Hektoen Foundation, voorbereiding en gebruik

Hij Haktoen Agar o Agar Hektoen enteric is een solide, selectieve en differentiële kweekmedium. Het werd opgericht in het Hektoen Institute door King en Metzger voor de isolatie van enteropathogene bacteriën van de Shigella en Salmonella -genres.

Het medium bestaat uit peptoneiwit, gistextract, galzouten, lactose, sucrose, salicine, natriumthiosulfaat, natriumchloride, ijzercitraat, ammoniumcitraat, bromool blauw, zuur fuchsine en agar en agar en agar en agar. Deze formulering maakt het mogelijk om de Shigella- en Salmonella -genres te differentiëren van de rest van de bacteriën die in dit medium kunnen groeien.

NAAR. Hektoen virgen b ague b. Haktoen Agar gezaaid. Bron: Flickr.com/de originele uploader was Philippinjl bij Franse Wikipedia. [CC BY-SA 2.0 fr (https: // creativeCommons.Org/licenties/by-sa/2.0/fr/akte.in)]

Hoewel er andere media zijn met dezelfde functie als Hektoen Agar, heeft dit een groter voordeel in vergelijking met andere media, vooral wanneer ze soorten Shigella willen herstellen.

De soort van beide geslachten produceert ernstige gastro -intestinale problemen in de mens als gevolg van de consumptie van besmet voedsel; Daarom is de transmissie fecaal - mondeling. Dat is de reden waarom het gebruik van Hektoen Agar voornamelijk wordt aangegeven in de microbiologische analyse van ontlasting en voedselmonsters.

[TOC]

Basis

Hektoen Agar bevat peptones en gistextract als een bron van voedingsstoffen, die de essentiële elementen voor microbiële ontwikkeling bieden.

Het heeft echter ook galzouten die de groei van sommige bacteriën remmen, vooral gram positief en sommige gram negatief. Het is om deze reden dat het als een selectief medium wordt beschouwd.

Aan de andere kant is Hektoen Agar een differentiaal medium. Deze eigenschap wordt verleend door de aanwezigheid van fermenteerbare koolhydraten zoals lactose, tekenen en salicyine, naast het pH -indicatorsysteem, vertegenwoordigd door bromotimol blauw en zuur fuchsin.

Kan u van dienst zijn: Sismonetia

Alle bacteriën die in dit medium kunnen groeien die niet tot het geslacht behoren dat Salmonella en Shigella zalm of oranje kolonies ontwikkelen, behalve het geslacht Proteus. Dit komt door de fermentatie van een of meer van de aanwezige koolhydraten, die het medium verzendt, waardoor de pH -indicator draait.

Aan de andere kant zijn het geslacht Shigella en Salmonella niet in staat om een ​​van de aanwezige koolhydraten te fermenteren, met alleen peptones als een energiebron, die het medium alkaliseert en daarom zijn hun kolonies groen-blauw.

Ook in dit medium kunnen bacteriën in dit medium waterstofsulfide (kleurloos gas) worden onderscheiden. Natriumthiosulfaat werkt als een sulfidebron, terwijl ijzercitraat het onthullende middel is. Beide verbindingen maken de vorming van een zwart neerslag van ijzersulfide mogelijk dat de reactie toont.

Het zwarte neerslag in het midden van de kolonie met een transparante halo rond geeft een verschijning van visoog. Deze functie suggereert de aanwezigheid van het Salmonella -genre.

Ten slotte handhaaft natriumchloride de osmotische balans en biedt de agar solide consistentie voor de omgeving.

Voorbereiding

Weeg 76 gr van uitgedroogd medium en lost op in een liter gedestilleerd water. Bekijk het mengsel en vertrek dan 10 tot 15 minuten in rust. Het kan worden verwarmd en koken, waardoor roterende bewegingen worden gegeven tot de totale ontbinding. Dit medium wordt niet gesteriliseerd in Autoclave.

Wanneer het medium een ​​geschatte temperatuur van 45 ° C bereikt, wordt een volume van 20 ml in petri -steriele platen direct gegoten.

Kan u van dienst zijn: populatiedynamiek

De agar is gestold. Op dat moment zijn ze al klaar voor gebruik. Het is raadzaam om ze onmiddellijk te gebruiken. Zo niet mogelijk worden ze in de koelkast gehouden tot hun gebruik.

De platen moeten vooraf van de koelkast worden verwijderd voordat ze worden gezaaid om de omgevingstemperatuur te nemen.

De middelgrote pH moet 7,5 ± 0,2 zijn. De kleur van het uitgedroogde medium is paars en voorbereide kleur is bruin groen.

Gebruik

Het gebruik van Hektoen Agar wordt aanbevolen voor het zoeken naar bacteriën van het geslacht Shigella en Salmonella in voedsel- en voedselmonsters.

De mogelijkheid om deze bacteriën te isoleren is aanzienlijk verhoogd als het monster in speciale bouillons eerder is verrijkt.

Het inoculum moet sterk zijn en het planten wordt gedaan door stress. De platen worden 24 tot 48 uur bij 37 ° C geïncubeerd in aerobiose.

Incubatie gedurende 48 uur wordt aanbevolen omdat de kenmerken van de kolonies op dit moment duidelijker zijn voor interpretatie en differentiatie.

QA

Om kwaliteitscontrole uit te voeren voor dit medium, worden gecertificeerde bacteriestammen gebruikt, zoals: Salmonella Typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 en Shigella sonnei ATCC 25931.

De verwachte resultaten zijn als volgt: Salmonella typhimurium en  Salmonella enteritidis Ze moeten groene - blauwachtige kolonies ontwikkelen met of zonder zwart centrum. Terwijl Shigella -soorten zullen groeien als groen - blauwachtige kolonies.

U kunt ook stammen opnemen Escherichia coli ATCC 29212, Proteus Mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 en Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Kan u van dienst zijn: lactosado -bouillon

In deze gevallen zijn de waargenomen kenmerken de volgende: EN. coli En K. longontsteking Ze zullen zich ontwikkelen in deze middelgrote kolonies kleur zalm tot oranje, met een neerslag van dezelfde kleur in de buurt. Terwijl Proteus blauwgroene kolonies zal ontwikkelen met of zonder zwart centrum.

Terwijl S. aureus En  EN. Faecalis Ze moeten soms worden geremd EN. Faecalis slaagt erin om te groeien als gele, zeer kleine kolonies.

Aan de andere kant, omdat dit medium niet wordt gesteriliseerd in autoclaaf, is het belangrijk om de steriliteit van het medium te evalueren. Daarom moeten ze vanaf elk voorbereide perceel van één tot twee platen worden geïncubeerd zonder 37 ° C gedurende 24 uur in aerobiose te inoculeren.

Uiteraard wordt er geen groei op de plaat verwacht.

Beperkingen

-Proteus -soorten kunnen zich in dit medium ontwikkelen en de kenmerken van hun kolonies kunnen worden verward met Salmonella of Shigella -soorten. Om deze reden moet elke verdachte kolonie worden bevestigd met biochemische tests.

-Het is noodzakelijk om het gebruik van dit medium te begeleiden met andere minder selectieve leeftijden, want als het gezochte micro -organisme zich in lage concentraties bevindt, zou het zich niet kunnen ontwikkelen in dit medium.

-Wees niet oververhit tijdens de voorbereiding, omdat overmatige hitte de samenstelling van de omgeving verandert.

-Ongewoon kolonies van lactose fermenterende salmonella kunnen verschijnen die onopgemerkt kunnen blijven.

Referenties

1. Wikipedia -bijdragers. Hektoen Entertreric Agar. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 13 maart 2019, 23:38 UTC. VERKRIJGBAAR BIJ: .Wikipedia.Org/ Accessed 16 maart 2019.
2. BD Laboratories. BD HEKTOEN ENDERRISCHE GANG (HE GANK). 2013. Beschikbaar op: BD.com
3. Britania Laboratories. Hektoen entérico agar. 2015. Beschikbaar op: Britanialab.com
4. Diffco Laboratories Francisco Soria Melguizo. Haktoen Agar. Beschikbaar op: F-Soria.is
5. DIFCO & BBL HANDLEIDING, HEKTOEN ENDERRISCHE AGAR. 2e editie. Beschikbaar in: BD.com/Europa