Biuret Foundation, reagentia, procedure, gebruik

Hij Biuret Het is een reagens dat wordt gebruikt voor de bepaling van eiwitten met lange ketens en korte keten. Het wordt vooral gebruikt op het gebied van analytische chemie en uroanalyse om de concentratie van het totale serum-, plasma- en urine -eiwitten te onderzoeken.

Eiwitwaarden kunnen in bepaalde pathologieën worden verhoogd of verlaagd. Hipoproteinemie -foto's worden meestal gepresenteerd bij patiënten met nierziekte, bij ondervoede en bij patiënten met chronische infecties.

Chemische structuur van het complex gevormd in de positieve biuret -test van de biuretreactie. Bron: Yikrazuul [Public Domain]/Flickr

Terwijl hyperproteïnemie wordt waargenomen in pathologieën zoals multipel myeloom, systemische lupus erythematosus, bacteriële endocarditis, bacteriële meningitis, Waldenstrom macroglobulinemie, onder anderen, onder andere.

Aan de andere kant is de aanwezigheid van eiwitten in de urine te wijten aan albuminefiltratie door de nier. Dit is een pathologisch gedrag dat moet worden bestudeerd.

In deze zin is de biuret zeer nuttig, omdat het het mogelijk maakt om de aanwezigheid van serum -eiwitten, plasma, urine, onder vele andere monsters te kwantificeren.

Zelfs de biuret kan worden gebruikt om de aanwezigheid en concentratie van eiwitten in onbekende of onbekende samenstellingsmonsters te onderzoeken. Daarom wordt het veel gebruikt in het onderzoeksgebied.

Biuret -test is gebaseerd op het detecteren van peptidekoppelingen. De test wordt gegeven in alkalisch medium. Het monster moet ten minste twee peptidekoppelingen bevatten, zodat een kleurcomplex voor violette kracht kan worden gevormd. Het complex wordt gevormd door de vereniging van de links en het ion van koper.

[TOC]

Basis

Het biuretreagens bestaat uit kaliumhydroxide, cupric sulfaat en natrium- en kaliumtartrato. Natriumhydroxide wordt gebruikt om de omgeving te alkaliseren, omdat deze aandoening onmisbaar is om de reactie te laten optreden.

Stoffen die reageren met eiwitten is cupric sulfaat, terwijl natriumtartrato de functie heeft om geen koperhydroxidevorming toe te staan, die de neiging heeft te neerslachten en de reactie verstoort.

Kan u van dienst zijn: Gisting: geschiedenis, proces, typen, voorbeelden

Als er in het monster stoffen zijn met peptidebindingen (polypeptiden of eiwitten), zal de test positief geven.

Een reactie wordt als positief geïnterpreteerd wanneer de oplossing violet wordt. De kleur wordt geproduceerd door de vorming van een complex tussen ten minste twee peptidebindingen met de co-NH-groep en de huidige cupric-kationen.

Het Violet -complex kan op twee manieren worden gevormd: de ene is vanwege het verlies van protonen van de amide groepen die binden aan metaal (ruwend), en de andere door de vereniging van zuurstof- en stikstofelektronen die vrij zijn en binden met koper.

Deze reactie kan variëren in intensiteit en kleur, afhankelijk van het type eiwit.

De test kan kwalitatief of kwantitatief worden uitgevoerd. In de kwalitatieve vorm wordt het gerapporteerd als positief of negatief. Terwijl in de kwantitatieve vorm de concentratie kan worden gemeten met de spectrofotometrische methode.

De reactie wordt gelezen tussen 540-560 nm. Kleurintensiteit is recht evenredig met de concentratie van peptidekoppelingen in het monster.

Reagentia

-Natriumhydroxide (NaOH) met 20%

-1% pentahydraat cupric sulfaat (Cuo₄. 5h₂OF)

-Gemengd natrium en tetrahydraat kaliumtartrato (KNAC₄H₄OF₆· 4h₂OF)

Biuret -reagensstabiliteit

-Het moet in koeling worden bewaard.

Procedure

Techniek

-Plaats 100 µl van het monster of het patroon dat moet worden geanalyseerd in een testbuis.

-Voeg 2 ml natriumhydroxide toe.

-Mix erg goed.

-Voeg 5 ml biuret reagens toe.

-Meng en laat 25 minuten bij kamertemperatuur, dek af en bescherm tegen licht.

-Observeer de vorming of niet van kleur en meet spectofotometrisch.

Kalibratiecurve

Om de kalibratiecurve uit te voeren, kunt u Serum Bovine -albumine als patroon gebruiken. Er worden verschillende concentraties van gemaakt. Bijvoorbeeld 25, 50, 75, 100, 125 en 150%.

De reactie is gemonteerd met al deze bekende concentraties en de absorptie wordt gelezen tot een golflengte van 540 nm. Met de gegevens van de bekende concentraties en de absorberende metingen wordt de kalibratiecurve uitgevoerd.

Het kan u van dienst zijn: China's Flora and Fauna: Representative Soorten

In elke bepaling of veel bewerkte monsters is het raadzaam. Als kalibratiepatroon kunt u serumbovine-albumine 0,1-2 mg/ml gebruiken.

Metingen worden uitgevoerd in een spectrofotometer van 540 nm.

Lineariteit wordt vervuld tot een concentratie van 12 g/dl.

Interferentie

Stoffen die interfereren in de biuret -test

Hoewel het niet erg frequent is, moet worden opgemerkt dat tijdens de uitvoering van deze test sommige stoffen kunnen interfereren. De aanwezigheid van ammonium kan bijvoorbeeld de kleurvorming belemmeren.

Evenzo kunnen andere stoffen dezelfde golflengte absorberen, zoals bepaalde pigmenten.

Aan de andere kant kan een interferentie worden gegenereerd wanneer een andere stof dan het peptidekop een complex vormt met metaalzout. Voorbeeld: sommige koolhydraten en bepaalde lipiden.

In het geval dat het laat zien om een ​​soort neerslag te analyseren, moet het worden gefilterd of gecentrifugeerd voordat het de test wordt opgezet.

Stoffen die zich niet bemoeien met de biuret -test

De test wordt niet beïnvloed door de aanwezigheid van:

-Bilirubine tot een concentratie van 20 mg/dl.

-Hemoglobine tot een concentratie van 750 mg/dl.

-Dextran tot een concentratie van 30 g/l.

-Triglyceriden tot een concentratie van 4000 mg/dl.

Voordelen

-Het is een eenvoudige methode om uit te voeren.

-Het is een economische test.

-Het heeft een hoge eiwitspecificiteit.

-Weinig interferentie.

Nadelen

Het heeft weinig gevoeligheid om lage hoeveelheden eiwitten te detecteren. Het werk van Fuentes en medewerkers bevestigt dat de Biuret -testmethode een detectielimiet van 1 mg/ml heeft van eiwit en een kwantificatielimiet van 3 mg/ml.

Een ander onderzoek aan de Universiteit van Amazon meldt echter veel lagere waarden. De detectielimiet die de onderzoeksrapporten is 0,020 mg/ml en de kwantificatielimiet van 1.33 mg/ml.

Toepassingen

Biuret -reagens of test wordt gebruikt voor eiwitbepaling in klinische en niet -klinische monsters in routine- en onderzoekslaboratoria.

Kan u van dienst zijn: kenmerken van levende wezens

Pathologieën die studeren of afnemen Eiwitten

In veel pathologieën is het belangrijk om de concentratie van totale eiwitten in klinische monsters te bepalen, waardoor het hoog of verlaagd kan zijn.

Ze zijn verhoogd in:

-Multipel myeloom,

-Systemische lupus erythematosus,

-Bacteriële endocarditis,

-Bacteriële meningitis,

Onder andere WaldeStrom macroglobulinemie.

Het is verminderd in:

-Nierinsufficiëntie,

-Mensen met ernstige ondervoeding,

-Patiënten met chronische infecties, onder andere.

Klinische monsters

De meest voorkomende klinische monsters zijn serum, plasma en urine. De normale waarde van serum- of plasma -eiwitten is 6.0-8.8 gr/dl.

Eiwitconcentratie bij volwassenen bij volwassenen overschrijdt de figuur van 150 mg/24 -uur niet.

Normale waarde van urine/creatinine -eiwitindex in urine

Zuigelingen: < a 0,50 mg

Kinderen van 2 jaar en ouder: index: 0,20 mg

Volwassenen: < 0,2 mg

Niet -klinische monsters

De biuretreactie kan worden gebruikt voor vele soorten niet -klinische monsters, zoals zuivelproducten, antiofide sera of een onbekende stof waartoe de aanwezigheid van eiwitten wil onderzoeken om te onderzoeken.

Referenties

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez en. (2014). Fysiekchemische karakterisering en eiwitgehalte van vloeistofextracten van mangrove-ostrion (crassostrearizophorae). Cuban Journal of Chemistry, 26 (1), 66-74. Ontvangen op 26 juni 2019, van http: // scielo.Sled
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Functionele karakterisering van de amandel van mango -zaden (Mangifera geeft L aan.)) Ontwikkelingswetenschappenmagazine. 2015; 6 (1): 67-75
3. "Biuret." Wikipedia, gratis encyclopedie. 19 juni 2019, 16:37 UTC. 26 juni 2019, 22:18
4.  Fuentes F, Quispe I, García J. Biuret -methode standaardisatie om het totale eiwit te kwantificeren in multi -vurige antibotrope serum geproduceerd in het National Biological Products Center. Bol - Inst NAC Health 2012; 18 (11-12).  Beschikbaar op: Repository.INS.Gok.pe
5. Winer Laboratories. Totale eiwitten. Colorimetrische methode voor het bepalen van het totale serum- en plasma -eiwitten. Beschikbaar op: Wiener-Lab.com.AR