Ziehl-Neelsen-kleuring

Mycobacterium tuberculose gevisualiseerd met kleuring van Ziehl-Neelsen

Wat is de kleuring van Ziehl-Neelsen?

De Ziehl-Neelsen-kleuring In een kleurtechniek om resistente alcoholzure micro-organismen (AAR) te identificeren. De naam van deze microbiologieprocedure verwijst naar zijn auteurs: de bacterioloog Franz Ziehl en de patholoog Friedrich Neelsen.

Deze techniek is een differentieel kleurtype, dat het gebruik van verschillende kleurstoffen impliceert om contrast te creëren tussen de structuren die wilden observeren, differentiëren en vervolgens identificeren. De kleuring van Ziehl-Neelsen dient om bepaalde soorten micro-organismen te identificeren.

Sommige van deze micro -organismen zijn mycobacteriën (bijvoorbeeld, Mycobacterium tuberculose), Nocardias (bijvoorbeeld, Nocardie SP.) en enkele eencellige parasieten (bijvoorbeeld, Cryptosporidium parvum)). Veel van de bacteriën kunnen worden geclassificeerd door een gemeenschappelijke techniek die gramkleuring wordt genoemd.

Sommige bacteriegroepen hebben echter andere methoden nodig om ze te identificeren. Technieken zoals Ziehl-Neelsen-kleuring vereisen warmtecombinaties met warmte om de eerste op de celwand te repareren.

Dan komt een verkleuringsproces dat het mogelijk maakt om twee resultaten te verkrijgen: weerstand of gevoeligheid voor zuur- en alcoholen verkleuring.

Basis

De basis van deze kleurtechniek is gebaseerd op de eigenschappen van de celwand van deze micro -organismen. De wand wordt gevormd door een soort vetzuren die mycolzuren worden genoemd; Deze worden gekenmerkt door zeer lange ketens te presenteren.

Wanneer vetzuren zeer lange structuren hebben, kunnen deze de kleurstoffen gemakkelijker behouden. Sommige bacteriegenres zijn zeer moeilijk te verven door gramkleuring, vanwege het hoge gehalte aan mycolzuren uit de celwand.

In Ziehl-Neelsen-kleuring wordt de Fuchsin Carbol-fenolische verbinding gebruikt, een basisverf. Dit heeft de mogelijkheid om te interageren met de vetzuren van de celwand, die van Cerosa textuur is bij kamertemperatuur.

Kan u van dienst zijn: monosachariden

De kleuring met fuchsin carbol is verbeterd in aanwezigheid van warmte, omdat de was smelt en de kleurmoleculen sneller in de celwand bewegen.

Het zuur dat later wordt gebruikt, dient om de cellen die niet werden geverfd te verkleuren omdat hun wand niet gerelateerd was aan de kleurstof; Daarom is de kracht van het zuurzuur in staat om de zure kleurstof te elimineren. De cellen die deze verkleuring weerstaan, worden zuurbestendig genoemd.

Secundaire kleurstof

Na de verkleuring van het monster staat dit in contrast met een andere kleurstof genaamd secundaire kleurstof. Mustileo blauw of malachietgroen wordt over het algemeen gebruikt.

De secundaire kleurstof bevlekt het achtergrondmateriaal en creëert bijgevolg contrast met de structuren die in de eerste stap zijn geverfd. Alleen verkleurde cellen absorberen de tweede kleurstof (tegen-tinctie) en nemen hun kleur, terwijl zuurbestendige cellen de rode kleur behouden.

Deze procedure wordt vaak gebruikt voor de identificatie van Mycobacterium tuberculose En Mycobacterium leprae, die resistente zuur-alcohol bacillen worden genoemd.

Reagentia

Primaire kleurstof

0,3 % fuchsin carbol wordt gebruikt (gefilterd). Deze kleurstof wordt bereid uit een mengsel van alcoholen: ethanolfenol (90 %) of methanol (95 %), en in dit mengsel lost 3 gram basis fuchsin op.

Discoderende oplossing

In deze stap kunt u 3 % alcoholzuuroplossingen of 25 % zwavelzuur gebruiken.

Secundaire kleuren (tegenbanden)

De meest gebruikte kleurstof om in de monsters te contrasteren is meestal 0,3 % methyleenblauw. Anderen kunnen echter ook worden gebruikt, zoals 0,5 % malachite groen.

Kan u van dienst zijn: Timina

Techniek

Nematode weergegeven met Ziehl-Neelsen

Zuur-geopted kleuringsprocedure

Bereid een bacterieel uitstrijkje

Deze voorbereiding wordt gedaan op een schone en droge dia, volgens steriliteitsmaatregelen.

Frovis drogen

Laat het uitstrijkje drogen bij kamertemperatuur.

Verwarm het monster

Het monster moet worden verwarmd door brand aan te brengen op de onderstaande dia. Een fixatie met alcohol kan worden gemaakt wanneer de geur niet is bereid met sputum (behandeld met natriumhypochloriet om het te bleken) en als deze niet onmiddellijk zal worden geverfd.

M. tuberculose wordt geëlimineerd met bleekmiddel en tijdens het kleurproces. De thermofixatie van het niet -behandelde sputum zal niet doden M. tuberculose, Terwijl alcoholfixatie bactericide is.

Bedek de vlek

De vlek is bedekt met de fuchsin carbol -oplossing (primaire basiskleuring).

Verhit de vlek

Dit wordt 5 minuten gedaan. U zou een stoomdetachement moeten opmerken (ongeveer 60 ° C). Het is belangrijk om niet oververhit te raken en het monster te voorkomen.

Met betrekking tot de verwarming van de vlek moet u zeer voorzichtig zijn bij het verwarmen van de fuchsin -carbol, vooral als de kleuring wordt uitgevoerd op een dienblad of een andere container waarin zeer ontvlambare chemicaliën zijn verzameld van de vorige vorige kleuring.

Slechts een kleine vlam mag onder de dia's worden toegepast met behulp van een wattenstaafje dat eerder werd bevochtigd met een paar druppels zure alcohol, methanol of 70 % ethanol. Vermijd het gebruik van een groot wattenstaafje in ethanol, omdat dit een risico op brand is.

Was de vlek

Dit wassen moet worden gedaan met schoon water. Als het kraanwater niet schoon is, was het wrijven met gefilterd of gedestilleerd water, bij voorkeur.

Bedek het uitstrijkje met zure alcohol

Deze zure alcohol moet 3 % zijn. De dekking wordt 5 minuten uitgevoerd of totdat de geur voldoende is verkleurd, dat wil zeggen lichtroze.

Kan je van dienst zijn: epiblast

Er moet rekening mee worden gehouden dat zure alcohol ontvlambaar is; Daarom moet het zeer zorgvuldig worden gebruikt. Vermijd niet dicht bij ontstekingsbronnen.

Was de vlek

Was moet zijn met schoon, gedestilleerd water.

Bedek het uitstrijkje met kleurstof

Het kan malachietgroene kleur (0,5 %) of methyleenblauw (0,3 %) zijn gedurende 1 of 2 minuten, met behulp van de luidere tijd als de geur dun is.

Was de vlek

Schoon water (gedistilleerd) moet opnieuw worden gebruikt.

Aftappen

De achterkant van de schuif moet worden gereinigd en de vlek wordt op een afwateringsplank geplaatst, zodat deze in de lucht droogt (geen absorberend papier gebruikt om te drogen).

Onderzoek het uitstrijkje in de microscoop

Het doel van 100x en onderdompelingolie moet worden gebruikt. Scan het uitstrijk systematisch en schrijf de relevante observaties op.

Interpreteer de resultaten

Theoretisch worden micro -organismen die zijn geverfd door een roodachtige kleur beschouwd als positief alcoholzuur (AAR+).

Integendeel, als micro-organismen blauw of groen worden geverfd, afhankelijk van de kleurstof die wordt gebruikt als tegenbanden, worden ze beschouwd als negatief resistent zuur (AAR-).

Referenties

1. Apurba, s. & Sandhya, B. (2016). Essentials van praktische microbiologie (1e ed.)). Jaypee Brothers Medical Publishers.
2. Bauman, r. (2014). Microbiologie met deseoda's per lichaamssysteem (4e ed.)). Pearson Education, Inc.
3. Heritage, J., Evans, e. & Killington, een. (1996). Inleidende microbiologie (1e ed.)). Cambridge University Press.
4. Morello, J., Granato, p. Wilson, m. & Morton, v. (2006). Laboratoriumhandleiding en werkboek in microbiologie: toepassingen bij patiëntenzorg (11e ed.)). McGraw-Hill Education.
5. Vasanthakumari, r. (2007). Leerboek van microbiologie (1e ed.)). B.Je. Publicaties Pvt.