SIM Foundation, voorbereiding en gebruik

Hij SIM -medium Het is een semi -solide en differentiële agar, speciaal ontworpen om de identificatie van sommige bacteriën te helpen, voornamelijk uit de familie Enterobacteriaceae. Het bestaat uit tripteine, pepton, ijzersulfaat, ammoniumsulfaat, natriumthiosulfaat en agar.

Dit medium maakt de uitvoering van drie belangrijke tests mogelijk: de productie van waterstofsulfide (h₂S), de vorming van indol en motiliteit, van daar komt het acroniem sim. Vanwege het grote nut kan het niet ontbreken in een laboratorium voor bacteriologie.

NAAR. Middelste sim commerciële b. SIM H2S (-), Indol (-) en Motility (+) en SIM H2S (+), Indol (-), Motility (+) Test Test. Bron: a. Foto gemaakt door de auteur MSC. Marielsa Gil B. Mfloayza [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licenties/by-sa/3.0)]

In tegenstelling tot andere media, moet dit semi -oplosbaar zijn om het bewegingsvermogen te detecteren dat sommige bacteriën hebben. In die zin werkt deze test heel goed voor Enterobacteria, maar niet in niet -fermentaire negatieve bacillen, waar andere methoden de voorkeur hebben te gebruiken, zoals de lopende daling.

Het SIM -medium maakt het mogelijk om bepaalde specifieke eigenschappen te onderscheiden die sommige bacteriën karakteriseren in relatie tot andere. Bijvoorbeeld Escherichia coli wordt onderscheiden door H te zijn₂S (-), indol (+) en motiliteit (+), terwijl Proteus Mirabilis het is h₂S (+), Indol (-), Motility (+).

[TOC]

Basis

Het is een cultuur betekent die als differentieel worden beschouwd, omdat het gebruik ervan erin slaagt onderscheid te maken tussen de micro -organismen die in staat zijn om waterstofsulfide te produceren van degenen die dat niet doen; Het benadrukt ook degenen die indol vormen van de tryptofaan van degenen die zich niet vormen, en onderscheidt uiteindelijk de beweeglijke bacteriën van immobiel.

Krachtbron

Zoals elke cultuurstoestand heeft het elementen die de nodige voedingsstoffen bieden, zodat niet -vasthoudende micro -organismen kunnen ontwikkelen. Deze elementen worden vertegenwoordigd door peptones en Triptein.

De ontwikkeling van het micro -organisme in het milieu is essentieel om de aanwezigheid of afwezigheid van de kenmerken te observeren die dit betekent evalueert.

Waterstofsulfide -productie

De brief van het acroniem Sim verwijst naar de productie van waterstofsulfide (h₂S). Bacteriën die in staat zijn om waterstofsulfide te vormen, nemen natriumsulfaat aan.

Kan u van dienst zijn: intra -specifieke concurrentie: kenmerken, typen en voorbeelden

Zodra de H is gevormd₂S -gas kleurloos-, dit reageert met ijzerzout aanwezig in het midden, en vormt ferreus sulfide, duidelijk zichtbaar (zwart neerslag). De bacteriën die niet vormen h₂S, laat het originele kleurenmedium achter (beige).

De aanwezigheid van zwart neerslag kan de interpretatie van motiliteit belemmeren. Het is echter bekend dat de meeste ht -producerende enterobacteriën₂S zijn positieve motiliteit, zoals Salmonella, Proteus en Citrobacter. Bovendien suggereert het zwarte neerslag dat bijna het hele medium bedekt, positieve motiliteit.

Indolvorming

De tweede letter van het acroniem SIM is de "I", die de vorming van Indol vertegenwoordigt.

In die zin vervult Tripteine, naast het zijn van een bron van voedingsstoffen, een andere fundamentele functie. Dit pepton is rijk aan een aminozuur dat tryptofaan wordt genoemd, daarom kan het bacteriën tonen die triptofanase produceren.

Dit enzym heeft de leiding voor Clivar voor het triptofaanaminozuur, met de daaruit voortvloeiende vorming van indol (kleurloze substantie), pyruvinezuur en ammonium.

Daarom is het nodig om deze reactie te tonen. Een van de twee reageert met de indol, die een rood-fucsia-vormige ring vormt op het oppervlak van de agar. Als de Fuchsia -kleurring verschijnt, wordt de indoltest als positief geïnterpreteerd.

De bacteriën die dit enzym niet bezitten, zullen niet de ring vormen en worden geïnterpreteerd als een negatieve indoltest.

Het is belangrijk op te merken dat het indolbestendig de laatste moet zijn die moet worden geïnterpreteerd, omdat zodra het reagens is toegevoegd, het medium de visualisatie van motiliteit belemmert.

Beweeglijkheid

Ten slotte betekent de letter "M" van het woord sim motiliteit. Om motiliteit te evalueren, is dit medium strategisch semi-vaste stof, omdat dit kenmerk essentieel is om te observeren of er al dan niet bacteriële beweging is. De bacteriën met flagella zijn degenen die deze positieve test geven.

Kan u van dienst zijn: T -lymfocyten: structuur, functies, typen, rijping

Een positieve test zal worden aangetoond wanneer troebelheid wordt waargenomen, zowel in het initiële inoculum als rond dit. Terwijl niet -mobiele bacteriën zich alleen ontwikkelen op de eerste inoculumreis.

Voorbereiding

SIM -medium

Weeg 30 gr van uitgedroogd medium en lost op in een liter gedestilleerd water. Het mengsel blijft 5 minuten in rust en wordt vervolgens verwarmd tot het kookt, vaak roeren tot de volledige oplossing.

Verdeel het mengsel in testbuizen met katoenen deksel en autoclavaat gedurende 15 minuten bij 121 ° C. Verwijder het rek van autoclaafbuizen en laat het in een verticale positie stollen, zodat het medium in de vorm van een taco is.

Voor zijn behoud wordt het opgeslagen in de koelkast tot het gebruik. Het voorbereide medium moet een laatste pH van 7,3 ± 0,2 hebben.

Bij het inoculeren van het medium moet dit bij kamertemperatuur zijn. De kleur van het medium is beige.

Kovac's reagens

Meet 150 ml amyl of isoamyl of butylalcohol. (Gebruik een van de drie genoemde).

Los 10 gr van p-dimethylaminobenzaldehyde op. Voeg vervolgens langzaam 50 ml geconcentreerd zoutzuur toe.

Het reagens klaar voor gebruik is kleurloos of helder geel. Het moet in de barnsteenfles worden bewaard en in een koelkast worden opgeslagen. Gebruik niet als u een donkerbruine kleur neemt; Dat geeft aan dat het beschadigd is. Dit reagens heeft de voorkeur als het gaat om Enterobacteria.

Erlich reagens

Weeg 2 gr van p-dimethylaminobenzaldehyde en los op in 190 ml absolute ethylalcohol en meng langzaam met 40 ml geconcentreerd zoutzuurzuur. Houd het reagens van Kovac op dezelfde manier. Het reagens van Ehrlich wordt meer gebruikt voor niet -fermenteren en anaërobe bacteriën.

Toepassingen

Het SIM -medium wordt sterk gebruikt in bacteriologielaboratoria. Het heeft een voordeel dat drie essentiële kenmerken kunnen worden waargenomen bij de identificatie van Enterobacteria.

Kan u van dienst zijn: azijnzuurfermentatie: kenmerken, toepassingen, voorbeelden

Gezaaid

De juiste manier om dit medium te zaaien is het gebruik van de naald, waarmee een deel van de pure kolonie om te studeren wordt genomen en in het midden van het medium verticaal wordt ingebracht. Er moet een enkele uitval worden gedaan. De lekke band mag niet de onderkant van de buis bereiken, het juiste is om slechts twee derde partijen te dekken.

Het is niet raadzaam om het inoculum te herhalen, omdat dit valse interpretaties van positieve motiliteit kan uitvoeren. Het geïnoculeerde medium wordt 24 uur geïncubeerd in aerobiose bij 37 ° C.

Zodra de tijd voorbij is, wordt waargenomen of er een productie van H was of niet₂S en lees de motiliteit. Ten slotte wordt de indol onthuld, met 3 tot 4 druppels van het reagens van Ehrlich of Kovac, zachtjes gemengd en geïnterpreteerd.

Bron: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e ed. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR. Argentinië.

QA

Als steriliteitscontrole worden een of twee buizen zonder inoculeren in 37 ° C per 24 uur geïncubeerd. Verwacht wordt dat er na deze tijd geen groei- of kleurverandering is.

Als kwaliteitscontrole kunt u gecertificeerde bekende spanningen gebruiken, zoals: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella Typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

De verwachte resultaten zijn: Escherichia coli H₂S negatieve, indol en positieve motiliteit, Enterobacter aerogenes Alleen positieve motiliteit, Salmonella Typhimurium H₂S en positieve motiliteit, met negatieve indool. Proteus vulgaris Allemaal positief, zo lang als Klebsiella pneumoniae En Shigella sonnei Allemaal negatief.

Beperkingen

-Enkele stammen van Morganella morganii, Onder andere soorten kunnen in dit medium een ​​bruinachtig pigment produceren als gevolg van de melanineproductie, dit moet niet worden verward met het ferro sulfide -neerslag. Bij onervaren professionals kan deze situatie valse positieven genereren bij de interpretatie van de H -test₂S.

-Strikte aerobe bacteriën zullen alleen groeien op het oppervlak van de buis, wat de interpretatie van motiliteit belemmert.

Referenties

1. BD Laboratories. BBL SIM Medum. 2008. Beschikbaar op: BD.com
2. Neogen Laboratories. SIM Medum. Beschikbaar op: Foodsafety
3. Difco francisco soria melguizo. SIM Medum. 2009. Beschikbaar op: http: // f-soria.is
4. Brizuela-Lab Laboratory.  Gemiddelde sim. Beschikbaar in: .Brizuela-lab.com
5. Britania Laboratories. Gemiddelde sim. 2015. Beschikbaar bij: Studyres.Het is/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e ed. Pan -Amerikaanse redactionele s.NAAR. Argentinië.