Agar Count Standard Foundation, voorbereiding en gebruik

Hij agarstandaard Het is een solide, niet -selectief kweekmedium, ontworpen voor de kwantificering van de aerobe microbiële belasting aanwezig in consumentenwateren, afvalwater, zuiveldranken, onder andere voedingsmiddelen. Dit medium staat ook bekend als PCA Agar) voor zijn acroniem in Engelse plaattelling Agar. Het werd in 1953 gemaakt door Buchbinder, Baris en Goldstein.

Het standaard accountmedium bestaat uit gistextract, tripteine, glucose, agar en gedestilleerd water. Deze formulering bevat voedingsbasiselementen waarmee de ontwikkeling van de huidige, VN die aerobe microbiële belasting eisen.

Decimale verdunningen voor de standaardtelling van de UFC -telling. Bron: Quentin Geissmann [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licenties/by-sa/3.0)]

Aangezien het medium geen remmers bevat, kunnen bacteriën zich zonder enige beperkingen ontwikkelen, dus het is ideaal voor de algemene kolonies tellen. De plaquekwantificatietechniek zal echter niet alle aanwezige bacteriën detecteren, maar alleen die welke kunnen groeien onder de omgevingsomstandigheden waaraan de agar is onderworpen.

In deze zin wordt de plaquekwantificatietechniek meestal bepaald door de hoeveelheid aerobe mesofiele bacteriën, dat wil zeggen die zijn ontwikkeld in temperaturen tussen 25 en 40 ° C, met een optimale groeitemperatuur bij 37 ° C.

Deze bacteriegroep is erg belangrijk, omdat er de meeste pathogene bacteriën voor de mens zijn.

Opgemerkt moet worden dat de rente soms de hoeveelheid psychrofiele bacteriën in voedsel kwantificeert. Deze bacteriën zijn die die zich bij lage temperaturen ontwikkelen (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Evenzo kunnen thermofiele bacteriën, die zich ontwikkelen in een bereik tussen 50 ° C bij 80 ° C of meer, belangrijk zijn in bepaalde soorten voedingsmiddelen zoals ingeblikte.

Microbiële kwantificering wordt uitgedrukt in dikke darmvormende eenheden (UFC) per gram of monstermilliliter.

[TOC]

Basis

Het standaardaccount is ontworpen om de bevredigende ontwikkeling van niet -voorthoudende aerobe bacteriën mogelijk te maken, omdat gistextract, tripteine ​​en glucose de nodige voedingsstoffen bieden voor een goede microbiële ontwikkeling.

Het kan u van dienst zijn: Alizarina: Kenmerken, voorbereiding, gebruik en toxiciteit

Aan de andere kant heeft het medium een ​​lichte kleur en een transparant uiterlijk, dus het is ideaal voor de visualisatie van de kolonies ontwikkeld door de in -diepte gezaaide methode (plaatstiller).

Het is ook mogelijk dat kolonies tellen met de oppervlakte -geplante methode met Drigalski -spatel.

Wanneer de microbiële belasting hoog is, moeten decimale verdunningen van het onderzochte monster worden gemaakt om het UFC -aantal te kunnen uitvoeren.

Opgemerkt moet worden dat dit medium wordt aanbevolen door de American Public Health Association (APHA) voor de Aerobe Messophils Count.

Voorbereiding

Weeg 23,5 gr van het uitgedroogde medium en lost op in een liter gedestilleerd water. Om volledig op te lossen moet het mengsel worden verwarmd door regelmatig te zwaaien totdat het kookt. De volgende stappen zijn afhankelijk van de geplante techniek die zal worden gebruikt.

Voor de bord dumpingtechniek

Distribueren door 12 tot 15 ml in testbuizen te geven. Vervolgens steriliseerden in autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C. Laat verticaal stollen in de vorm van een taco. Bewaar tot gebruik.

Smelt de taco wanneer deze gaat worden gebruikt. Zodra u het in Maria kunt bewaren tot 44-47 ° C terwijl de monsters worden bereid.

Voor oppervlakte gezaaid

Steriliseer het medium in autoclaaf bij 121 ° C en distribueer vervolgens 20 ml in petri -steriele platen. Laat stollen, investeren en opslaan in de koelkast tot gebruik.

Temper de platen voordat u gebruikt. De middelgrote pH moet 7,0 ± 0,2 zijn.

Gebruik

Het standaardaccount wordt gebruikt in de aerobe mesofiele teltechniek tijdens de microbiologische analyse van water en voedsel. Het verslag van de aerobe mesophilos is noodzakelijk, omdat het de gezondheidskwaliteit van de onderzochte steekproef bepaalt.

De toepassing van deze techniek (met behulp van dit medium) maakt de macroscopische visualisatie van geïsoleerde kolonies voor kwantificering mogelijk.

Plaatafvoertechniek (gezaaid met diepte)

-Procedure

De techniek bestaat uit het volgende:

1) Homogenize het monster om de aanwezige bacteriën te herverdelen.

2) Een initiële suspensie wordt uitgevoerd in een steriele fles of zak, met respect voor de verhouding van 10 gr of 10 ml in 90 ml verdunningsmiddel (10^-1)).

Het kan u van dienst zijn: ficologie

3) Uit de initiële ophanging worden de relevante decimale verdunningen gemaakt, afhankelijk van het type monster. Ex: (10^-2, 10^-3, 10^-4)). Verdunningen worden uitgevoerd met Peptonada -water- of fosfaatbufferoplossing.

Voor deze^-2 enzovoort.

4) 1 ml van elke verdunning wordt genomen en op lege steriele petrieplaten geplaatst.

5) Voeg aan elke plaat 12 tot 15 ml agar eerder gesmolten toe en rustte op 44 - 47 ° C.

6) Geef zachte roterende bewegingen aan de platen om het monster naast de agar gelijkmatig te verdelen en te laten stollen.

7) Investeer de platen en incubeer 24 tot 48 uur bij 37 ° C in aerobiose.

8) culmineerde de tijd om de platen te onderzoeken en de koloniën te tellen in de verdunning die het toelaat. Die platen met tussen de 30 en 300 UFC worden gekozen voor het account.

De telling kan handmatig worden gemaakt of kan het Colony Accountant -team gebruiken.

De waarden die zijn toegestaan ​​door ML van monster kan variëren van het ene land tot het andere volgens de regels waarmee ze worden geregeerd.

-UFC -berekening

De algemene berekening wordt gedaan met behulp van de volgende formule:

Formule voor de algemene berekening van de UFC -kwantificering. Bron: National Drug Administration and Medical Technology (ANMAT). Microbiologische analyse van voedsel, officiële analytische methodologie, indicator micro -organismen. 2014 Deel 3. Beschikbaar op: Anmat.Gov.AR

Druk de resultaten uit in 1 of 2 cijfers en vermenigvuldigt zich met de juiste basis 10. Voorbeeld: als het resultaat 16 is.545 is afgerond op basis van het derde cijfer op 17.000 en zal als volgt worden uitgedrukt: 1,7 x 10⁴. Nu, als het resultaat 16 was.436 is afgerond op 16.000 en uitdrukt 1.6 x 10⁴.

Oppervlakte gezaaide techniek

-Procedure

-Inoculeer met 0,1 ml van het directe monster als het vloeistof is, initiële suspensie 10^-1 of van opeenvolgende verdunningen 10^-2, 10^-3 enz. in het midden van een standaard accountplaat.

Kan je dienen: flora en fauna van tamaulipas: meer representatieve soorten

-Verdeel het monster met Drigalski -spatel of glazen staaf in de vorm van L. Laat 10 minuten staan.

-Investeer de platen en incubeer in aerobiose bij 37 ° C gedurende 24 tot 48 uur.

-Ga verder met het tellen van de koloniën, kies die platen die zich in een bereik tussen 20 - 250 UFC bevinden.

-UFC -berekening

Voor de berekening wordt de verdunningsfactor toegepast, wat het omgekeerde is. Het aantal tot 2 significante cijfers is afgerond (afronding volgens het derde cijfer) en wordt uitgedrukt in basisvermogen 10. Als 224 UFC bijvoorbeeld zonder verdunning in het monster wordt geteld (10^-1), 22 x 10 wordt gerapporteerd¹  UFC, maar als het cijfer 225 was, wordt het gerapporteerd 23 x 10¹ UFC.

Nu, als 199 UFC wordt geteld in verdunning 10^-3, 20 x 10 zal worden gerapporteerd⁴ UFC, maar als 153 UFC in dezelfde verdunning wordt geteld, worden 15 x 10 gerapporteerd⁴ UFC.

QA

Het standaard accountmedium kan worden geëvalueerd met behulp van gecertificeerde bekende stammen, zoals: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

Als het kweekmedium in optimale omstandigheden verkeert, wordt in alle gevallen een bevredigende groei verwacht, met uitzondering van L. Fermentum dat kan regelmatig presteren.

Om de steriliteit van het kweekmedium te evalueren, moeten een of twee platen van elk bereide perceel (zonder inoculeren) bij 37 ° C in aerobiose gedurende 24 uur worden geïncubeerd. Na deze tijd mag geen groei of kleurverandering van het medium worden waargenomen.

Beperkingen

-Smelt de agar niet meer dan eens.

-Het voorbereide medium kan maximaal 3 maanden duren zolang het in een koelkast blijft en beschermd tegen licht.

-Dit medium is niet geschikt voor het eisen van micro -organismen of anaëroben.

Referenties

1. National Administration of Medicines Food and Medical Technology (ANMAT). Microbiologische analyse van voedsel, officiële analytische methodologie, indicator micro -organismen. 2014 Deel 3. Beschikbaar op: Anmat.Gov.AR
2. Diffco Laboratories Francisco Soria Melguizo, S.NAAR. Plaattelling agar. 2009. Beschikbaar op: http: // f-soria.is
3. Conda pronadisa laboratoria. Agar voor standaardmethoden (PCA) volgens APHA en ISO 4833. Beschikbaar bij: Condalab.com
4. Britania Laboratories. Agarplaattelling. 2015. Beschikbaar op: Britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B en Velázquez of. 2009. Technieken voor voedselmicrobiologische analyse. 2e ed. Faculteit Chemie, Unam. Mexico. Beschikbaar op: Depa.Fquim.UNAM