Müeller hinton agar wat is, foundation, voorbereiding, gebruik

Hij Müeller Hinton Agar Het is een vast, niet -selectief voedingsmedium, dat bestaat uit vleesinfusie, peptonzuur van caseïne, zetmeel, grip en gedestilleerd water. Dit medium zorgt voor een uitstekende microbiële ontwikkeling van de meest snelle groeibacteriën.

Het werd oorspronkelijk gemaakt door John Howard Müeller en Jane Hinton om veeleisende bacteriën te isoleren vanuit voedingsoogpunt, zoals zoals Neisseria gonorrhoeae En Neisseria meningitidis. Vanwege de kenmerken bleek het echter ideaal te zijn voor de studie van de gevoeligheid voor antibiotica, waardoor betrouwbare en reproduceerbare resultaten worden geboden.

Daarom is de Müeller Hinton Agar het kweekmedium dat wordt geaccepteerd door het Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) en het Europees Comité voor antimicrobiële gevoeligheidstests, voor de uitvoering van de antimicrobiële gevoeligheidstest door de Kirby -verspreidingsmethode en bauerverspreiding en bauerverspreiding en bauerverdeling en bauer.

Basis

Omdat het een niet -selectief voedingsmedium is, is het uitstekend voor de groei van de meeste pathogene bacteriën.

Aan de andere kant zorgt de eenvoudige samenstelling ervoor dat stoffen er gemakkelijk over verspreiden, een essentieel kenmerk voor de gevoeligheidstest door de schijfverspreidingsmethode.

Een andere van de kenmerken is dat het een laag aantal remmers bevat, waardoor sulfonamide, trimetoprim en tetracyclines kunnen evalueren.

Er moet echter rekening mee worden gehouden dat het medium aan bepaalde voorwaarden moet voldoen om het goede functioneren te garanderen, waaronder:

De pasvorm van de pH, de diepte van de agar en de juiste concentratie van Timina, Timidina, CA⁺⁺, Mg⁺⁺ en Zn⁺⁺.

U moet ook weten dat de methodologie gestandaardiseerd is en daarom alle parameters, zoals:

De concentratie van het inoculum, de concentratie en het behoud van antibioticaregingen, de plaatsing van het juiste aantal schijven op de agar, de afstand tussen de ene schijf en de andere, de strategische plaatsing van bepaalde antibiotica, de atmosfeer, de temperatuur en de tijd van incubatie.

Voorbereiding

Weeg 37 gr van de medium Müeller Hinton uitgedroogd en los op in 1 liter gedestilleerd water. Verwarm de omgeving terwijl je roert om je ontbinding te helpen. Kook 1 minuut.

Breng naar de autoclaaf om 15 minuten bij 121 ° C te steriliseren. Bij het verwijderen van de autoclaaf moet de fixola in een badkamer worden geplaatst van María tot 50 ° C tot koel. Giet 25 tot 30 ml in Sterri Sterile 10 cm diameter platen.

De platen moeten worden achtergelaten met een gemiddelde dikte van 4 mm (ideaal), een bereik van 3-5 mm is toegestaan.

Als u bloed wilt voorbereiden met behulp van Müeller Hinton, wordt 5% steriel lamsbloed als basis gegoten.

Kan u van dienst zijn: glyceraldehyde 3-fosfaat (G3P): structuur, functies

De uiteindelijke pH van het medium moet tussen 7,2 en 7,4 zijn.

Investeer en bewaar in koelkast, tot gebruik. Laat de plaat de omgevingstemperatuur nemen voordat u gebruikt.

De kleur van het voorbereide medium is licht beige.

Toepassingen

Het wordt gebruikt om het antibiogram of de gevoeligheidstest voor antibiotica uit te voeren tegen de meest snelle groeipathogenen.

Als de agar wordt aangevuld met bloed, dient het om het antibiogram van veeleisende micro -organismen uit te voeren zoals: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus SP, Neisseria Meningitidis, onder andere. Het is ook gebruikt om te isoleren Legionel Pneumophila.

Antibiogramtechniek

Voordat het antibiogram wordt uitgevoerd, moet een bacteriële oplossing die gelijkwaardig is aan 1,5 x 10 worden bereid⁸ Cellen.

Om dit te doen, worden 3 tot 4 kolonies zuiver gewas genomen en gesuspendeerd in een drietych soja -bouillon of in Müeller Hinton -bouillon, incubeert gedurende 2 tot 6 uur en de concentratie met een steriele zoutoplossing wordt aangepast, waarbij deze wordt vergeleken met een Mac Farland -patroon van 0,5%.

Als ze micro -organismen eisen, kunnen kolonies direct worden opgeschort tot de concentratie van 0,5% Mac Farland. Vervolgens wordt de Müeller Hinton -plaat gezaaid met een wattenstaafje geïmpregneerd met de bacteriële oplossing bereid.

Om dit te doen, wordt het wattenstaafje ondergedompeld in de oplossing en vervolgens wordt het overtollige vloeistof verwijderd door druk tegen de buiswanden. Onmiddellijk nadat het wattenstaafje door het hele oppervlak gaat, zonder weg te gaan zonder aan te raken, wordt de plaat lichtjes gedraaid en weer zaaien. De bewerking wordt nog 2 keer herhaald.

Laat het 10 minuten staan ​​en plaats dan de antibioticakalken met een steriele klem, waardoor een ruimte van 24 mm tussen de ene en de andere blijft. Nadat u elk album op de agar hebt geplaatst, drukt u ze met de klem op om ervoor te zorgen dat ze goed zijn bevestigd.

Na het proces wordt de plaat geïnvesteerd en wordt 35-37 ° C gedurende 16 tot 18 uur geïncubeerd in aerobiose. Als het een veeleisend micro -organisme is, kan het micro -overdaad verdienen en als het antibiogram oxacilline -schijven bevat, moet het worden gelezen na 24 uur.

Om de diameter van elke halo te meten, wordt een regel gebruikt. De resultaten moeten worden vastgelegd in MM. Vervolgens zijn de waarden verkregen met de tabellen van snijpunten gepubliceerd door de huidige CLSI -handleiding gecorreleerd.

Rapporteer als gevoelig (s), tussenliggende (i) of resistent (R), zoals het geval kan zijn.

Antibiotica worden geselecteerd volgens het geïsoleerde micro -organisme en het type infectie dat produceert.

Kan u van dienst zijn: niveaus van organisatie van levende wezens

Soms moet in gedachten worden gehouden om de strategische plaatsing van antibiotica te laten zien om fenotypische resistentiepatronen te tonen.

Strategische plaatsing van schijven op Müeller Hinton Agar

Voor Enterobacteria moet de clavulaanzuurschijf worden geplaatst voor de 3e en 4e generatie cephalosporines. Een eiervormige verbreding geeft aan dat de spanning een producent is van uitgebreide spectrum beta -lactamasen (bloeden). Dit betekent dat de patiënt niet met cephalosporine moet worden behandeld.

In Staphylococcus is het belangrijk.

Een halo -resistent in erytromycine en een vlakheid in de clindamycine -halo geeft aan dat de stam een ​​induceerbare weerstand heeft tegen clindamycine, stam (ric). Dit betekent dat een clindamycinebehandeling niet effectief zal zijn.

Voor de zoektocht naar AMP C -stammen die induceerbaar zijn in Enterobacteria en sommige niet -fermenterende gram negatieve bacillen, ceftazidime, cefoxitine of piperaciline -schijf.

Een halo bruin op een van de schijven waarmee imipenem wordt geconfronteerd, duidt op de aanwezigheid van induceerbare versterker C.

Voor de zoektocht naar constitutieve AMP C, een riool van 500 µg met Cloxacilline Disc. Een genezige breedte in een van de cefalosporines duidt op positiviteit.

U kunt ook de cloxacilline -schijf vervangen door een 9 mm van het Whatman -filterpapier nr. 6 geïmpregneerd met boorzuur (400 µg) met een afstand van 18 mm. Het wordt geïnterpreteerd gelijk aan de vorige.

Ten slotte, om de productie van metalobethalactamasen te onderzoeken, vooral in Pseudomonas aeruginosa, Een schijf geïmpregneerd met 10 µl ethylendiaminteraazijnzuur (EDTA 750 µg) en thioglycolzuur (SMA 300 µg) wordt gebruikt, die geconfronteerd wordt met de imipenem- en meropenemschijven, op een afstand van 15 mm.

De test is positief als er een verbreding is van Imipenem of Meropenem Halos naar het EDTA/SMA -album. Dit resultaat moet worden bevestigd door de aangepaste Hodge -test.

Deze methode bestaat uit het inoculeren van een spanning van Escherichia coli ATCC 25922 op de Müeller Hinton -plaat. Een imipenemschijf in het midden van de plaat wordt geplaatst en vervolgens wordt een stro van de schijf in de periferie gemaakt met de spanning van P. aeruginosa verdacht. U kunt maximaal 4 stammen per plaat proberen.

De test zal positief zijn als er een vervormingszone van de imipenem -halo rond de stro is.

Het kan u van dienst zijn: Neolamarckismo: Achtergrond en kenmerken

Oorzaken van onjuiste resultaten

-Slecht bewaarde antibiotica -schijven kunnen valse weerstand veroorzaken. De oxacilline -schijf is bijvoorbeeld zeer kwetsbaar voor temperatuurveranderingen.

-Een pH van het medium onder de aangegeven (zuur) produceert kleinere halo's in aminoglycosiden en macroliden (risico op valse weerstand) en grotere halo's in penicilline, tetracycline en novobiocine (risico op valse gevoeligheid).

-Als de pH boven de aangegeven (alkalische) is, worden de hierboven beschreven effecten geïnvesteerd.

-De media met hoge thymine- en thymidineconcentraties beïnvloeden de sulfonamide en trimetoprim -remming hals aanzienlijk verminderen.

-Hoge concentraties calcium en magnesium produceren valse weerstand van aminoglycosiden, polymixine B en tetracyclines voor stammen van Pseudomonas aeruginosa.

-Lage concentraties calcium en magnesium produceren valse gevoeligheden van aminoglycosiden, polyxine B en tetracyclines voor stammen van Pseudomonas aeruginosa.

-De aanwezigheid van zink beïnvloedt de resultaten van carbapenems -schijven (imipenem, meropenem en ertapenem).

-De dikte van het medium onder 3 mm produceert resultaten van valse gevoeligheid, terwijl een dikte boven 5 valse weerstand zal veroorzaken.

-De mobilisatie van schijven in het antibiogram zal vervormde halo's geven, omdat de ontslag van antibiotica onmiddellijk is.

- Zeer zwakke inoculairs beïnvloeden de resultaten, omdat er geen uniforme of convergerende groei in de agar zal zijn, een noodzakelijke voorwaarde om remmingshalo's te meten, naast de halo's kunnen groter dan normaal geven.

-Inoculo's te geladen kunnen kleinere dan normale hals geven.

-Respecteer de afstand tussen schijven niet waardoor de ene halo overlapt met de andere en kan niet correct worden gelezen.

-Incuberen met CO₂ Verhoogt de halo's van tetracycline en meticilline -schijven.

-Incuberen bij temperaturen onder 35 ° C produceert grotere halo's.

-Bloedaggregaat vermindert de grootte van de sulfamide -halo.

Beperking

De gevoeligheid van een antibioticum aangetoond in het antibiogram tegen een micro -organisme (In vitro) Het is geen garantie dat het zal werken In vivo.

QA

Om te weten of het medium de juiste hoeveelheid timina bevat, moet een stam worden gezaaid van Enterococcus faecalis ATCC 29212 en bewijst de gevoeligheid voor trimetoprim sulfametoxazol (SXT), het moet een gelijke halo of> 20 mm geven om bevredigend te zijn.

Referenties

1. Cona e. Voorwaarden voor een goede gevoeligheidsstudie door middel van verspreidingstest. Rev Chil Infect, 2002; 19 (2): 77-81
2. Britania Laboratories. Müeller Hinton Agar. Beschikbaar op: Britanialab.com