Lactosado -bouillon

Lactated bouillons turbide. Bron: Foto gemaakt door de MSC -auteur. Marielsa Gil

Wat is Lactosado -bouillon?

Hij Lactosado -bouillon Het is een vloeibare cultuur, niet selectief, voornamelijk gebruikt als een middel voor pre-verrijking bij de isolatie van stammen van Salmonella, Uit de microbiologische analyse gemaakt van bewerkte voedingsmiddelen, zuivelproducten of water. Dit wordt aanbevolen door de International Commission on Microbiological Specifications for Foods (ICMPF).

Het medium bevat enzymatisch gelatine-, vlees- en lactose -extract, stoffen die nodig zijn voor bacteriegroei. Bovendien is lactose een fermenteerbaar koolhydraat, daarom kunnen sommige coliformen het ontvouwen met gasproductie.

Daarom wordt de lactosado -bouillon aanbevolen door de American Public Health Association (APHA) voor de vermoedelijke studie van totale en fecale coliforme bacteriën. Het wordt beschreven als een uitstekend alternatief om de laurilsulfaat -triptose -bouillon te vervangen in de standaardtechniek van het meest waarschijnlijke aantal (NMP), gebruikt voor de microbiologische analyse van voedselmonsters, melk en oppervlaktewateren, ondergrondse, recreatieve, binnenlandse en industriële residuen.

Basis

Voor de microbiologische analyse van sommige monsters is de passage van pre-verrijking essentieel om een ​​specifiek micro-organisme te herstellen dat mogelijk in een zeer lage hoeveelheid is of in niet-gunstige omstandigheden die de levensvatbaarheid ervan schenden of minimaliseren. 

Dat is het geval van droge en bewerkte voedingsmiddelen, mogelijk besmet met Salmonellas SP. In deze gevallen, als bacteriën aanwezig zijn, hebben ze tijdens het productproductieproces fysiek en chemisch misbruik gehad.

Op een zodanige manier dat micro -organismen worden blootgesteld aan nadelige factoren zoals uitdroging, blootstelling aan remmende of toxische producten, en de overlapping gegenereerd door de aanwezigheid van andere bacteriën in grotere hoeveelheid, onder andere.

In die zin heeft de lactosado -bouillon een reparatie -effect van de beschadigde structuren van het micro -organisme, waardoor deze zich herstelt en zich voortplant, zo kan het worden gedetecteerd dat deze kan worden gedetecteerd.

Evenzo heeft lactosado -bouillon het vermogen om remmende stoffen te verdunnen die de levensvatbaarheid ervan kunnen beïnvloeden, waardoor de ontwikkeling ervan mogelijk is. Bovendien is de voedingssamenstelling van de melkwegbouillon strategisch om de groei van te bevoordelen Salmonella SP Boven andere micro -organismen.

Kan u dienen: paleobiologie: geschiedenis, specialiteiten, ontdekkingen

Voor de laatste identificatie moet het subcultureel zijn tegenover andere definitieve culturen.

Aan de andere kant maakt de samenstelling van het medium ook mogelijk om lactose -fermentaire micro -organismen te detecteren die gas produceren.

Voorbereiding

Om een ​​liter lactosebouillon voor te bereiden, moet 13 gram van het gedehydrateerde medium worden gewogen en opgelost in 1.000 ml gedestilleerd water.

Om het oplossen van het medium in het water te helpen, kunt u de oplossing een beetje verwarmen, maar niet te veel.

Eenmaal homogeen, wordt de oplossing als volgt bereid: als de bouillon wordt gebruikt voor het zoeken naar coliformen, wordt een schok met testbuizen bereid, die een Durham -gistingsbuis wordt geïntroduceerd.

De buis van Durham is een zeer belangrijk detail, omdat het de vorming van gas, gegevens van grote waarde in de zoektocht naar coliformen mogelijk maakt.

Bereid de buizen, 10 ml van de lactosado -bouillon worden erin verdeeld, hoeveelheid die voldoende moet zijn om de hele Durham -buis te bedekken.

Als de lactosado-bouillon zal worden gebruikt als een pre-enrique bouillon, is het niet nodig om Durham Fermentation Tube te plaatsen. In dit geval is meer medium (225 ml) vereist, dat wordt geserveerd in 500 ml potten, brede mond en met thermisch resistente draadafdekking.

Vervolgens worden de buizen of flessen gedurende 15 minuten bij 121 ° C naar de autoclaaf gebracht.

Het medium moet op een laatste pH van 6 zijn.9 ± 0.2 tot 25 ° C.

De bouillons worden tot gebruik in de koelkast opgeslagen. Voordat ze worden gebruikt, moeten ze bij kamertemperatuur temperen.

Aan de andere kant kan lactosado -bouillon ook worden voorbereid in dubbele concentratie.

Kan je van dienst zijn: herpetologie: geschiedenis, collecties, herpetoloogfunctie

Sommige laboratoria voegen Brome toe. In dit geval heeft de bouillon een paarse kleur en als er gisting verandert in geel.

Toepassingen

In laboratoria van microbiologie wordt lactosado-bouillon veel gebruikt omdat het een relatief economisch medium is dat betrouwbare en snelle resultaten biedt (24-48 uur).

Het kan worden gebruikt voor de analyse van totale en fecale coliformen in water en voedsel, of als een pre-enrique bouillon voor Salmonella.

Vóór de verrijking

Pre-verrijking is een stap voorafgaand aan de verrijking van het monster, wat het herstel van genderbacteriën aanzienlijk verbetert Salmonella In bewerkte voedingsmiddelen.

Om dit te doen, wordt het monster van het vaste voedsel (25 gram) of vloeistof (25 ml) gezaaid in 225 ml lactosado -bouillon, waarbij 24 tot 48 uur wordt geïncubeerd. Vervolgens zal het subcultureel zijn in een medium verrijkt als een Selenito-bouillon Cistina of Tetrationato-bouillon. Ga dan naar Selective Media XLD en SS.

Totale en fecale coliforme analyse

Het is een uitstekend medium als indicator voor fecale besmetting.

Daarom is lactosado -bouillon ideaal voor de vermoedelijke fase van de coliforme studie volgens de meest waarschijnlijke getalmethode.

Voor monsters waarin een groot aantal coliformen wordt vermoed, zal een lagere hoeveelheid van hetzelfde (1 ml) worden geïnoculeerd, terwijl voor monsters waarin minder coliformen worden vermoed, meer bemonsteringsvolume wordt geïnoculeerd (10 ml).

Voor de analyse worden er 10 gemaakt^-1, 10^-2, 10^-3, Een 3-5 pijpbatterij vormen voor elke gebruikte concentratie.

Uit elke verdunning wordt hetzelfde volume gezaaid tot lactosado -bouillons.

De buizen worden 24 uur geïncubeerd. De bouillons die negatief zijn, worden 24 uur meer geïncubeerd.

Het kan je van dienst zijn: fauna en flora van de Peruaanse Zee

De interpretatie van de resultaten wordt gedaan door de observatie van twee kenmerken: de eerste is de aanwezigheid of afwezigheid van troebelheid, en omdat dit medium geen pH -indicator bevat, zal er geen kleurverandering zijn.

De tweede is gasproductie. Het gas wordt gemakkelijk bewezen in de Durham -buis, door het verschijnen van een of meerdere luchtbellen erin.

Het wordt als positief beschouwd als beide kenmerken worden waargenomen, dat wil zeggen troebelheid met gasproductie. Positieve buizen moeten worden afgewezen in bevestigingsmedia (2% heldere gal groene bouillon en EC -bouillon).

Medium -kwaliteitscontrole

• Bij de voorbereiding van het medium is het belangrijk om niet te vergeten de Durhams -buizen te plaatsen als het doel daarvan de studie van coliformen is.
• Verhit het medium niet voordat u het steriliseert.
• Distribueren in de testbuizen voor het steriliseren, nooit daarna.
• Gebruik niet als het medium meer dan 3 maanden heeft voorbereid.
• Gebruik niet als een verandering van de gebruikelijke kenmerken van het medium wordt waargenomen.
• Bij het voorbereiden van een lactosado -bouillon -batch moet je de kwaliteit bewijzen van dezelfde zaaiende stammen die bekend staan ​​als Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii En Klebsiella pneumoniae. Ze groeien erg goed, met gasproductie (positieve controle).
• Het kan ook omvatten Pseudomonas aeruginosa, Salmonella Typhimurium of Enterococcus faecalis, Ze groeien goed, maar zonder gasproductie (negatieve controle).
• Het moet in afwachting zijn dat de oorspronkelijke kleur van het gedehydrateerde medium beige is en die van het zeer duidelijke en transparante geel voorbereide medium. Als de verandering in kleur of uiterlijk wordt waargenomen, kan er hetzelfde achteruitgaan.

Referenties

1. Acevedo r., Severiche, c., Castillo, m. Milieubiologie en microbiologie. Universiteit van Cartagena, Colombia.
2. Conda pronadisa laboratoria. Lactose -bouillon dubbele concentratie (European Pharm).