sommige soorten opportunistische schimmels remt, zoals Candida geen albicans, Aspergillus, zigomicetos of c. Neoformans.

-Sabouraud Agar met chlooramfenicol, streptomycine, penicilline G en cycloheximide: het is ideaal voor extreem verontreinigde monsters met bacteriën en saprofyten -schimmels, maar het heeft het ongemak om de groei van de groei van te remmen Actinomyces en Nocardias, Naast de hierboven genoemde opportunistische schimmels.

Kan u van dienst zijn: aspectenproces: kenmerken en fasen

Voorbereiding

Als ze afzonderlijke ingrediënten hebben, kan dit als volgt worden bereid:

Sabouraud Dextrose 

Wegen:

- 40 gr van dextrose

- 10 gr van pepton

- 15 gr van agar -agar

- Meet 1000 ml gedestilleerd water

Alle ingrediënten zijn gemengd, pH wordt aangepast aan 5.6. De opgeloste stoffen worden opgelost door te koken, 20 ml van het medium wordt verdeeld in buizen van 25 x 150 mm, zonder bij voorkeur vast te houden en met katoenen deksel.

Buizen met katoenen deksel. Bron: Foto gemaakt door de MSC -auteur. Marielsa Gil

Andere buismaatregelen kunnen ook worden gebruikt, volgens beschikbaarheid.

Ze nemen de autoclaaf gedurende 10 minuten naar een atmosfeer van druk (121 ° C). Het moet niet worden overschreden in de geautoclaveerde tijd. Bij het verlaten van de autoclaaf zijn de buizen geneigd met behulp van een ondersteuning totdat ze in een fluitpiek stollen.

Een andere manier is om de ingrediënten op te lossen door te verwarmen totdat deze kookt. In dezelfde Autoclavic Felola gedurende 10 minuten en distribueer vervolgens 20 ml in petrischalen.

Als er een Sabouraud Dextrose -medium beschikbaar is dat al alle ingrediënten bevat, is de hoeveelheid die door het commerciële huis is gespecificeerd voor een liter water gespecificeerd. De rest van de stappen is gelijk aan die hierboven beschreven.

Sabouraud Dextrose Agar (Emmons Modificatie)

Wegen:

-  20 gr van dextrose

- 10 gr van pepton

-  17 gr van agar -agar

-  Meet 1000 ml gedestilleerd water

Alle ingrediënten zijn gemengd, pH wordt aangepast aan 6.9. Ga op dezelfde manier van de vorige zaak.

Er zijn commerciële huizen die het medium aanbieden met alle ingrediënten. Weeg in dit geval de manier waarop het insert het beschrijft.

Sabouraud Dextrose Agar (Emmons Modificatie) met chlooramfenicol

Chloranfenicol Moederoplossing

- Weeg 500 mg chlooramfenicolbasis

- Meet 100 ml 95% ethanol

- Mengen

Het Sabouraud Dextrose Medium (Emmons) wordt bereid zoals reeds beschreven en bovendien voor elke liter van het toevoegen van 10 ml chloranfenicol moederoplossing vóór Autoclavic.

Sabouraud emmons met cycloheximide dextrose

Cycloheximide moederoplossing

- Weeg 5 gr van cycloheximide

- Meet 100 ml aceton

- Mengen

De Sabouraud Dextrose Apoure.

Sabouraud Dextrose Agar (Emmons) met chlooramfenicol en cycloheximide

Het Sabouraud Dextrose Medium (Emmons) wordt bereid zoals reeds beschreven en bovendien voor elke liter van het toevoegen van 10 ml chloranfenicol moederoplossing en 10 ml cycloheximide moederoplossing vóór geautoclaveerde.

Kan u van dienst zijn: Wetenschappen die gerelateerd zijn aan de biologie

Andere antibiotica die kunnen worden toegevoegd

twintig.000 tot 60.000 penicilline -eenheden per liter medium.

30 mg streptomycine per liter medium.

Beide moeten worden opgenomen na het medium, enigszins afgekoeld (50-55 ° C).

0,04 g neomycine per liter medium.

0.04 g gentamicine per liter medium.

Speciale overwegingen

Veiligheid heeft de voorkeur om Sabouraud dextrose -agar in wig -vormige buizen (hellend in een fluitpiek) te zaaien in plaats van in petrischalen, om de dispersie en inademing van sporen te voorkomen.

Het is belangrijk dat de buizen met Sabouraud -leeftijden bedekt zijn met katoen en niet met een draaddeksel, omdat is aangetoond dat semi -aerobe omstandigheden de vorming van sporen in sommige stammen remmen, bijvoorbeeld Coccidioides immitis. Bovendien zijn de meeste schimmels aerobes.

In het geval van het gebruik van een draaddeksel, niet strak gesloten.

QA

De voorbereide media moeten kwaliteitscontrole worden gemaakt om hun juiste functioneren te verifiëren. Hiervoor worden bepaalde stammen gezaaid.

Voor Sabouraud Dextrose Candida albicans, wat een uitstekende groei moet hebben. Een andere plaat wordt geïnoculeerd met stammen Van Escherichia coli, moet volledig worden geremd.

Een plaque zonder inoculeren wordt ook geïncubeerd waarin geen micro -organisme zou moeten groeien.

Voor Sabouraud Dextrose Agar met chlooramfenicol en cycloheximide  Trichophyton mentagrofytes, moet zich goed ontwikkelen. Een andere plaat wordt geïnoculeerd met een spanning van Aspergillus flavus, waarin er schaarse groei of niet -groei moet zijn. Bovendien wordt een niet -locerende plaque geïncubeerd om zijn steriliteit aan te tonen.

Voor Sabouraud Dextrose met cycloheximide, stammen van Candida albicans, Trichophyton rubrum  of Canis Microsporum, wat een goede groei moet aantonen.

Evenzo een spanning van Aspergillus flavus, het aantonen van schaarse groei of niet -groei. Incubeer een plaat eindelijk zonder inoculeren voor steriliteitscontrole.

Toepassingen

Primaire teelt

Klassieke Sabouraud Dextrose Agar bevat 4 gr van dextrose en is uitstekend als een primair isolatiemiddel, omdat het de karakteristieke morfologie van elke schimmel toont.

Het is ook uitstekend voor het demonstreren van pigmentenproductie. Het is echter niet de meest geschikte middelen om sporulatie te observeren.

Het wordt ook niet aanbevolen om te cultiveren Blastomyces dermatitidis, die wordt geremd door de hoge concentratie van huidige glucose.

Aan de andere kant moeten bepaalde overwegingen in gedachten worden gehouden.

Sommige schimmels ontwikkelen zich beter bij kamertemperatuur, zoals schimmels, anderen ontwikkelen zich succesvol bij 37 ° C, zoals sommige gisten, en andere kunnen zich ontwikkelen bij beide temperaturen (dimorfe schimmels).

Daarom is het soms nodig.

Bijvoorbeeld, Sporothrix schenckii Het wordt gezaaid op twee platen; De ene is incuba bij kamertemperatuur om de schimmelfase te verkrijgen en de andere wordt geïncubeerd bij 37 ° C om de uppaduriforme fase te verkrijgen, maar in het laatste is het noodzakelijk om 5% bloed aan het milieu toe te voegen.

Het kan u van dienst zijn: Oxidaseglucose: kenmerken, structuur, functies

In andere gevallen, net als in mythom -monsters, worden twee Sabouraud -agarplaten gezaaid, één met chlooramfenicol en een andere met cycloheximide. De eerste zal de groei van de causale middelen van het mythoma van mythische oorsprong (eumicetoom) en de tweede causale middelen van micetomen van bacteriële oorsprong, zoals actinomicetomas, mogelijk maken.

Sporulatie

De Sabouraud Dextrose Agar gemodificeerd door Emmons bevat 2 gr van dextrose en dient niet alleen voor isolatie, maar ook voor de sporulatie en het behoud van schimmels.

In dit medium als u spanningen kunt herstellen Blastomyces dermatitidis.

Behoud

Om schimmelsgewassen te behouden, kunnen ze worden opgeslagen in de koelkast (2-8 ° C). Conservatietijd kan variëren tussen 2 en 8 weken. Na deze tijd moeten ze subjectief zijn om het proces te herhalen.

Sommige schimmels blijven beter bij kamertemperatuur, zoals Epidermophyton Foccosum, Trichophyton Schoenleinnii, T. Violaceum En Microsporum audouii.

Het onderhoud van de spanning kan worden uitgebreid om pleomorfisme te voorkomen als de dextrose van de agar volledig wordt geëlimineerd en als de hoeveelheid agar naar de omgeving wordt verminderd om droog te voorkomen.

Microculturen

Voor de identificatie van sommige filamenteuze schimmels is het noodzakelijk om microculturen uit te voeren met behulp van Sabouraud Agar of andere speciale middelen om seksuele en aseksuele reproductiestructuren te observeren.

In menselijke mycologie

Het wordt voornamelijk gebruikt voor de diagnose van schimmelziekten, vooral die welke de huid en de bijlagen ervan beïnvloeden (haar en nagels).

Monsters kunnen afscheidingen, exsudaten, huid, haren, nagels, sputum, LC of urine zijn. Algemeen geïsoleerde pathogenen zijn dermatofyten, schimmels die onderhuidse en systemische mycose veroorzaken.

Dierlijke mycologie

Dieren worden vaak getroffen door schimmelinfecties, daarom is Sabouraud Agar net zo nuttig in dierlijke mycologie als in de mens.

Dermatophytes kunnen bijvoorbeeld dieren beïnvloeden. Dat is het geval van Canis var distortum microsporum, Dat infecteert vaak honden, katten, paarden, varkens en apen. In aanvulling, Microsporum gipseum Infecteert honden, katten en vee.

Vogels zoals kippen, hanen en kippen worden getroffen door Microsporum Gallinae.

Andere schimmels, zoals Zymonema farciminosum, Ze zijn ook oorzaak van ziekten bij dieren, voornamelijk bij paarden, muilezels en ezels, die een belangrijke ontsteking produceren in lymfevaten.

Sporothrix schenkii en histoplasma capsulatum Ze beïnvloeden huishoudelijke en menselijke dieren.

Milieu -mycologie

Veel pathogene of opportunistische schimmels kunnen zich op een bepaald tijdstip in een bepaalde omgeving concentreren, vooral in operatiekamers en intensive care -eenheden (ICU) van klinieken en ziekenhuizen. Daarom is het noodzakelijk om hetzelfde te beheersen.

Andere kwetsbare ruimtes zijn oude bibliotheken en gebouwen, die kunnen worden beïnvloed door de concentratie van milieuschimmels.

In milieustudies wordt Sabouraud Dextrose Agar voor schimmelsisolatie gebruikt.

Industriële mycologie

Sabouraud Dextrose Agar kan niet ontbreken voor de studie van vervuilende schimmels bij de productie van cosmetica, eten, drinken, leer, textiel, onder andere.

Plant mycologie

Planten lijden ook aan schimmelsziekten, die verschillende delen van de plant beïnvloeden, die zelfs de oogst kunnen beëindigen, waardoor grote verliezen in de landbouw veroorzaken.

Referenties

1. Valtek -laboratorium. (2009). Sabouraud dextrose agar met cycloheximida. Beschikbaar bij: Andinamedica.com.
2. Navarro of. (2013). Veterinaire mycologie. Nationale agrarische universiteit. Nicaragua.